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‘蓓蕾’蓝靛果中花色苷组成鉴定及抗氧化能力比较分析



全 文 :82 2016, Vol.37, No.19 食品科学 ※基础研究
‘蓓蕾’蓝靛果中花色苷组成鉴定及抗氧化
能力比较分析
安小琦,王月华,孟宪军*
(沈阳农业大学食品学院,辽宁 沈阳 110866)
摘  要:对蓝靛果中花色苷的组成进行鉴定,并对其抗氧化能力进行比较分析。实验以蓝靛果(‘蓓蕾’品种)
为原料,采用有机溶剂60%乙醇(0.1%盐酸酸化)溶液,超声辅助提取90 min;利用D101大孔树脂对获得的粗提物
进行纯化,之后冷冻干燥制得粉末物质。通过pH示差法和福林-酚法分别测定总花色苷含量和总多酚含量,分别为
(353.35±0.79)、(474.01±2.12)mg/g;并用高效液相色谱-质谱联用法对花色苷组成进行鉴定,共发现11 种花色苷,
其中矢车菊-3-葡萄糖苷为主要花色苷(90.679%)。此外,实验还通过总抗氧化能力测定和2,2’-联氨-二(3-乙基苯并噻
唑-6-磺酸)二铵盐自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除能力测定,比较分析蓝靛果花色苷提取物、矢车菊-3-葡
萄糖苷、VC的抗氧化能力,结果表明,3 种物质的抗氧化能力排序为:矢车菊-3-葡萄糖苷>花色苷提取物>VC。
关键词:蓓蕾蓝靛果;花色苷;高效液相色谱-质谱联用;抗氧化能力
Identification and Comparative Analysis of Antioxidant Ability of Anthocyanins in Lonicera caerulea Berry Extracts
AN Xiaoqi, WANG Yuehua, MENG Xianjun*
(College of Food Science, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110866, China)
Abstract: The identification of anthocyanins composition and antioxidant activity of Lonicera caerulea berry extracts
was investigated in this study. ‘Beilei’ L. caerulea berries were ultrasonically extracted with 60% ethanol containing 0.1%
HCl for 90 min. D101 macroporous resin was used to purify the obtained extracts. After that, freeze drying was conducted
to obtain powder. The contents of total anthocyanins and polyphenols were determined using pH differential and Folin-
reagent method as (353.35 ± 0.79) mg/g and (474.01 ± 2.12) mg/g, respectively. High performance liquid chromatography-
tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) was used for the identification of anthocyanin composition. A total of 11
individual anthocyanins were found with cyanidin-3-glucoside (90.679%) being the major anthocyanin. Additionally, total
antioxidant capacity (T-AOC) and 2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonate) radical (ABTS+·), 1,1- diphenyl-
2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging activities of L. caerulea berry extracts, cyanidin-3-glucoside and VC were
comparatively analyzed, and the results revealed a decreasing order of cyanidin-3-glucoside > L. caerulea berry extract > VC.
Key words: Lonicera caerulea berry; anthocyanins; high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
(HPLC-MS/MS); antioxidant activity
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201619014
中图分类号:TS207.3 文献标志码:A 文章编号:1002-6630(2016)19-0082-06
引文格式:
安小琦, 王月华, 孟宪军. ‘蓓蕾’蓝靛果中花色苷组成鉴定及抗氧化能力比较分析[J]. 食品科学, 2016, 37(19): 82-87.
