全 文 ：H P LC
一
M S Z 鉴定大青叶水提液中的 5 种化学成分
刘 瑞 哀 波 刘志刚 李小岑 熊志立 李发 美 ’
( 沈阳药科大学药学院 , 沈阳 1 0 16 )
摘要 目的 :鉴定大青叶水提液中的化学成分 。 方法 :大青叶的水提液经 HP L C 分离后 , 收集各色谱峰的馏分
进行二级质谱分析 , 并和胞昔 、 尿昔 、 鸟昔 、 黄嗦吟和次黄嗦吟对照品的水溶液进行比较。 结果 : 大青叶水提液
H P L C 中的 5 个色谱峰分别与胞昔 、尿昔 、 鸟昔 、黄嗦吟和次黄嗓吟对照品的 t R 和 U v 光谱一致 ,并具有相同的二级
质谱碎片离子 。 结论 :大青叶中含有胞昔 、次黄嚓吟 、尿昔 、黄嗓吟和鸟昔等 5 种成分 。
关键词 大青叶 ;胞昔 ;尿昔 ;鸟昔 ;黄嗓吟 ;次黄嗓吟 ; H P Lc 一 M S ,
大青叶为十字花科植物秘蓝 sI at is idn 妙ict a
oF rt
. 的干燥叶 ,具有清热解毒 ,凉血消斑的功效 〔 ’〕 。
大青叶中含秘蓝 昔 (大青素 B , Isa tan B ) 、 靛玉红
( In d iur b i n )和靛蓝 ( In d i g。 ) 〔’ 〕 , 尚含芥昔 ( G l u e o b ar s -
s ie i n )
、 新芥昔 ( N e o gl u e o b ar s s i e i n ) 、 l 一磺基芥昔 ( l -
S u p h o
一
3
一
in d o l y lm e th y l g l u e o s i n o l a t e ) 及游离的叫噪
醇 、 氧化酶 、 腺昔 ( A d en os ien ) 以及铁 、 锰等微量元
素。 大青叶中还含有苯甲酸 、 邻氨基苯甲酸 3j[ 等 ,
但对于大青叶中的核昔类成分除腺昔外 , 尚无文献
报道 。 本实验采用 R P 一H P Lc / M S , 法 , 并与对照 品
进行对照 ,首次鉴定了大青叶中的 5 种成分 : 胞昔 、
次黄嗓吟 、尿昔 、黄嗓吟和鸟昔 , 为大青叶的质量控
制方法提供新的依据 。
1 仪器与试药
aJ sc
o 液相色谱仪 , 包括 Jas co UV习 75 检测器 ,
J
a s e 。 P tJ 习 8 0 泵 ;美国 r i n n i g a n 公司 ST Q 型质谱仪 。
尿昔 ( 887 一0 001 , 中国药品生物制品检定所 ) ,
胞昔 ( 2 6 6 0 8 R u k a ) ,鸟昔 ( 2 0 0 10 8 10 , 中国医药集团
上海化学试剂公司 ) , 次黄嗦吟 ( 14 0 6 6 1一2X() 4 0 2 , 中
国药品生物制品检定所 ) ,黄嗓吟 ( 4 0 662 一0 3 0 1 , 中
国药品生物制品检定所 ) 。 甲醇为色谱纯 ( 山东禹
王实业有限公司 ) ;水为自制重蒸水 ;大青叶产于安
徽省太和县 , 由沈阳药科大学孙启时教授鉴定为十
字花科植物秘蓝 sI 以 15 i n d igo ict a oF rt . 的干燥叶 。
2 色谱条件
色谱柱 : D i a m o n s i l C : : ( 5 林m , 20() m m x 4 . 6 m m ) ,
流动相 : 甲醇一水 (5 : 95 , v / v ) ,流速 : 1 . o ml · m in 一` ,
柱温 : 室温 ,检测波长 : 254 n m 。
3 质谱条件
大气压化学电离离子化源 ( AP CI ) ;正离子检出
模式 ;加热毛细管温度 : 30 ℃ ;气化室温度 : 40 ℃ ;
鞘气 ( N : ) : 2 0 A br ;辅助气 ( N Z ) : 3 Abr ;注射泵直接进
样 。
4 供试品溶液
称取大青叶样品 1 . 0 9 , 加水 20 耐 ,煎煮两次 ,
·
77 2
·
每次 l h , 合并两次滤液 , 定容至 50 ml 容量瓶中。
溶液经 0 . 45 林m 微孔滤膜过滤 ,取续滤液备用 。 在
上述色谱条件下进样 ,并收集液相色谱的洗脱液 ,浓
缩后进行质谱分析 。
5 对照品溶液
分别称取胞昔 、 次黄嚷吟 、 尿昔 、黄嗓吟和鸟昔
对照品适量于 25 ml 容量瓶中 , 用重蒸水溶解 、 定
容 。 进行 H PL C 和 M s , 分析 。
6 结果
6
.
