全 文 ：研究报告 尸二盔泥蕊
螺旋藻多糖对小鼠 S 一 180 肉瘤的免疫抑制作用
于 红 ` ,2 张学成
青岛海洋大学生命学院 青岛 26 6003)
青岛大学医学院 青岛 2 660 12)
提要 研究 了螺旋藻多糖对小鼠 5 180 肉瘤的抑制作用 。 结果 显示 : 螺旋藻多糖在 50 一 20 0
拌g / g 的剂量范围对小 鼠 5 180 肉瘤均有 一定的抑制作用 , 具有明显升高小 鼠外周血白细胞的
功能 , 促进荷瘤小 鼠脾淋 巴细胞转化作用 , 并有较好的剂量 一 效应关 系 , 促进荷瘤小鼠脾 M咬细
胞对靶细胞的细胞毒作用 。 提示螺旋藻多糖可 通过全面调节机体的免疫功能 , 刺激 T 细胞 、 N K
细胞等功能来达到控 制和杀 灭肿瘤细胞的 目的 。
关键词 螺旋藻多糖 , 抗肿瘤作用 , 免疫作用
中图分类号 R 9 7 9 . 1 文献标识码 A 文章编号 10摊 3096 ( 2003 ) O冬00 5吕03
螺旋藻是一种微藻类古老生物 , 属于蓝藻类 、 颤
藻科 。 螺旋藻不仅具有很高的营养价值 , 而且含有大
量的对人体有益的生物活性物质 , 其中最引人注 目的
是 螺 旋 藻 中 的 多 糖 。 实 验证 明 螺 旋 藻 多 糖
( po lays c ha
ir d e 6切 n 导挂八d i an 灿枷 i : , I: S P ) 及其多糖复合物具有抗衰老 、 降血脂 、 促进蛋白质合成 、提高免
疫功能 、 抗辐射等” 一 3 !多种生理功能 。 因此螺旋藻多
糖 已成为 目前国内外海洋药物研究开发的热点之
一 。 本文研究了钝顶螺旋藻多糖对小鼠移植性肿瘤
5 180 肉瘤的抑制作用及可能作用机理 。
1 材料
1
.
1 螺旋藻多糖
螺旋藻藻粉由青岛海洋大学生命学院藻类遗传
室提供 , 参照文献【4 , 5] , 采用改良的三氯乙酸去蛋白
法提取螺旋藻粗多糖 , 白色粉末状 , 纯度达 92 % 以
上 。
1
.
2 动物
昆明种小鼠 , 体质量 18 一 2 9 , 雌雄各半 , 由青
小鼠 5 180 肉瘤瘤株及肿瘤细胞 eH l a 细胞株均
购自山东省医学科学院药物研究所 。
1
.
5 仅器和设备
酶联免疫检测仪 ( B l( ) R AI ) 公司 ) , 〔U 孵箱 (美
国任正U 户己 公司 ) , 倒置显微镜 ( (刀人、 吓几石 ) , 电子分
析天平 ( 3 找。 d u s ) , 低温高速离心机 (德国 eH ar cu S 公
司 ) 。
2 方法
2
.
1 1飞盗〕 对小 鼠 5 18 0 肉瘤的抑制作用
无菌取传代后 6 d 的 5 180 肉瘤细胞悬液 , 经生
理盐水稀释计数后调整细胞至 2 x 10 10 一 6 x 101
个几 , 每鼠右前腋窝部皮下接种 0 . 2 而 , 。 次 日随机分
组 , 每组 10 只 , 雌雄各半 , 于接种后 24 h 给药 。分别为
I毛护高剂量组 (20 拼g / g ) , 中剂量组 ( 100 拌g / g ) , 低
剂量组 ( 50 拌9/ 9 ) , 正常对照组 , 环磷酞胺阳性对照组
( 20 拜9/ 9 ) 及生理盐水空白对照组 , 均以 0 . 02 mI J / g
灌胃给药 , 每日 1次 , 连续 10 d 。 末次给药后 24 h , 小
鼠称重 , 处死小鼠剥取瘤块 , 分离 、 摘取脾脏和胸腺 ,
岛市药物鉴定所实验动物中心提供 。
1
.
3 药品 和试剂
1妊毛沮~ 1 64 0 干粉培养基为美国 G l l贾1〕公司产品 ;
_
新生牛血清为杭州四季青产品 ; 四甲基偶氮陛盐 第一作者 : 于红 , 出生于 19 65 年 , 硕士 , 副教授 , 通信地址 :
(姗 ) is卿 公司产品 ; % 孔培养板毓r 公司产品 ; 青岛市登州路 38 号青岛大学医学院 , 骊il : y恤 @ -cn环磷酞胺上海第 12 制药厂产品 。 qd . n et
1
.
