全 文 ：药用植物粗提物对罗汉果花叶病毒病的防治作用研究
林 纬 ,蒙姣荣 ,朱彬 ,黄永禄 ,袁高庆 ,黎起秦＊　(广西大学农学院 ,广西南宁 530005)
摘要　[目的 ]寻找有效防治罗汉果花叶病毒病的方法。 [方法]研究测定 4种药用植物粗提物对罗汉果病毒病的防治作用。 [结果]结
果表明 ,板蓝根、贯众 、大黄和黄芩的粗提取物对罗汉果病毒病的防治效果分别为 73.10%、46.20%、46.20%和 57.60%;板蓝根粗提取
物用水稀释 5、10、50、100和 200倍液对罗汉果病毒病的防治效果分别为 77.48%、59.15%、59.15%、52.14%和 43.69%。 [结论] 该研究
为探讨防治罗汉果病毒病的新途径提供理论依据。
关键词　罗汉果;病毒病;防治;药用植物
中图分类号　S435.67　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)04-01629-02
StudyonPreventionEffectofExtractsfromSeveralMedicinalPlantsonMosaicVirusDiseaseofMomordicagrosvenoriSwingle
LINWeietal　(ColegeofAgriculture, GuangxiUniversity, Nanning, Guangxi530005)
Abstract　 [ Objective] ThepurposeofthisstudywastosearchthemethodofefectivelypreventingmosaicvirusdiseaseofMomordicagrosve-
noriSwingle.[ Method] ThemedicinalplantsofStrobilantheacusia, Nephrolepisauricutata, RheumpahlmatumandScutelariabaicalensiswere
testedforcontrolingmosaicvirusdiseaseofMomordicagrosvenoriSwingleinthisstudy.[ Result] Theresultsshowedthattheextractsoffour
medicinalplantscouldcontrolthedisease.ThecontrolefficacyofStrobilantheacusia, Nephrolepisauriculata, RheumpahlmatumandScutelar-
iabaicalensisonthediseasewas73.10%, 46.20%, 46.20%and57.60%, respectively.Thecontroleficiencyofextractsofthe5, 10, 50,
100and200 timesdilutionofStrobilantheacusiaonthediseasewas77.48%, 59.15%, 59.15%, 52.14%and43.69%, respectively.[ Con-
clusion] ThisstudywilprovidethetheoreticalbasisfornewmethodofcontrollingvirusdiseaseofMomordicagrosvenoriSwingle.
Keywords　MomordicagrosvenoriSwingle;Virusdisease;Control;Medicinalplants
基金项目　广西大学科研基金(X071055)。
作者简介　林纬(1964-),男 ,广西昭平人 ,农艺师 ,从事植物病害及其
防治研究。 ＊通讯作者。
收稿日期　 2008-00-00
　　引起罗汉果花叶病毒病的病原有西瓜花叶病毒 -2罗
汉果株系(Watermelonmosaicvirus-2, WMV-2)、番木瓜环斑病
毒(Papayaringspotvirus, PRSV)和小西葫芦黄化花叶病毒
(Zuchiniyelowmosaicvirus, ZYMV)[1-2] ,受害植株初期叶
片呈黄绿相间的花叶 ,叶片畸形缺刻成线状 ,有的叶肉隆起
呈泡状 、叶缘反卷 ,叶肉肥厚 、粗硬 、腋芽早发而成丛枝 ,果实
受害裂果 、品质差 [ 1-3] 。目前 ,罗汉果花叶病毒病的防治主
要是使用化学药剂 [ 4] ,但防治效果不佳 ,为了寻找有效防治
该病害的方法 ,笔者测定了板蓝根 、贯众 、大黄和黄芩等植物
粗提物对罗汉果病毒病的防治作用 ,为探讨防治罗汉果病毒
病的新途径提供理论依据 。
1　材料与方法
1.1　材料 　板蓝根(Strobilantheacusia)、贯众(Nephrolepis
auriculata)、大黄 (Rheumpahlmatum)和黄芩 (Scutelaria
baicalensis)购于广西南宁市同济大药房;5%可卡宁可湿性粉
剂 ,通用名为盐酸吗啉胍(Moroxydinhydrochloride),青岛海力
尔药业有限公司生产。