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201619014. http://www.spkx.net.cn
AN Xiaoqi, WANG Yuehua, MENG Xianjun. Identification and comparative analysis of antioxidant ability of anthocyanins
in Lonicera caerulea berry extracts[J]. Food Science, 2016, 37(19): 82-87. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/
spkx1002-6630-201619014. http://www.spkx.net.cn
收稿日期:2016-03-02
基金项目:公益性行业(农业)科研专项(201303073-04);辽宁省科技攻关项目(2011205001);
辽宁省农业科技(北方果蔬贮藏与加工)创新团队项目(2014020066-201)
作者简介:安小琦(1992—),男,硕士研究生,研究方向为农产品加工与贮藏工程。E-mail:934311974@qq.com
*通信作者:孟宪军(1960—),男,教授,博士,研究方向为小浆果深加工。E-mail:mengxjsy@126.com
※基础研究 食品科学 2016, Vol.37, No.19 83
蓝靛果忍冬(Lonicera caerulea),又叫蓝靛果、羊
奶子、黑瞎子果、山茄子果等,属茜草目,忍冬科,忍
冬属,具有“第三代水果”之称[1]。其果实不仅含有丰富
的营养物质如维生素、矿物质、有机酸等,而且含有花
青素、酚类物质、黄酮等功效成分[2-3]。目前,国内外有
关蓝靛果的研究主要选用野生蓝靛果为原料,对栽培品
种的研究甚少。‘蓓蕾’蓝靛果是东北农业大学人工培
育出的国内第一个非野生蓝靛果新品种,其果实比野生
蓝靛果大,卵圆形,两端钝圆,果肉几乎是黑色,表皮
有薄薄一层蜡质果霜,且味优[4],尤其是花色苷含量较野
生蓝靛果的更为丰富,适合作为天然色素原材料[5]。
花色苷属于类黄酮物质中一类重要的化合物,主要
存在于蓝、紫色果蔬植物中。相关研究表明,花色苷具
有抗氧化、缓解炎症、改善视觉、抗心管疾病、抗糖尿
病、减肥、改善肝功能及抗癌等功效[6-11]。国内外有关水
果中花色苷的研究报道较多,例如蓝莓、越橘等[12-14]。但
是关于‘蓓蕾’蓝靛果中花色苷组成鉴定及抗氧化能力
的研究尚未报道。因此,对‘蓓蕾’蓝靛果中花色苷组
成及其抗氧化能力进行分析具有重要意义。
本实验通过对‘蓓蕾’蓝靛果果实中的花色苷进行
提取、纯化,并对其组成及抗氧化能力进行比较分析,
为其品种的推广及功能性评价提供理论依据,并为天然
色素及功能性食品原材料的寻找提供一定的参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
成熟、完好的‘蓓蕾’蓝靛果果实于2015年6月采自
黑龙江省海林市,采收当天立即运回沈阳农业大学食品
学院实验室,置于-20 ℃冰箱中冷冻保存,备用。
无水乙醇(分析纯)、盐酸(分析纯)、乙腈(色
谱纯)、甲酸(色谱纯)、氯化钾、无水乙酸钠 沈阳
化学试剂厂;总抗氧化能力(total antioxidant capacity,
T-AOC)试剂盒、2,2’-联氨-二(3-乙基苯并噻唑-6-
磺酸)二铵盐(2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-
sulphonate),ABTS)、K2S2O8、1,1-二苯基-2-三硝基苯
肼(1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)、矢车菊-3-
葡萄糖苷标准品、福林-酚试剂 北京鼎国生物试剂有
限公司。
1.2 仪器与设备
V5800型紫外-可见分光光度计 上海光析仪器有限
公司;酸度计、电子天平 赛多利斯科学仪器(北京)
有限公司;SB25-12DTN超声波清洗机 宁波新芝生物
科技股份公司;JYL-C012九阳榨汁机 九阳股份有限
责任公司;旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂;层析实
验冷柜、BT-100B数显恒流泵 上海沪西分析仪器厂有
限公司;LGO.2型真空冷冻干燥机 信阳速冻设备制造
有限公司;高效液相色谱仪(配DAD检测器)、质谱仪
