全 文 ：降的趋势 ,分析原因可能是在(37±0 . 5) ℃条件下 ,
高浓度的 SDS 能与部分辛伐他汀生成沉淀 ,使其游
离药物浓度降低的原因 ,而低浓度的 SDS不足以和
辛伐他汀生成沉淀 ,故本实验选择0. 2%SDS 磷酸
盐缓冲液作为溶出递质 ,得到了较好的实验结果。
参考文献:
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[收稿日期] 2005-09-08
[ 作者简介] 雷霆雯 ,女 ,硕士 ,副教授 ,电话:13984153335 , E-mai l:lei tw@sina. com
大青叶对小鼠肝脏 CYP2E1酶活性及信使核糖核酸表达的影响
雷霆雯 ,李红梅 ,许庆忠 ,吴宁 ,吴青青　(贵阳医学院生物化学与分子生物学教研室 ,贵州 贵阳 550004)
[ 摘要] 　目的:了解大青叶对细胞色素 P450 2E1(CYP2E1)酶活性及其信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。方法:以小鼠为研究
对象 , 实验组按每天 7. 8 g kg- 1 d-1和 0. 78 g kg -1 d- 1大青叶提取液灌胃 , 对照组给予生理盐水。于 3 , 6 , 9 d 后处死 ,提取肝微
粒体 , 通过测定苯胺羟化酶反映 CYP2E1 酶活性;运用反转录 PCR(RT-PCR)技术检测 CYP2E1 转录水平。结果:实验组小鼠肝
微粒体 CYP2E1 酶活性增加 , 于第 3 天达高峰 ,诱导率在4. 96%～ 84. 27%之间;各组 CYP2E1 与 β-Actin RT-PCR扩增条带像素
灰度的比值差异无显著性。结论:大青叶提取液能使小鼠微粒体 CYP2E1 酶活性增加 ,但对其转录水平无影响。
[ 关键词] 　大青叶;细胞色素 P450 2E1;信使核糖核酸
[中图分类号] R96　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2006)09-1095-03
Effects of the activities and mRNA level of CYP2E1 in Mouse Liver Microsomal by Folium Isati-
dis
LEI Ting-wen ,LI Hong-mei ,XU Qing-zhong ,WU Lin ,WU Qin-qin(Depar tment of Bio chemistr y and Mo lecular
Bio lo gy , Guiyang Medical Co lleg e , Guizhou Guiy ang 550004 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To investiga te the effects of Fo lium Isatidis on the activity and mRNA expression o f CYP2E1 in
mouse live r micro some.METHODS　Fo lium Isatidis w as administered intrag astrally to mice at do ses of 7 . 8 g kg -1 d- 1 and
0 . 78 g kg - 1 d- 1 for 3 , 6 o r 9 consecutive day s. Contro lled g roup w as g iven by 0 . 9% NaCl solution. . Then the enzyme ac tivities
of CYP2E1 in the live r micro some we re determined by spec trophotome try. The m RNA leve ls o f CYP2E1 was a ssayed with RT-
PCR. RESULTS　 The enzyme activity of CYP2E1 w as significantly induced by Fo lium Isatidis , ranging from 4 . 96% to
84 . 27%, the time course revealed that the induction r eached pla teau level at 3 day;There w ere no diffe rences a t the rates of the
mRNA level of CYP2E1 fo rβ-Actin between the experimental and contro lled g roups.CONCLUSION　Fo lium I sa tidis could in-
crea se the activities of CYP2E1 markedly and did not induced the expression of m RNA .
KEY WORDS:Fo lium isatidis;CYP2E1;mRNA
　　细胞色素 P450是细胞色素 P450(cy to chrome
P450 ,CYP450或 P450)基因超家族编码的一组酶
蛋白 ,广泛存在于细菌 、真菌 、植物和动物中 。人类
的CYP450有 18个家族和 42个亚家族[ 1] 。微粒体
CYP450是一类主要的 CYP450 ,由 CYP1 , CYP2 ,
CYP3 , CYP4 , CYP17 , CYP19 和 CYP21 等多个基
因家族组成 ,主要参与内外源物质的生物转化 ,以肝
脏中的 CYP450含量最高[ 2. 3] 。
体内外研究表明 ,多种 CYP450的酶活性可因
某些药物 、环境因素甚至食物成分等的影响而发生
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改变 。CYP450的活性可以增加 ,即发生酶诱导 ,也