罗汉果组培苗由广西大学植物病理学研究室提供 ,罗汉
果组培苗种到营养杯中 ,按常规管理 ,长到 10叶时 ,进行接
种试验。
供试病毒来源于广西大学农学院植病研究室种植在温
室中的罗汉果花叶病毒病的病株。
番木瓜环斑病毒(PRSV),双抗体夹心 ELISADAS-
ELISA检测试剂盒购自美国 Agdia公司。
1.2　方法
1.2.1　供试植物粗提物的制备。将供试植物于 45 ℃下烘
24h,用微型植物粉碎机(天津市泰斯特仪器公司)粉碎 ,粉
碎后用乙醇(供试植物粉剂 50 g+乙醇 320 ml)于索氏提取
仪中 , 82 ℃提取 8h,提取物在 4 ℃的冰箱中保存 ,备用。
1.2.2　罗汉果病毒的接种。取罗汉果病毒病的病叶 1 g于
研钵中 ,加入少量石英砂(400 ～ 600目)和 5 ml磷酸缓冲液
(Na2HPO4-NaH2PO4 , pH值 7.0),研磨成浆 。接种时先撒少
量石英砂于叶片正面 ,用棉签蘸取已研磨好的浆液 ,由叶柄
至叶尖方向轻轻摩擦 ,造成微伤口;接种后 ,用少量清水冲洗
叶面多余的汁液和磨料。
1.2.3　药用植物粗提物对罗汉果病毒病的防治作用测定。
植株接种病毒后的第 2天 ,分别将板蓝根 、贯众 、大黄和黄芩
提取物用水稀释 5倍液 、可卡宁 600倍液 、清水(CK)喷洒到
罗汉果苗上 ,每处理 3次重复 ,每一重复 10株罗汉果苗 ,药
品的用量为每株 10ml药液 ,每隔 7d喷 1次药 ,连续 3次 ,于
最后一次喷药后的第 7天 ,根据病害分级标准调查发病情
况。病害分级标准如表 1所示 。
表 1　病害分级标准
Table1　Diseaseclassficationstandard
分级Classifica-tion 标准 Standard
0 植株无症状
1
植株新嫩枝表现轻微花叶症状 ,叶平展 ,病叶表面出现皱缩等轻度畸形
2 植株多数枝条感病 ,病叶畸形 ,出现卷叶 ,蕨叶 ,植株不矮化
3 叶片畸形 ,植株矮化
　　发病率(%)=发病株数 /调查总株数 ×100;病情指数 =
[ ∑ (各级病株数 ×相对应级数值)/调查总株数 ×3] ×100;
防治效果(%)=(对照区病指(或病率)-处理区病指(或病
率))/对照区病指(或病率)×100。
1.2.4　不同浓度的板蓝根提取物对罗汉果病毒病的影响。
板蓝根提取物用水稀释 5、10、50、100和 200倍液分别喷洒已
接种病毒的罗汉果苗 ,药液量为每株 10ml药液 ,以灭菌水为
对照(CK),每一处理 3次重复 ,每一重复 10株 ,接种 10d后
调查发病情况。
1.2.5　病株中病毒含量的测定。分 3次重复 ,每一重复取 3
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(4):1629-1630, 1640 责任编辑　李玮　责任校对　刘祖尚
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2009.04.100
张病叶 ,用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法 (DAS-
ELISA)[ 5]检测病叶中 PRSV的含量 。按生产商推荐的方法
进行操作。
2　结果与分析
2.1　药用植物粗提物对罗汉果病毒病的防治作用　由表 2
可知 ,测试的 4种药用植物对罗汉果病毒病的防治效果 ,板
蓝根粗提物为 73.10%,贯众粗提物为 46.20%,大黄粗提物
为 46.20%,黄芩粗提物为 56.70%,可卡宁为 65.40%,其中
以板蓝根和可卡宁的粗提物对罗汉果病毒病的防治作用效
果最好 ,其次是黄芩粗提物(表 2)。
表 2　药用植物提取物对罗汉果病毒病的防治作用
Table2　Thepreventionandtreatmentefectofmedicinalplantextract
ontheMomordicagrosvenoriSwinglevirusdisease
药剂Medicament
稀释倍数Dilutionmultiple
总株数株Totalplant
病株数株Diseasedplant
平均发病率∥%Averageincidencerate
防治效果∥%Preventionandtreatmentefect
板蓝根 Isatidisroot 5 30 7 23.3±1.1 73.1a
黄芩 Scutellariaroot 5 30 11 36.7±1.0 57.6b
可卡宁 Kekaning 600 30 9 30.0±3.3 65.4b
大黄 Rhubarb 5 30 14 46.7±5.8 46.2bc贯 众 CyrtomiumRhizome 5 30 14 46.7±5.8 46.2bcCK 30 26 83.3±2.7
　注:用SSR法测验,不同字母表示差异显著(p<0.05)。下表同。
　Note:TestedwiththemethodofSSR;diferentletersindicateasignificant
diference(p<0.05).Thesameasbelow.