美国Agilent公司;酶标仪 美国Bio-Tek公司。
1.3 方法
1.3.1 花色苷的提取
称取600 g蓝靛果果实常温条件下避光解冻,用打
浆机打浆后放入6 个2 000 mL烧杯中(每个烧杯中放入
100 g),再分别加入1 000 mL 含0.1%盐酸酸化的60%
无水乙醇,玻璃棒搅拌后用保鲜膜封口,超声辅助提取
90 min,提取温度为40 ℃。提取液经抽滤、旋转蒸发除
去乙醇得到花色苷浓缩液,4 ℃条件下冷藏备用。
1.3.2 花色苷的纯化
根据前期花色苷纯化优化实验结果,花色苷纯化条件
如下:称取一定量的D101型大孔树脂,活化后湿法装柱,
在层析实验冷柜中用恒流泵将200 mL蒸馏水以4 mL/min
的流速平衡过滤柱,平衡后以相同流速泵入花色苷浓缩
液,泵入量为大孔树脂体积的3/4,然后静止吸附12 h。
花色苷充分吸附后用400 mL蒸馏水以15 r/min的转速
洗掉花色苷中的糖等水溶性杂质,之后用无水乙醇以
8 r/min的转速对花色苷进行洗脱,收集洗脱液。得到的
洗脱液经旋转蒸发除去乙醇后进行冷冻干燥,得到的花
色苷粉末(纯度由未纯化前的4.76%提升到35.34%)分装
于2 mL离心管中,密封,于-20 ℃条件下贮藏备用。
1.3.3 总花色苷及总多酚含量测定
采用pH示差法 [15-16]测定提取物粉末中总花色苷含
量。称取提取物粉末0.01 g置于试管中,用10 mL蒸馏水
溶解,将得到的溶液稀释10 倍后,进行光谱扫描,确
定其最大吸收波长。各取稀释后样品1 mL,分别加入
pH 1.0、4.5的缓冲溶液9 mL,常温平衡20 min后,于最
大吸收波长λmax和700 nm波长处测定其吸光度A,以蒸
馏水为空白,按式(1)计算总花色苷含量。ᙫ㣡㢢㤧ਜ਼䟿/˄mg/g˅= ∆AhVhnhMεhm (1)
式中:∆A=(Aλmax-A700 nm)pH 1.0-(Aλmax-A700 nm)pH 4.5;
ε为矢车菊 -3-葡萄糖苷的消光系数(26 900);n为
稀释倍数;M为矢车菊 -3 -葡萄糖苷的相对分子质量
(449.2);V为待测样品体积/mL;m为样品质量/g。
采用福林-酚法[17-18]测定提取物粉末中总多酚含量。
称取花色苷粉末0.01 g,10 mL蒸馏水溶解后稀释10 倍,
准确量取1 mL稀释液于20 mL试管中,依次加入5.0 mL蒸
馏水、1 mL福林-酚显色剂及3 mL 7.5%Na2CO3溶液,用
涡轮振荡器振荡均匀,避光显色2 h,在765 nm波长处测
其吸光度。以没食子酸为标准品绘制标准曲线,得到回
归方程为:y=0.081 05+5.011 43x(R2=0.999 6),没食
子酸在0~0.1 mg/mL范围内具有良好的线性关系,根据
标准曲线方程求出稀释液中总多酚质量浓度。总多酚含
量按式(2)计算。
84 2016, Vol.37, No.19 食品科学 ※基础研究
X˙ρhVhNm (2)
式中:X为样品中总多酚含量/(mg/g);ρ为标准曲
线上查得的稀释液的总多酚质量浓度/(mg/mL);V为
待测液体积/mL;N为稀释倍数;m为样品质量/mg。
1.3.4 花色苷组成鉴定
样品准备:准确称取10 µg样品,溶于2 mL色谱级甲
醇中,经0.45 µm膜过滤,-4 ℃备用分析。
根据预实验结果,高效液相色谱测定条件:1100
高效液相色谱仪,配DAD检测器;色谱柱:C18色谱柱
(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相A:乙腈;流动
相B:0.1%甲酸水溶液;梯度洗脱程序:0~45 min,
A:0~45%;45~50 min,A:0%。流速:0.7 mL/min;
柱温:25 ℃;进样量20 μL;检测波长:520 nm。
质谱条件:正离子模式,全自动二级质谱扫描,
扫描范围m /z 50~1 000;干燥气压力30 ps i;流速
12 L/min;温度350 ℃,毛细管电压3 500 V。
1.3.5 T-AOC测定
釆用T-AOC法测定‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物、
矢车菊-3-葡萄糖苷和VC的T-AOC,具体操作参照T-AOC
试剂盒说明书进行。实验重复3 次,取平均值。T-AOC
单位定义为在37 ℃时,每分钟每毫克待测样品,使反应
体系的吸光度每增加0.01时,为一个T-AOC单位(U)。
T-AOC按式(3)计算。
T-AOC/ U/mg ˙hA测定-A对照0.01h30 ৽ᓄ⏢ᙫփ〟/mLਆṧ䟿/mLhᖵ⍻⏢䍘䟿⎃ᓖ/˄mg/mL˅ (3)