1 供试品溶液 H P LC 分析 供试品和对照品的
液相色谱图见图 1。 在本色谱条件下 , 供试品溶液
中各成分之间得到了 良好的分离 , 与胞昔 、 次黄嗦
吟 、尿昔 、 黄嚎吟和鸟昔各对照品的保留时间相同 ,
紫外光谱也相同 ,并且在供试品溶液中加入对照品
溶液后 , 各组分均得到了相应的色谱峰增益 。 提示
供试品溶液中的各组分可能是这些成分 。但由于各
扩一一一一一一气尸一一一一一一万
忧 . 时 .
图 1 对照品 ( A )和大青叶水提液 ( B )色谱图
a
. 胞昔 b . 次黄嗦吟 。 . 尿昔 d . 黄嚓吟 e . 鸟昔
中药材第 28 卷第 9 期 20 5 年 9 月
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2005. 09. 013
表 1 液相色谱洗脱液的主要二级质谱碎片归属
二业曰ó)卜针片/ z要翰已质胭幼碎 m主级存(r分子量
化合物 归属
[ M+ H
一
ri b〕十
[ M+ H
一
H N C」千
[ M+ H
一
ri b〕+
仁 M+ H 一H O CN 」+
[ M+ H
一
ri b」斗
2 0飞ù,山11百1.. .且`J一1.心二曰且.盈
成分的紫外光谱之间差别不明显 , 专属性差 ,难以确
证 ,因此 , 收集液相色谱洗脱液 ,进行二级质谱分析 。
6
.
2 液相 色谱洗脱物的质谱 ( M S Z )分析 液相色
谱洗脱物和各对照品的二级质谱图见 图 2 。 各液相
色谱洗脱物的二级质谱归属结果见表 1 。
7 讨论
7
.
1 由质谱解析结果及与对照品保留时间 、 紫外
光谱的对比 ,可确认大青叶中含有胞昔 、 次黄嗓吟 、
尿昔 、 黄嗦吟 、 鸟昔等 5 种成分 。
胞昔 e y t id i n e 24 3
次黄嗦吟 h y卯xan ht i n e 13 6
尿昔 iur id en 2 4 4
黄嗓吟 x an th i n e 15 2
鸟昔 即an o s i n e 28 3
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图 2 对照品 ( 1) 和各液相色谱洗脱物 (2) 的 M S Z 图
A
. 胞昔 B . 次黄嗓吟 C . 尿昔 D . 黄嗦吟 E . 鸟昔
7
.
2 本实验中采用的是收集液相色谱洗脱物进行 化学成分的存在 。 本文对大青叶样品中的几个色谱
M S分析 , 由于收集的液相色谱洗脱物浓度低 , 同时 峰从保留时间 、色谱增益 、紫外光谱图和特征离子碎
这些物质尤其是黄嗦吟的质谱响应较差 , 所以得到 片四方面验证其为胞昔 、 次黄嗓吟 、尿昔 、黄嘿吟 、鸟
的一级全扫描质谱图中各化学成分的准分子离子峰 昔 。
不明显 ,但从图 2 各洗脱物和相应对照品的二级质 —谱图中可以看出二者具有相同的主要碎片离子 , 所 注 : 国家科技攻关计划课题 (oZ lB幻 l0 5A 6) 子课题以本文用更具有特征性的二级质谱验证了上述几种 ’ 通讯作者中药材第 28 卷第 9 期 20 5 年 9 月 · 7 73 ·
参 考 文 献
1国家药典委员会 .中国药典 .一部 .北京 :化学工业出
版社 , 2X() 5 : 16
2 苗明三 ,等 . 现代实用中药质量控制技术 . 北京 : 人民
卫生出版社 , 2《XX) : 61 6
3 王寅 ,等 . 高效毛细管电泳法用于不同居群大青叶药材
的鉴别 . 中草药 , 2《X刃 , 3 1 ( 7 ) : 54 7
( 2 0 0 5 一 0 4 一 18 收稿 )
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u s e x tar e r o f sI a乙。 艺砚 J钾对ic a oF rt . b y H PL C , th e e lu a t e s of 6 v e 匹a k s * er e o lle e t e d s e p aJ 旧 : iv e l y 。 n d a n al y s司 by M s , . UV s砂 e -
tar a n d M S Z w e er e o m p a er d w i th th o s e o f er fe er n e e s t a n d a dr s o f e y t i d in e
, u r id in e
,即 an o s i n e x a n t h in e a n d h y oP x an th i n e . R e s u l t s : Eac h
H P Le
e l u t e o f th e a q u e o u s e x t ar e t h a d s a m e re t e n t io n t i m e
,
u v
s p e e tar
a n d afr 脚 e n t p a t t e nr i n th e M s Z s伴 e utr m a s th e e o er s即 n d in g
s tan d训 5 . C o n e l u s i o n : Fi v e e o n s t it u e n t s o f th e a q u e o u s e x rar e t of 介a t is i dn 卿 zica oF rt . a er id e n t iif e d a s e y t i d i n e , h yp o x a n th in e , u ir id n e ,
x a n t h i
n e a n d 四 a n o s i n e .