4 肿瘤细 胞株 收稿日期 : 2 0 02城)7一 ;修回日期 : 2o 珊 16
压五 海洋科学2/ 0 3 年 /第 “ 7 卷 /第 5 期
研究报告 R忿璧四
电子天平称湿重 , 计算抑瘤率 , 脾指数和胸腺指数 。
2
.
2 P巫〕 促进荷瘤小 鼠脾淋 巴细 胞转化实脸
昆明小鼠按上述方法接种 5 180 瘤细胞并分组给
药 10 d 。 无菌取脾 , 置于盛有适量无菌比 nk s 液的小
平皿中 , 用镊子轻轻将脾撕碎 、 制成单个细胞悬液 , 经
200 目筛网过滤 , H a n k s 液洗 3 次 , 将细胞悬液溶于 2
而 的完全培养液中 , 台盼蓝染色计数活细胞数 (95 %
以上 ) , 调整细胞浓度为 2 又 10 ” 个 / L 。 将细胞悬液分
两孔加入 24 孔培养板中 , 每孔 1 而才 。 一孔加 50拜 I_
山 .认液 (相当于 5 1艰八办 , 另一孔作为对照 。 置 5%以 王
孵箱 37 ℃培养 72 h 。培养结束前 4 h 加入 M刀 , , 培养
结束后 , 每孔加入 I l n L 酸性异丙醇 , 吹打混匀 , 使紫
色结晶完全溶解 , 于酶标仪 570 nm 处测 A 值 。 用加
G
〕n
A 孔的光密度减去不加 ( b n A 孔的光密度值表示
淋巴细胞的增殖能力 , 采用方差分析进行数据统计 。
2
.
3 1
:
S P 促进荷瘤小 鼠 NK 细胞活性实验
同 2 . 2 处理动物和制备脾细胞 。 取不同药物浓
度处理的脾细胞作效应细胞 , 用完全 1 640 培养液调
整细胞浓度至 1 又 l酬个 / L , 每孔 0 1 n 正 , 加入 % 孔
培养板中 , 即每孔 1又 I J , 另取 eH la 细胞作为靶细胞 ,
每孔加入 2 又 10 ”几 , 效应细胞 : 靶细胞 二 50 : l , 每份
标本设 3个复孔 , 同时设靶细胞自然释放对照组和最
大释放对照组 , 置 5 % (U 孵箱 37 ℃ 混合培养 Z h 。取
出培养物 , 吸取各孔上清液 0 . I n正 力口入另一培养板
孔中 , 置 37 ℃预温 10 o n , 每孔加入新配制的底物溶
液 0 . l rnl , 室温避光 10 一 巧 、 n , 加人 1 0 1几 柠檬酸
终止反应 。 于酶标仪 570 nr 处测 A 值 。 计算 M吃细胞
的活性 。 N K 细胞杀伤率 匕 (实验组 A 值 一 自然释放
组 A 值 ) / (最大释放对照组 A 值 一 自然释放组 A
值 ) 。
2
.
4 1悦平对荷瘤小 鼠外周血白细胞的影响
同 2 . 1处理动物 , 灌胃给药 10 d 后 , 取尾静脉血
作白细胞计数 。
3 结果
3
.
1 P S P 对小 鼠 5 18 0 肉瘤的抑制作用及外
周血 白细胞的作用
l…E l〕 在 50 一 20 拜g / g 的剂量范围对小鼠 5 180
肉瘤 , 均有一定的抑制作用 , 实验结果平均抑瘤率在
31
.
7 % 一 5 3 . 6 % 之间 , 其中高剂量抑制作用较强 。 同
时对荷瘤小鼠具有明显增加脾指数和胸腺指数的作
用 , 不伴有降低体重或其他毒副作用 , 1毛护 具有明显
升高小鼠外周血白细胞的功能 , 而对正常小鼠白细胞
水平无明显影响 (见表 1 ) 。
3
.
2 1不护 促进荷瘤小鼠脾淋巴细胞转化实验
PS P 具有明显促进荷瘤小 鼠脾淋巴细胞转化作
表 1 P s P 对各组小鼠肿瘤抑制作用结果及外周血白细胞的作用
T a b
.
l I n h ib i t o yr e f f e e t s o f P S P o n t h e S a cr ino m
a 1 8 0 a n d th e n u m be r o f W BC i n m i e e
组别 抑瘤率 ( % ) 胸腺指数 脾指数 白细胞数 ( x 10” / L )
068正常对照
肿瘤对照
低剂量
中剂量
高剂量
环磷酞胺
2
.
6 6 士 0 . 09 ” 长
2
.
0 8 士 0 . 0 8
2
.
8 3 士 0 . 09 书 `
3
.
0 7 士 0 . 06 俘 汗
3
.