1.3.6 ABTS+·清除能力测定
参照Li Xican等[19]的方法略作修改。将0.2 mL 7.4 mmol/L
ABTS与0.2 mL 2.6 mmol/L K2S2O8室温避光放置12 h,将
混合液稀释40~50 倍至A734 nm=0.70±0.02得到ABTS工
作液。量取0.8 mL ABTS工作液于1.5 mL离心管中,加入
0.2 mL 80%乙醇,振荡10 s以充分混匀,静置6 min后在
734 nm波长处测定反应液吸光度A0;再量取0.8 mL ABTS
工作液于1.5 mL离心管中,加入0.2 mL样品溶液,振荡
10 s以充分混匀,静置6 min后在波长734 nm波长处测定
反应液吸光度A。ABTS+·清除率按式(4)计算。
ABTS+g清除率/%= ×100A0-AA0 (4)
1.3.7 DPPH自由基清除能力测定
参 考 吕 春 茂 等 [ 2 0 ]的 方 法 并 略 作 修 改 。 称 取
0 .198 4 g DPPH用无水乙醇溶解,定容至50 mL,
作为储备液。吸取 2 m L D P P H储备液,用无水乙
醇定容至100 mL,作为DPPH工作液待测。配制反
应液:1)100 μL DPPH溶液+100 μL 70%乙醇;
2)100 μL DPPH 溶液+100 μL样品溶液;3)100 μL 70%
乙醇+ 1 0 0 μ L 样品溶液。在常温条件下避光反应
30 min 后,以70%乙醇作空白,分别在517 nm波长处测
定3 种反应液的吸光度依次为A0、Ai、Aj。DPPH自由基清
除能力按式(5)计算。
DPPH㠚⭡ส␵䲔⦷/%= ×100A0ˉAiˇAjA0 (5)
1.4 数据统计分析
实验数据采用SPSS 16.0软件进行数据显著性及相关
性分析,采用单因素方差分析的Tukey’s test用于显著性
分析,且P<0.05,采用Origin 8.0 软件作图。
2 结果与分析
2.1 ‘蓓蕾’蓝靛果中总花色苷含量及总酚含量
本实验提取、纯化、冷冻干燥后得到花色苷粉末
12 g,提取率为2%。采用pH示差法测定‘蓓蕾’蓝靛果
花色苷提取物中总花色苷含量为(353.35±0.79) mg/g,
换算成鲜果含量为(706.70±1.58)mg/100 g鲜果;用
福林-酚法测定其总酚含量为(474.01±2.12)mg/g,换
算成鲜果含量为(948.02±4.25)mg/100 g鲜果。经分
析,总花色苷含量占总酚含量的74.54%,说明‘蓓蕾’
蓝靛果主要的多酚类物质为花色苷类化合物。
2 .2 ‘蓓蕾’蓝靛果中花色苷高效液相色谱 -质谱
(high performance liquid chromatography-mass spectrum/
mass spectrum,HPLC-MS/MS)联用法分析
0 10 20؍⮉ᰦ䰤/min 30 400100mAU1 2001 400 1234 567 89 10
图 1 ‘蓓蕾’蓝靛果提取物中花色苷HPLC图
Fig. 1 HPLC of anthocyanins from ‘Beilei’ Lonicera caerulea berry extracts
表 1 HPLC-MS/MS法鉴定‘蓓蕾’蓝靛果提取物中花色苷组成
Table 1 Identification of anthocyanins in ‘Beilei’ Lonicera caerulea
berry extracts by HPLC-MS/MS
峰号 保留时间/min 峰面积
所占
比例/%
分子离子/
(m/z)
碎片离子/
(m/z) 花色苷名称
1 17.699 926.1 2.346 611 449、287 矢车菊-3,5-二己糖苷[21-22]
2 18.477 56.5 0.143 737 575、287 矢车菊-3-己糖苷衍生物[22]
3 18.585 296.6 0.751 897 735、573、287 矢车菊-己糖苷聚合体[22]
4 19.346 185.9 0.471 625 463、301 芍药素-3,5-二己糖苷[21-22]
5 20.644 35 792.7 90.679 449 287 矢车菊-3-葡萄糖苷[21-22]
6 22.088 252.4 0.639 433 271 天竺葵素-3-葡萄糖苷[21]
7 22.748 1 544.2 3.912 463 301 芍药素-3-葡萄糖苷[21-22]
8 23.364 6.5 0.016 609 463、301 芍药素-3-芸香糖苷[21]