　　根据以上测试结果 ,选板蓝根粗提物 5倍液和黄芩粗提
物 5倍液分别与可卡宁 600倍液混合测定其对罗汉果病毒
病的防治作用。结果表明 ,板蓝根与黄芩 2种药用植物粗提
物的 5倍液与可卡宁 600倍液混合后并没有对罗汉果病毒
病的发生起到提增抑制功能(表 3)。
取不同处理的病叶用 ELISA检测其病毒含量 ,结果表
明 ,可卡宁 +板蓝根粗提物混剂和板蓝根粗提物单剂病叶的
OD405值与健叶的 OD405值差异不显著 ,但与其他处理病叶的
OD405值差异显著 ,这说明可卡宁 +板蓝根粗提物混剂和板蓝
根粗提物单剂对番木瓜环斑病毒的抑制作用比其他处理的
强(表 3)。
2.2　不同浓度的板蓝根粗提取物对罗汉果病毒病的防治作
用　板蓝根粗提取物的浓度越高对病毒病的防治作用越明
显。 5、10、50、100和 200倍液的板蓝根提取物对罗汉果病毒
病的防治效果分别为 77.48%、59.15%、59.15%、52.14%和
43.69%(表 4)。
3　小结
该研究选取的板蓝根 、黄芩 、贯众和大黄 4种药用植物
的粗提物对罗汉果花叶病毒病都具有一定的防治效果 ,其中
以板蓝根的粗提物对罗汉果花叶病毒病的防治作用最好。
　　板蓝根粗提物单独使用对罗汉果花叶病毒病的防治效
果为 67.95%,但与化学农药可卡宁复合使用时对罗汉果花
表 3　板蓝根和黄芩分别与可卡宁混合对罗汉果病毒病的防治作用
Table3　ThepreventionandtreatmentefectoftheIsatidisroot-KekaningmixtureandScutelariaroot-KekaningmixtureontheontheMomordica
grosvenoriSwinglevirusdisease
药剂Medicament 稀释倍数Dilutionmultiple 总株数∥株Totalplant 病株数∥株Dieasedplant
平均发病率∥%Averageincidencerate
防效∥%Preventioneffect OD405
CK 30 25 83.3±2.7 0.517a
可卡宁 Kekaning 600 30 17 56.7±9.8 31.93c 0.426b
可卡宁 +黄芩 Kekaning+Scutelariaroot 600+5 30 17 56.7±2.7 31.93c 0.431b
黄芩 Scutelariaroot 5 30 14 46.7±2.7 44.00b 0.448b
可卡宁 +板蓝根 Kekaning+Isatidisroot 600+5 30 10 33.3±7.2 60.02a 0.215de
板蓝根 Isatidisroot 5 30 8 26.7±5.4 67.95a 0.363cd
健叶 Healthyleaf 0.208de
磷酸缓冲液 Phosphatebufer 0.164e
　注:表中病毒含量(OD405)的数据为样品在 405nm波长下酶标仪中测量的 3次重复的平均数。
　Note:Theviruscontent(OD405)dataisthemeanvalueof3timestestresultsonmicroplatereaderunderthewavelengthof405nm.