K e y w o dsr
sI a t is idn 卿` ic a F o rt . ; C y t id i n e ; U r id i n e ; G u a n o s i n e : x a n th in e ; H y即 x a n th i n e ; H p LC 一M S Z
猴耳环化学成分的研究
王永刚 淡 墨 李咏华 苏薇薇
( 中山大学广州现代中药质量开发中心 ,广州 5 10 2 75 )
摘要 目的 :研究猴耳环 ( iP thec el ob iu m e勺了祀 a iar B en ht . )的化学成分 。 方法 : 采用多次硅胶柱层析和葡聚糖凝
胶柱层析进行分离纯化 ,并通过理化性质 、波谱分析鉴定结构 。 结果 : 从猴耳环中分离得到两个成分 ,鉴定为连苯
三酚 ( p y r o g a l lo l )和懈皮昔 ( q u e cr i t ir n ) 。
关键词 猴耳环 ;连苯三酚 ;懈皮昔
猴耳环 ( P it h e ce lo bi u m e加 e a r ia B e n t h . )为含羞
草科猴耳环属植物 ,又名落地三钱 、 蛟龙木 、鸡三树 、
围诞树 ,其叶 、 果实 、 种子均可人药 , 主要分布于我国
的华南 、西南地 区 , 民间用 于烧伤 、 烫伤的治疗川 。
现代临床主要用于治疗上呼吸道感染 、 急性胃肠炎 、
急性咽喉炎 、 急性扁桃体炎 , 亦可用于细菌性痢疾 。
但对猴耳环药材化学成分的研究只有没食子酸的报
道 ,本文对猴耳环药材化学成分进行了研究 ,应用现
代分离技术 ,从其 95 % 乙醇提取物中分离纯化得到
了 2 个化学成分 , 经用现代波谱分析等方法鉴定为
酸性成分连苯三酚 ( yP r go al al )和黄酮类成分撇皮昔
( Que cr itr n)
。 它们均系首次从该植物中分离得到 。
1 仪器与试药
北京泰克 X 4 显微熔点仪 (未校正 ) ; 日本岛津
UV 2 5 0 l PC 紫外一可见吸收光谱仪 ; 德国 BRU K E R
EQU IN OX 5 型傅里叶变换红外光谱仪 ;美国 V iar -
an INO V A s o NB 超导核磁共振谱仪 ;英国 V G ZA B -
H S 双聚焦磁质谱仪 。 柱层析用 S e p h a d e x L H一0 为
·
7 7 4
·
A m e r s h a m B i o s e i e n e e s ;薄层层析用硅胶和柱层析用
硅胶 ( or o 目 )均为青岛海洋化工厂生产 , 其他试剂
均为分析纯 。 所用药材均采集于广东博罗县公庄
镇 。
2 提取与分离
取猴耳环药材 1 . 5 k g , 剪到 1 c m 左右后用 95 %
乙醇冷浸提取 2 次 , 每次两天 ,合并浸提液 , 浓缩得
浸膏。 对该浸膏进行硅胶柱层析分离 , 先以石油醚 -
乙酸乙醋梯度洗脱 ,其中石油醚 ·乙酸乙醋 ( 5 0 : 50 )
洗脱部分再经多次硅胶柱层析分离纯化得化合物 I
晶体 ;再用乙醇一乙酸乙脂梯度洗脱 , 乙醇 一乙酸乙醋
(20
:
80 )洗脱部分先经多次硅胶柱层析 ,然后经过
多次葡聚糖凝胶柱分离纯化 , 得化合物 n 晶体 。
3 鉴定
化合物 I : C 6 H 6 0 3 , 白色针状结晶 (氯仿 ) ,可溶
于氯仿 、 乙酸乙脂 、 丙酮 , m p 13 0 一 1 3 3℃ 。 U V入黑岁H
n m : 2 6 7
.
5
。
I助黑e m 一 , : 3 5 3 6 (中等强度 , 尖锐 , 游离 -
O H )
,
3 34 0
,
3 2 4 9 (高强度 , 宽 ,缔和一O H ) , 16 2 2 ( C =
中药材第 28 卷第 9 期 2 0 5 年 9 月