9 26.087 101.5 0.257 491 287 矢车菊-3-乙酰基己糖苷[22]
10 26.374 94.1 0.238 897 735、573 矢车菊-3-己糖苷聚合体[22]
注:表中峰号与图 1 对应。
※基础研究 食品科学 2016, Vol.37, No.19 85
通过HPLC-MS/MS对‘蓓蕾’蓝靛果中花色苷进行
成分鉴定分析,得到色谱图(图1)及质谱图(图2)。
结合各物质的色谱保留时间、分子离子峰和碎片离子
峰,鉴定出‘蓓蕾’蓝靛果中有11 种花色苷(表1,其中
第11 种花色苷trA矢车菊-3-芸香糖苷只能在质谱条件下被
检测到,未在表中显示)。
448.9
611.0
651.0
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0 A
100 200 300 400 500 600 700 800 900
m/z
ᕪᓖ˄h106 ˅
287.1
448.8
0
1
2
3 B
100 200 300 400 500 600 700 800 900
m/z
ᕪᓖ˄h105 ˅
图 2 矢车菊-3,5-二己糖苷的一级(A)、二级(B)质谱图(峰1物质)
Fig. 2 MS (A) and MS/MS (B) spectra of cyanidin-3,5-dihexoside
(corresponding to peak 1)
287.1
458.5 545.2 606.3
659.3
701.2
750.3
820.8
865.4
897.2
490.9
0
1
2
3
A
100 200 300 400 500 600 700 800 900
m/z
ᕪᓖ˄h105 ˅
287.1
0
2
4
6 B
100 200 300 400 500 600 700 800 900
m/z
ᕪᓖ˄h104 ˅
图 3 矢车菊-3-乙酰基己糖苷的一级(A)、二级(B)质谱图(峰9物质)
Fig. 3 MS (A) and MS/MS (B) spectra of cyanidin3-(6” acetylhexoside)
(corresponding to peak 9)
137.1
287.1
489.0
568.8
624.9
896.3
448.8
0
2
4
6
8 A
100 200 300 400 500 600 700 800 900
ᕪᓖ˄h105 ˅
m/z
287.1
0
1
2
3 B
100 200 300 400 500 600 700 800 900
m/z
ᕪᓖ˄h105 ˅
图 4 矢车菊-3-芸香糖苷的一级(A)、二级(B)质谱图(trA物质)
Fig. 4 MS (A) and MS/MS (B) spectra of cyanidin-3-rutinoside
(corresponding to peak trA)
由参考文献[23-24]可知,碎片离子m/z 287为矢车菊
素的配离子峰,m/z 301为芍药素的配离子峰,m/z 271为
天竺葵素的配离子峰。以峰1物质质谱图例进行详细分
析,其他物质质谱图不一一列出。由图2可知,峰1物质
分子离子m/z 611,其碎片离子m/z 499是由母离子失去一
分子己糖[M-162]+得到,m/z 287与m/z 499之间也相差一
分子己糖,表明峰1为含有2 个己糖的矢车菊花色苷,则
峰1物质为矢车菊-3,5-二己糖苷[25]。同理,峰4物质为芍药
素-3,5-二己糖苷。表1中5、6、7号峰分子离子分别为m/z
449、m/z 433、m/z 463,均为失去一分子葡萄糖[M-162]+
得到,结合其保留时间可知,峰5~7物质分别为矢车
菊-3-葡萄糖苷、天竺葵素-3-葡萄糖苷和芍药素-3-葡萄糖
苷。峰2物质分子离子m/z 737,其碎片离子m/z 575,是
由母离子失去一分子己糖[M-162]+得到,m/z 287与m/z
575之间相差质量数为308,但残基物质不能确定,所以
峰2物质为矢车菊-3-己糖苷衍生物,这与Veberic等[21]研
究结果一致。峰8物质分子离子m/z 609,其碎片离子为
m/z 463和m/z 301,是由母离子连续失去一分子脱水甲
基戊糖(m/z 146)和一分子己糖(m/z 162)而得,所
以峰8物质为芍药素-3-芸香糖苷[22,26]。峰9物质分子离子
m /z 491,其碎片离子m /z 287是由母离子失去一分子
乙酰化己糖(m/z 204)得到 [27],所以峰9物质为矢车
菊-3-乙酰基己糖苷,该物质被首次在蓝靛果花色苷提
