全 文 ：第 24卷　第 2期
2008年 4月 　 　　　 　 　 　
忻 州 师 范 学 院 学 报
JOURNAL OF XINZHOU TEACHERSUNIVERSITY　　　　　　
Vol.24　No.2
　 Apr.2008　
大青叶抗氧化能力的研究
刘　宣 1 ,赵二劳2
(1.山西师范大学 , 山西 临汾 041004;2.忻州师范学院 , 山西 忻州 034000)
摘　要:采用清除羟自由基和超氧阴离子自由基法对大青叶抗氧化能力进行了研究 。实
验结果表明:大青叶对羟自由基和超氧阴离子自由基均有较强的清除作用 ,其清除率与大青叶
提取液浓度成正相关 ,说明大青叶具有较强的抗氧化能力 ,大青叶极可能是一种天然抗氧化剂
的新资源 。
关键词:大青叶;抗氧化能力;清除率
中图分类号:R284　文献标识码:A　文章编号:1671 -1491(2008)02 -0011 -02
引言
1956年英国分子生物学家 Harman.D提出了自由基学
说 , 其基本观点是:衰老是自由基引起的组织随机毒害的结
果 [ 1] 。其后许多学者的大量研究也表明 , 诸多疾病的发生和
发展与自由基导致的机体细胞氧化损伤密切相关。因此 , 近
年来有关清除自由基抗氧化剂的研究日益受到人们的关注 ,
同时由于合成抗氧化剂的潜在毒副作用 ,而我国又有得天独
厚的中草药资源 , 为筛选有效的天然抗氧化剂提供了良好的
条件 , 从而使从中草药资源中寻找安全 、有效抗氧化剂的工
作成为当前研究清除自由基抗氧化剂的热点。
大青叶(IsatisindigoticaFort)为十字花科菘蓝属植物菘
蓝的干燥叶 , 含有多种药理活性成分 [ 2-3] , 《中国药典 》记载
大青叶具有清热解毒 、凉血消斑 、利咽止痛之功效 ,现代药理
研究表明大青叶具有抗菌 、抗癌 、抗病毒和增强免疫调节的
作用 , 临床上主要用于治疗温热病热毒入于营血及温热病初
起和外感风热症等 [ 2] 。目前对大青叶化学成分 、功能因子构
效关系的研究较多 , 而对其抗氧化能力的研究未见报道 , 本
文以清除超氧阴离子自由基和羟自由基法研究了大青叶的
抗氧化能力 , 以期为开发新的天然抗氧化剂提供信息。
1　实验部分
1.1　材料 、试剂与仪器
大青叶购于忻州市本草堂药店 , 样品粉碎机粉碎后装
瓶 、备用。邻苯三酚 、水杨酸 、过氧化氢(30%)、硫酸亚铁铵
等试剂均为分析纯 , 实验用水为二次蒸馏水。
Uv-2550紫外可见分光光度计 , 日本岛津公司;XH-
100A微波催化合成 /萃取仪 , 北京祥鹄科技发展有限公司;
pHS-3TC精密数显酸度计 , 上海天达仪器有限公司;AB204
-N电子分析天平 , 梅特勒 -托利多上海公司;SY电热鼓风
干燥箱 ,天津市三水科学仪器有限公司;XA-1固体样品粉
碎机 ,江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司。
1.2　实验方法
1.2.1　大青叶提取液的制备
准确称取 1.0g大青叶粉末于 100mL锥形瓶中 , 加入
60mL蒸馏水 , 浸泡 10分钟后 , 在功率 600W、温度 50℃的条
件下 ,微波提取 5min(累计提取时间), 提取液过滤后 , 滤液
用蒸馏水定溶至 60mL, 备用。
1.2.2　大青叶提取液清除超氧阴离子自由基(O-2 · )的研究
参考文献 [ 4-5] , 采用改良的邻苯三酚自氧化法产生
(O-2 · )。将 4.5mL磷酸盐缓冲溶液 (50mmol/L, pH值
8.34)与 3.2mL蒸馏水混匀后 ,在 25℃水浴中保温 20min,取
出后立即加入 25℃预热的 0.2mmol/L邻苯三酚 0.3mL, 迅
速摇匀于波长 325nm下每隔 30s测吸光度 , 计算线性范围内
每分钟吸光度增加值■A0。待测样品测定时所取试剂同前 ,
只是用大青叶提取液代替等量的蒸馏水 , 按上述方法测定并
计算■Ai。大青叶提取液对超氧阴离子自由基(O-2 · )的清
除率计算公式为:
清除率(%)=[ (■A0 -■Ai)/■A0 ] ×100%
1.2.3　大青叶提取液清除羟自由基· OH的研究
按照文献 [ 6-7]的实验方法 , 以 Fenton反应建立反应
体系模型 ,测定原理是:利用 H2O2与 Fe2+混合产生 · OH,
但由于· OH具有很高的反应活性 , 存活时间短 , 若在反应
体系中加入水杨酸 , 就能有效地捕捉 · OH, 产生紫红色产
收稿日期:2007-12-20
作者简介:刘　宣(1985-), 女 ,山西太原人 , 山西师范大学生命科学学院农艺系 2004级本科生。
物 , 该产物在波长 510nm处有强吸收 , 如果在此反应体系中
加入具有清除 · OH功能的被测物 , 便会与水杨酸争夺
· OH,从而使有色产物生成量减少。 采用固定反应时间法 ,
分别测定加入与未加入大青叶提取液体系的吸光度 ,便能测
定大青叶提取液对· OH的清除作用 , 以此评价大青叶的抗
氧化能力。大青叶提取液对羟自由基· OH的清除率计算
公式为:
清除率(%)=[ (A0 -Ai)/A0] ×100%
式中:Ai为加入大青叶提取液后羟自由基体系的吸光
度值;A
0
为未加大青叶提取液时羟自由基体系的吸光度值。
实验时在 10mL比色管中 , 依次加入浓度为 7.5 ×10-3
mol/L的硫酸亚铁铵溶液 1 .0 mL, 浓度为 7.5×10-3mol/L
的水杨酸溶液 1.0mL, 0.1%的 H2O2溶液 1.0mL, 蒸馏水定
溶至刻度 , 在 37℃水浴中恒温反应 1h后 , 于波长 510nm处
测其吸光度值为 A0 , 在上述体系中分别加入不同量的大青
叶提取液测定吸光度值为 Ai。
2　结果与讨论
2.1　大青叶提取液对超氧阴离子自由基(O-2 · )的消除作用
生物体内氧化还原反应中 , 大致有 2% ～ 5%的氧会产
生超氧阴离子自由基(O-2 · ), (O-2 · )是活性氧的一种 , 是
机体内寿命最长的自由基 ,通常作为自由基链式反应的引发
剂 , 产生活性更强的· OH, 进一步给机体造成危害 [ 8] 。 实验
按 1.2.2的方法分别测定 0.5、1.0、1.5、 2.0和 2.5 mL大青
叶提取液对超氧阴离子自由基的清除率 ,结果见表 1。
表 1　大青叶提取液对(O-2 · )的清除率
大青叶提取液 /mL 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
清除率 /% 17.36 20.75 43.24 77.80 84.32
　　由表 1可知 , 不同浓度的大青叶提取液对超氧阴离子自
由基的产生都有一定的抑制作用 ,且随着大青叶提取液浓度
的增加 , 对超氧阴离子自由基的清除效果增强 , 在实验条件
下 , 对超氧阴离子自由基的清除率最大可达 84.32%, 说明
大青叶提取液对超氧阴离子自由基具有较强的清除能力。
2.2　大青叶提取液对羟基自由基· OH的清除作用
羟基自由基 · OH是最活泼 、毒性最大的自由基 , 它可
与活细胞中的任何分子发生反应 , 引发组织细胞病变 , 导致
各种疾病发生和机体衰老 ,且反应速度非常快 [ 8]。 按 1.2.3
的方法分别测定 0.5、1.0、1.5、 2.0和 2.5mL大青叶提取液
在体外对羟基自由基· OH的清除率 , 结果见表 2。
表 2　大青叶提取液对· OH的清除率
大青叶提取液 /mL 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
清除率 /% 27.43 75.26 80.92 86.73 91.34
　　由表 2可知 ,大青叶提取液对羟自由基 · OH的清除率
与其浓度基本成正相关 ,随着大青叶提取液量的增加清除率
也增加 ,在实验条件下 , 最大清除率可达 91.34%, 可见大青
叶提取液可有效地清除羟自由基· OH。提示我们大青叶具
有较强的抗自由基能力。
3　结论
大青叶提取液对羟自由基和超氧阴离子自由基均具有
较强的清除能力 ,对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率
与其浓度成正相关 ,随着大青叶提取液浓度的增大而增强 ,
表明大青叶中含有抗氧化物质 , 具有较强的抗氧化能力 , 提
示我们大青叶极可能是一种天然抗氧化剂的新资源 , 值得进
一步深入研究。
(责编:唐晓燕)
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StudyonAntioxidantActivityofIsatisIndigotica
LIUXuan1 , ZHAOEr-lao2
(1.ShanxiNormalUniversity, Linfen041004, China;2.XinzhouTeachersUniversity, Xinzhou034000 , China)
Abstract:AntioxidantactivityofextractsfromIsatisIndigoticawasinvestigatedwiththemethodofscavenginghydroxylandsuperoxide
anionfreeradical.TheresultsshowedthattheextractsfromIsatisIndigoticahavestrongscavengingcapacityandthescavengingratein-
creaseswiththeincreaseofconcentrationofIsatisIndigotica, whichindicatedthatIsatisIndigoticahasstrongantioxidantactivityandit
maybeanewnatureresourceofantioxidant.
Keywords:IsatisIndigotica;antioxidantactivity;scavengingrate
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