可以降低 ,即发生酶抑制[ 4] 。大青叶(Folium isat i-
dis ,FS)为十字花科植物菘蓝的叶 ,其化学成分主要
含有靛玉烷 B 、靛蓝 、靛玉红 、色氨酸 、色氨酮等 。味
苦性寒 ,具有清热 、解毒和凉血之功效。本实验通过
大青叶提取液对小鼠肝微粒体 CYP2E1 酶活性及
其 mRNA 表达影响的研究 , 以了解大青叶对
CYP450酶所代谢药物的影响及在癌症的发生和预
防中的作用。
1　材料
1. 1　药品与试剂　大青叶(贵阳市药材公司 ,产地
贵州 ,采于 5 月中旬);牛血清白蛋白 、苯胺 、DNA
Marker 、琼脂糖 、TaqDNA 聚合酶 、脱氧三磷酸核苷
(dN TP)、 Trizo l、焦碳酸二乙酯(DEPC)、 RNA 酶
抑制剂 、M-Mulv 反转录酶(均购于上海生工生物工
程技术服务有限公司);辅酶 Ⅱ(NADP)(AMRES-
CO公司出品);6-磷酸葡萄糖二钠(Sigma产品);6-
磷酸葡萄糖脱氢酶(Worthing ton 公司);其他化学
试剂均为分析纯;
1.2　RT-PCR引物[ 7] 　由上海生工生物工程技术服
务有限公司合成 , Oligo d(T)16 ,CYP2E1 引物。上游
(up primer):5-GCGGTCT TGGCATCACCGT-3。下
游(down primer):5-AGGTAT-3。下游(down prim-
er):5-GGCCATCTCCTGCTCGAAGT-3;
1. 3　实验动物　昆明种小鼠(贵阳医学院动物实验
中心)。
2　方法
2. 1　大青叶煎剂的制备　取大青叶 30 g ,加水使大
青叶刚好被淹没 ,浸泡 15 min ,中火煎熬 15 min ,过
滤 ,重复 3 次 ,最后浓缩 ,使其生药含量为0. 43 g
mL- 1 ,4 ℃保存备用。
2. 2　动物分组与给药　昆明小鼠 , ♂,体重(20±2)
g ,随机分为对照组及 6 个实验组 ,每组 10只 ,实验
组按0. 78 g kg -1 d-1(低剂量组)及 7. 8 g kg - 1
d-1(高剂量组)灌胃给药 ,对照组给予生理盐水。于
给药第 3 ,6 , 9天处死 。
2. 3　微粒体提取　采用钙沉淀法制备肝微粒体悬
液 ,具体过程按文献[ 6] 进行 。肝微粒体的蛋白浓度
采用 Low ery 法测定。
2. 4　CYP2E1酶活性的测定　通过测定苯胺羟化
酶(ANH)活性[ 8 ] 来反应 CYP2E1酶活性。
2. 5　CYP2E1转录水平检测
2. 5. 1　肝组织总 RNA 的提取　按上海生工公司
的 T rizol 试剂说明书提取肝脏总 RNA , 沉淀用
DEPC 水溶解 ,分别在 260 nm 及 280 nm 处测吸收
度值 ,并求 A260 /A280比值 。
2. 5. 2　cDNA 第一链的合成　按 M-Mulv Reve rse
Transcriptase 说明书合成。
2. 5. 3　PCR扩增体系　总体积 25 μL ,预变性 94
℃ 5 min ,变性 94 ℃ 30 s ,退火 56 ℃ 1 min , 延伸
72 ℃ 1 min ,终末延伸 72 ℃ 7 min ,30个循环[ 7] 。
2. 5. 4　琼脂糖凝胶电泳鉴定 PCR产物　制 2%琼
脂糖凝胶(含 EB 5 μg mL-1), 100 V 电压电泳 45
min ,在凝胶成相分析系统上观察结果并记录。计
算 CYP2E1与 β-Actin RT-PCR扩增条带像素灰度
的比值 ,作为 mRNA 表达的相对水平 。
3　结果
3. 1 　CYP2E1 酶活性　大青叶对小鼠肝微粒体
CYP2E1 酶活性的影响结果见表 1 。给药组
CYP2E1酶活性明显增加 ,给药 3 ,6 , 9 d 低剂量和
高剂量组诱导率分别为46. 95%与84. 27%,28. 34%
与41. 68%, 4. 96%与10. 90%,3 d组酶活性高于 6
d组和 9 d组 。
表 1　小鼠肝微粒体 CYP2E1酶活性(nmo l min - 1 mg - 1)
( x±s , n=10)
Tab 1　The activities o f CYP2E1 in mice live r micr osome( x
±s , n=10)
组别 给药 3 d 给药 6 d 给药 9 d
对照组 0 . 08±0 . 03 0 . 08±0 . 03 0 . 08±0 . 03
低剂量组 0. 13±0. 017b 0 . 11±0 . 04 0 . 08±0 . 04
高剂量组 0. 16±0. 05b 0. 12±0. 03a 0 . 09±0 . 03
注:与对照组比较 , aP<0. 05 , b P<0. 01
3. 2　CYP2E1基因的 RT-PCR结果分析　通过比
较各组 RT-PCR扩增条带像素灰度比值发现 ,实验
组与对照组的 CYP2E1 mRNA 表达水平差异无显
著性 ,说明大青叶对 CYP2E1转录水平无影响。结
果见图 1 、表 2。
图 1　CYP2E1的 RT-PCR结果
M:100 bp DNA Marker;L3 、L6 、L9:低剂量组的 3 、6 、9 d;H 3 、H6 、
H 9:高剂量组的 3 、6 、9 d;对:对照组;β :β-Act in
Fig 1　The resu lt of CYP2E1 RT-PCR
M:100 bp DNA Marker;L3 、L6 、L9:th e 3 、 6 、9 d of low-dose
group;H3 、H 6 、H9:T he 3 、6 、9 d of high-dose g rou p;对:con trol
group;β :β-Act in
表 2　CYP2E1mRNA 表达的相对量
Tab 2　The rela tive amount of CYP2E1 mRNA expression
组别 给药 3 d 给药 6 d 给药 9 d
对照组 0. 72 0. 72 0. 72