取物中发现,其二级质谱图见图3。峰3和峰10物质分
子离子相同均为m/z 897,其碎片离子分别为m/z 735、
m/z 573、m/z 287、m/z 735和m/z 573,根据其保留时间
及文献[23-24]分析可知峰3物质为矢车菊-己糖苷聚合
体,峰10物质为矢车菊-3-己糖苷聚合体。此外,trA矢车
菊-3-芸香糖苷在质谱条件下被检测到(图4),但是该物
质在液相色谱中没有出峰,这与Lohachoompol等[28]的研
究结果相一致,出现该现象的原因可能是矢车菊-3-芸香
糖苷含量很少,在较为灵敏的质谱检测系统中可以检测
到。所有花色苷单体中矢车菊-3-葡萄糖苷含量最高,占
峰面积的90.679%,与Chen Liang等[29]对野生蓝靛果中花
色苷成分分析的研究结果相似。
86 2016, Vol.37, No.19 食品科学 ※基础研究
2.3 ‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物抗氧化能力比较分析
2.3.1 T-AOC比较分析
T-
A
O
C/
˄U/mg ˅ ṧ૱b ba㣡㢢㤧ᨀਆ⢙ ⸒䖖㧺-3-㪑㨴㌆㤧 VC05101520253035
小写字母不同表示差异显著(P<0.05)。下同。
图 5 ‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物、矢车菊-3-葡萄糖苷和VC的
T-AOC比较
Fig. 5 T-AOC of ‘Beilei’ L. caerulea berry anthocyanin extracts,
cyanidin-3-glucoside and VC
用T-AOC法分别测定‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取
物、矢车菊-3-葡萄糖和VC的T-AOC,每种物质做3 组平
行实验,数据取3 个平行组的平均值,结果见图5。结果
表明,矢车菊-3-葡萄糖苷的T-AOC值最高为27.6 U/mg,
其次为‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物(10.47 U/mg)。并
且Tukey’s test分析表明,矢车菊-3-葡萄糖苷的T-AOC显著
高于‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物和VC(4.395 U/mg)
(P<0.05)。‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物的T-AOC
比VC高6.07 U/mg,但二者无显著性差异(P>0.05)。
‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物的T-AOC低于矢车菊-3-葡
萄糖苷,可能是因为提取物中矢车菊-3-葡萄糖苷含量相
对较低。此外,相关性分析表明,‘蓓蕾’蓝靛果花色
苷提取物的T-AOC与总花色苷和总酚含量呈显著正相关
(P<0.05,R2=0.881;P<0.05,R2=0.902)。
2.3.2 ABTS+·清除能力比较分析
A
BT
S+
Ь␵䲔⦷/% a ba
0
20
40
60
80
100 ṧ૱㣡㢢㤧ᨀਆ⢙ ⸒䖖㧺-3-㪑㨴㌆㤧 VC
图 6 ‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物、矢车菊-3-葡萄糖苷和VC的
ABTS+·清除能力比较
Fig. 6 ABTS+· scavenging activity of ‘Beilei’ L. caerulea berry
anthocyanin extracts, cyanidin-3-glucoside and VC
ABTS+·清除能力测定是评估化合物抗氧化能力
的重要指标。实验分别测定相同质量浓度(50 μg/mL)
‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物、矢车菊-3-葡萄糖和VC的
ABTS+·清除率,每种物质做3 组平行实验,数据取3 个
平行组的平均值,结果见图6。结果表明,矢车菊-3-葡
萄糖苷和‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物的ABTS+·
清除率分别为94.34%、93.68%,且二者并无显著差异
(P>0.05)。矢车菊-3-葡萄糖苷和‘蓓蕾’蓝靛果花色
苷提取物的ABTS+·清除率均显著高于VC(60.00%)