表 4　不同浓度的板蓝根粗提取物对罗汉果病毒病的防治作用
Table4　Thepreventionandtreatementeffectofisatidisrootcrudeex-
tractontheMomordicagrosvenoriSwinglevirusdisease
稀释倍数Dilutionmultiple
病指 Diseaseindex
1 2 3 平均
防效∥%Preventionefect
CK 2.3 2.2 2.6 2.367
200 1.3 1.5 1.2 1.333 43.69d
100 1.1 1.2 1.1 1.133 52.14c
50 0.8 1.1 1.0 0.967 59.15bc
10 1.1 1.1 0.7 0.967 59.15bc
5 0.6 0.4 0.6 0.533 77.48a
注:因 SSR法检测;不同字母表示差异显著(P<0.05)。
Note:TestedwiththemethodofSSR;diferentletersindicateasignificant
diference(p<0.05).Thesameasbelow.
叶病毒病的防治效果仅为 60.02%,其原因何在 ,有待进一步
研究。
该研究用 DAS-ELISA法测定出板蓝根粗提物对番木瓜
环斑病毒(PRSV)在罗汉果植株中的增殖有一定的抑制作
用 ,但罗汉果花叶病毒病的病原还有西瓜花叶病毒-2罗汉果
株系(WMV-2)和小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV),虽然该研
究是用田间的病叶作为病原接种 ,接种的病原可能含有西瓜
花叶病毒 -2罗汉果株系(WMV-2)和小西葫芦黄化花叶病
毒(ZYMV),接种的植株用板蓝根粗提物喷洒后 ,罗汉果花叶
病毒病的发病率和严重度下降 ,但没有用 DAS-ELISA法测定
板蓝根粗提物对这 2种病毒的抑制效果 ,板蓝根粗提物是否
也抑制西瓜花叶病毒-2罗汉果株系(WMV-2)和小西葫芦黄
(下转第 1640页)
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其在完熟期。
图 5　不同施氮水平无氮浸出物含量积累动态
Fig.5　Dynamicaccumulationofnitrogen-freeextractunderdifferent
nitrogenlevels
3　结论与讨论
该试验结果表明 ,不施氮肥(N0处理)和施用氮肥(N1、
N2、N3处理)时 ,饲用高粱茎秆粗蛋白 、粗纤维 、粗灰分 、无氮
浸出物的积累规律一致 。随生育进程粗蛋白和粗脂肪含量
不断增加 ,粗纤维含量先降低后升高 ,粗灰分和无氮浸出物
含量不断降低 。
各品质性状在 4个施氮水平下的积累情况有所不同 。
在一定的施氮量范围内 ,粗蛋白含量随着施氮量的递增而递
增 ,但超过某个临界点时 ,粗蛋白含量反而随着施氮量的增
加而下降 ,施纯氮 28.0 kg/hm2时粗蛋白含量达到最大值;从
拔节后 24 ～ 52 d,粗纤维含量随施氮量的递增而递增;对粗
脂肪和粗灰分来说 ,不同处理间含量差异不显著;生育前期 ,
4个处理间无氮浸出物含量显著差异 ,后期这种差异逐渐变
得不显著。
　　氮是作物的主要营养元素 ,但由于土壤中可利用的氮往
往难以满足饲用高粱生长发育的需要 ,因此以施肥方式补充
土壤中的氮是生产优质高效饲用高粱的有效措施之一 [ 2] 。该
研究结果表明 ,施用氮肥可以增加粗蛋白和粗脂肪的含量 ,这
是有利的方面 ,但同时不利的是粗纤维的含量也随之增加 ,在
牲畜对营养成分的消化吸收方面会产生一定的影响 ,这是生产
上急需解决的问题。该研究认为 , N2处理粗蛋白的含量达
到最高 ,粗脂肪的含量也较高 ,而粗纤维含量相对较低。因
此 ,施纯氮 28.0kg/hm2时 ,各品质性状综合表现最好 。
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(上接第 1630页)
化花叶病毒(ZYMV)值得进一步研究。
药用植物活性物质提取的最常用方法有冷浸法 、回流法
和索氏提取法 ,采用回流法和索氏法时 ,持续加热提取有可
能破坏材料中非耐热活性成分 [ 5] 。该研究用索氏提取法提
取的药用植物的抗病毒活性物质对罗汉果花叶病毒病的防
治效果较好 ,说明这些抗病毒活性物质较耐高温。
该研究只是测定几种药用植物粗提物对罗汉果病毒病
的防治作用 ,其在田间的防治作用 、活性物质的纯化及其对
病毒的作用机制有待今后探讨。
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