低剂量组 0. 73 0. 74 0. 73
高剂量组 0. 74 0. 74 0. 71
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4　讨论
CYP2E1是一种受乙醇诱导的 CYP450亚族 ,
存在于人和鼠等动物的肝脏及其他组织器官中 ,参
与许多外源化合物在体内的代谢 ,包括小分子的药
物 ,例如对乙酰氨基酚 、异烟肼 、CCl4等[ 2] 。本研究
发现 ,大青叶可诱导 CYP2E1 的酶活性 ,但不呈剂
量-反应依赖性及时间-反应依赖性;而且大青叶并
未对 CYP2E1 转录产生明显的影响 ,推测其诱导机
制是通过稳定 CYP2E1酶蛋白 ,减少 CYP2E1的降
解和代谢延长其作用而起诱导作用[ 9] 。研究表明 ,
在 CYP2E1催化过程中 , 常发生催化酶的降解现
象[ 9] 。本实验中 6 、9 d给药组的酶活性与 3 d 给药
组相比较出现酶活性逐渐递减的现象可能与该机制
有关 。大青叶对 CYP2E1的诱导作用可能会影响
CYP2E1代谢的药物的疗效 , ,如在服用抗结核药异
烟肼的同时服用大青叶 , 可能会因为大青叶对
CYP2E1的诱导作用使异烟肼的体内清除率加快而
降低药效 。同时 CYP2E1还将一些相对分子质量
低的前致癌物和前毒物如亚硝胺和偶氮化合物 N-
亚硝基双甲胺代谢成毒物或致癌物[ 2] ,如果长期服
用大青叶可能会增加这些物质的毒性 ,导致肝损伤
或肿瘤的发生 。
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[收稿日期] 2005-10-28
[ 作者简介] 帅武平 ,男 ,学士 ,主管药师 ,电话:0576-56722167 , E-mail:w pshuai@hotmail . com
水杨酸及其衍生物透皮吸收的研究
帅武平 ,李盈　(浙江大学医学院附属第一医院 , 浙江 杭州 310009)
[ 摘要] 　目的:研究水杨酸及其衍生物的透皮吸收。方法:用丙二醇作促透剂 ,用改良的 F ranz 扩散池进行离体大鼠皮体外释
放试验 ,紫外法测定累积释放量 , 计算平均透皮速率。结果:含丙二醇乳膏中各药物的透皮速率分别为:水杨酸 38 . 722 5 μg
cm2 h- 1 , 赖氨匹林16 . 882 1μg cm2 h- 1 ,阿司匹林10. 121 5 μg cm2 h-1 ;不含丙二醇乳膏各药物透皮速率分别为:水杨酸
29 . 765 7 μg cm2 h- 1 ,赖氨匹林10. 690 0 μg cm2 h -1 , 阿司匹林6. 965 3 μg cm2 h- 1 。结论:两种乳膏水杨酸 、赖氨匹林 、阿
司匹林透皮速率差异显著;丙二醇对赖氨匹林和阿司匹林均有显著的促透作用。
[ 关键词] 　水杨酸;赖氨匹林;阿司匹林;透皮吸收;丙二醇
[中图分类号] R969　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2006)09-1097-03
Transdermal absorption of salicylic acid and its derivatives
SHUAI Wu-ping , LI Ying (The first A ffiliated H ospital of Zhejiang Univer sity , Medical Co llege , Zhejiang Hangzhou
310009 , China )
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study tr ansdermal abso rption of salicylic acid and its derivatives. METHODS　The modified
Franz diffusing ce lls and rat skin w ere employed , and propy lene g ly col w as used as tr ansde rmal enhancer. The accumulative pe r-
meation amounts of two creams of salicy lic de riva tives w ere determined by UV me thod and the average transdermal r ate w as
calculated. RESULTS　The transdermal ra te of salicy lic acid , ly sine-aspirin , and aspirin in c ream added with propy lene g ly col
were 38. 722 5 , 16. 882 1 , and 10 . 121 5 μg cm2 h -1 , respectively . H ow ever , in propy lene gly col-free cream , the rates were only
29 . 765 7 , 10 . 690 0 , and 6 . 965 3 μg cm2 h -1 , respectively . CONCLUSION　The transdermal r ates of two cream fo rmula tions
were significantly different. P ropy lene glyco l could notably promo te the transdermal pe rmeation of ly sine-aspirin and a spirin.
1097 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 9期 Chin H osp Pharm J , 2006 Sep , Vol 26 , No. 09