(P<0.05)。相关性分析表明,‘蓓蕾’蓝靛果花色苷
提取的ABTS+·清除能力与总花色苷和总酚含量呈显著
正相关(P<0.05,R2=0.804;P<0.05,R2=0.882)。
2.3.3 DPPH自由基清除能力比较分析
D
PP
H
㠚⭡ส␵䲔⦷/% b ca
0
10
20
30
40
50
70
60
80 ṧ૱㣡㢢㤧ᨀਆ⢙ ⸒䖖㧺-3-㪑㨴㌆㤧 VC
图 7 ‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物、矢车菊-3-葡萄糖苷和VC的
DPPH自由基清除率比较
Fig. 7 DPPH radical scavenging activity of ‘Beilei’ L. caerulea berry
anthocyanin extracts, cyanidin-3-glucoside and VC
分别测定相同质量浓度(50 μg/mL)‘蓓蕾’蓝靛
果花色苷提取物、矢车菊-3-葡萄糖和VC的DPPH自由基
清除率,每种物质做3 组平行实验,数据取3 个平行组的
平均值,结果见图7。结果表明,3 种不同物质的DPPH
自由基清除能力具有显著差异(P<0.05)。矢车菊-3-葡
萄糖苷的DPPH自由基清除率最高,为72.13%,其次为花
色苷提取物和VC,分别为44.45%和21.33%。此外,显著
性分析表明,矢车菊-3-葡萄糖苷的DPPH自由基清除率显
著高于‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物和VC(P<0.05);
同时,‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取物的DPPH自由基清除
率显著高于VC(P<0.05)。此外,相关性分析表明,
‘蓓蕾’蓝靛果花色苷提取的DPPH自由基清除能力与总
花色苷和总酚含量呈显著正相关(P<0.05,R2=0.831;
P<0.05,R2=0.892)。
3 结 论
本实验对蓝靛果栽培品种——‘蓓蕾’中花色
苷进行提取分离并纯化,测定其花色苷提取物中
※基础研究 食品科学 2016, Vol.37, No.19 87
总花色苷和总多酚含量分别为(3 5 3 . 3 5±0 . 7 9)、
(474.01±2.12) mg/g。通过HPLC-MS/MS鉴定出11 种
花色苷,分别为矢车菊-3,5-二己糖苷、矢车菊-3-己糖苷
衍生物、矢车菊-己糖苷聚合体、芍药素-3,5-二己糖苷、
矢车菊-3-葡萄糖苷、矢车菊-3-芸香糖苷、天竺葵素-3-葡
萄糖苷、芍药素-3-葡萄糖苷、芍药素-3-芸香糖苷、矢车
菊-3-乙酰基己糖苷、矢车菊-3-己糖苷聚合体。其中矢车
菊-3-葡萄糖苷含量最高,占峰面积的90.679%。另外,
T-AOC、ABTS+·和DPPH自由基清除能力测定结果均
表明,矢车菊-3-葡萄糖苷的T-AOC及ABTS+·和DPPH
自由基清除能力均强于花色苷提取物和VC。综上可知,
‘蓓蕾’蓝靛果中花色苷含量和种类丰富,且其中含
量最高的矢车菊-3-葡萄糖苷有很强的抗氧化能力,其
T-AOC为VC的6.28 倍,ABTS+·和DPPH自由基清除能
力分别为VC的1.57和3.37 倍。
参考文献:
[1] 王振宇, 田福. 蓝靛果红色素稳定性的研究[J]. 中国食品添加剂,
2007, 18(3): 102-105. DOI:10.3969/j.issn.1006-2513.2007.03.020.
[2] 包怡红, 李文星, 齐君君, 等. 提取条件对蓝靛果花色苷抗氧化活性
的影响[J]. 食品科学, 2010, 31(22): 20-25.
[3] PALÍKOVÁ I, HEINRICH J, BEDNÁŘ P, et al. Constituents and
antimicrobial properties of blue honeysuckle: a novel source for
phenolic antioxidants[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,
2008, 56(24): 11883-11889. DOI:10.1021/jf8026233. 2008. 11.24.
[4] 刘桂萍, 汪宗仁, 马炳清, 等. 勃利县栽培种植蓝靛果新品种-蓓蕾
栽培技术[J]. 中国林副特产, 2015(3): 64-65. DOI:10.13268/j.cnki.
fbsic.2015.03.031.