22 士 0 ` 0 7 每 苍
2
.
0 7 士 0 10 奋 资
4
.
10 士 O
4
.
2 5 士 0
4
.
5 4 士 0 . 0 9 并 努
4
.
9 8 士 0 . 0 6 普 丢
5
.
2 0 士 0 . 0 6 苍 普
3
.
7 3 士 0 . 0 6 苍 号
9
.
6 5 士 0 . 0 8
8
.
16 土 0 12
8
.
17 士 0 . 1 1
8
.
9 7 士 0 . 0 8
9
.
7 1 士 0 . 0 9
6
.
8 9 士 0 . 13
八曰,17门jZ
飞à4ù工ù一、
哥P ) 0
.
0 5 : 衡 护 ( 0 0 1 。
用 。 结果显示 : 低 、 中 、 高剂量 1毛护组的荷瘤小鼠脾淋
巴细胞转化率 (A 值 ) 分别为 0 . 1 8 士 0 . 02 , 0 . 28 士
0
.
01
,
0
.
36 士 0
.
01
。 与肿瘤对照组相比 , 均有显著差异
( P ( 0
.
0 1 )
。
3
.
3 1毛尸促进荷瘤小 鼠 N K 细 胞活 性实验
P SI
〕 能促进荷瘤小鼠脾 N K 细胞对靶细胞的细
胞毒作用 (图 1) , 5 18 0 荷瘤对照组小鼠脾 N K 细胞活
性明显低于正常对照组 。
4 讨论
机体的免疫功能与肿瘤的发生发展有密切关
系 , 而机体的抗肿瘤免疫效应机制包括细胞免疫和体
液免疫两方面 , 其中由 T 细胞介导的细胞免疫起着更
重要的作用 , T 细胞的激活是发挥细胞免疫效应的重
要条件 ; N K 细胞是细胞免疫中的非特异性成分 , 不需
预先活化即可直接杀伤肿瘤细胞 , 是一类在早期肿瘤
免疫机制中起重要作用的效应细胞 , 处于机体抗肿瘤
的第一道防线甲 。
本研究在证实 1毛护 具有良好抗肿瘤效果的基础
上 , 探讨了 1毛护对小鼠 5 180 肉瘤的免疫调节作用及
可能机理 。首先观察了 1妞叹寸两个主要免疫学器官脾
脏和 胸腺的增重作用 , 以 1名P S (b 瑶 时即有较明显的
入七 n n e 氏 一e r l e e s八场 . 2 7 、 N I〕 . 5 / 2 00 3 国
研究报告 月二答泥理
组 别
图 IR亚〕对荷瘤小鼠 N K细胞活性的影响
F ig
.
1 E f f e ets of IS P on th ea eti v i ty of M
高剂量组 ; F 环磷酸胺组
A 凡 〕n l阳】助刃 p; B 3 『 i c
~
18 0田们位t j g 旧u P ; C l脚 由昭 e助〕叩 ;
D 随 l dde d咙 ag e , 叨 p ; E伟劝 d以艾归 e g旧 u p ; F Cy e l o p l姗 p l、 an俪de , 〕 t lp
抑瘤作用 , 并显示呈剂量依赖性关系 , 说明确与抑瘤
作用有关。各剂量组 1名 I〕 均可促进 & A 诱导的体外小
鼠淋巴细胞转化 , 对荷瘤小鼠体内 N K 细胞活性亦有
明显促进作用 。提示 1乍护可通过全面调节机体的免疫
力 , 刺激 T 细胞 、 NE 细胞等功能来达到控制和杀灭肿
瘤细胞的目的 。
目前临床上肿瘤的放射治疗和化学治疗都存在
着抑制机体免疫功能等严重的毒副作用 , 而多糖作为
抗肿瘤药物 , 不伴有明显的毒副作用 , 还能治疗或预
防 CY 对机体免疫系统的抑制作用 。 有报道 I性尸具有
治疗放射线对正常细胞的毒性作用 l“ , ’ , 显然 , 这种独
特的双重作用有利于肿瘤病人的综合治疗和康复 , 适
合于联合用药 。 P S P 在肿瘤治疗方面具有广阔的应用
前景 ,值得进一步深入研究 。
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K e y W o r d s : 1苍护 , 内 l it t l兀rx 〕r e f fe e t , b 们 l u rl e e fe e t
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a n e e d or , C o v e r e d ht e n t川企 e r of W l犯 , 1义们刃 t e d ht e Pl t 〕lif e花 t ion of s P le e n l” 11 Pih 犯 yt e a n d i n e re a s e d t ll e
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onl 馆i e a l f u n e t ion in 而 e e . (本文编样 :刘珊珊 )
函 海洋科学 / 2 0 03 年 /第 27 卷 /第 5 期