[5] 李英福, 汪宗仁. 浅谈蓝靛果新品种——“蓓蕾”新技术[J]. 农村实用
科技信息, 2015(8): 3. DOI:10.3969/j.issn.1674-0653.2015.08.001.
[6] BAŞKAN K S¸ TÜTEM E, AKYÜZ E, et al. Assessment of the
contributions of anthocyanins to the total antioxidant capacities of
plant foods[J]. European Food Research and Technology, 2015, 241:
529-541. DOI:10.1007/s00217-015-2482-2.
[7] PHILPOTT M, LIM C C, FERGUSON L R. Dietary protection against
free radicals: a case for multiple testing to establish structure-activity
relationships for antioxidant potential of anthocyanic plantspecies[J].
International Journal of Molecular Sciences, 2009(10): 1081-1103.
DOI:10.3390/ijms10031081.
[8] 徐贞贞, 廖小军. 花色苷生理功能研究进展[J]. 中国食物与营养,
2014, 20(10): 65-68. DOI:10.3969/j.issn.1006-9577.2014.10.017.
[9] 郑韵 , 董全 . 花色苷在体内的药理活性及其作用机制研究进
展[J]. 食品工业科技, 2014, 35(10): 396-400. DOI:10.13386/
j.issn1002-0306.2014.10.079.
[10] YI Weiguang, FISCHER J, KREWER G, et al. Phenolic compounds
from blueberrise can inhibit colon cancer cell proliferation and induce
apoptosis[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2005, 53:
7320-7329. DOI:10.1016/j.semcancer.2007.05.001.
[11] JUNG H, LEE H J, CHO H, et al. Anthocyanins in Rubus fruits
and antioxidant and anti-inflammatory activities in RAW 264.7
cells[J]. Food Science and Biotechnology, 2015, 24(5): 1879-1886.
DOI:10.1007/s10068-015-0246-1.
[12] 胡济美 , 籍保平 , 周峰 , 等 . 大兴安岭笃斯越橘花色苷成分鉴
定研究[J]. 食品科学 , 2009, 30(10): 239-241. DOI:10.3321/
j.issn:1002-6630.2009.10.056.
[13] JO Y N, JIN D E, JEONG J H, et al. Berry extracts effect of
anthocyanins from rabbit-eye blueberry (Vaccinium virgatum) on
cognitive function in miceunder trimethyltin-induced neurotoxicity[J].
Food Science and Biotechnology, 2015, 24(3): 1077-1085.
DOI:10.1007/s10068-015-0138-4.
[14] KRAUJALYTĖ V, VENSKUTONIS P R, PUKALSKAS A, et al.
Antioxidant properties, phenolic composition and potentiometric
sensor array evaluation of commercial and new blueberry
(Vaccinium corymbosum) and bog blueberry (Vaccinium uliginosum)
genotypes[J]. Food Chemistry, 2015, 118: 583-590. DOI:10.1016/
j.foodchem.2015.05.031.
[15] 宋德群 , 孟宪军 , 王晨阳 , 等 . 蓝莓花色苷的pH示差法测定[J].
沈阳农业大学学报 , 2013 , 43(2) : 231-233 . DOI :10 .3969 /
j.issn.1000-1700.2013.02.019.
[16] 杨兆艳. pH示差法测定桑椹红色素中花青素含量的研究[J]. 食品科
技, 2007, 32(4): 201-202. DOI:10.3969/j.issn.1005-9989.2007.04.060.
[17] 李斌, 雷月, 孟宪军, 等. 响应面法优化超声波辅助提取蓝靛果多
酚工艺及其抗氧化活性研究[J]. 食品科学, 2015, 36(22): 33-39.
DOI:10.7506/spkx1002-6630-201522006.
[18] 卜彦花, 周娜娜, 王春悦, 等. 福林酚试剂法和紫外分光光度法测定
冬枣多酚含量的比较研究[J]. 中国农学通报, 2012, 28(1): 212-217.
DOI:10.3969/j.issn.1000-6850.2012.01.041.
[19] LI Xican, LIN Jing, GAO Yaoxiang, et al. Antioxidant activity and
mechanism of Rhizoma Cimicfugae[J]. Chemistry Central Journal,
2012, 6: 140. DOI:10.1186/1752-153X-6-140.
[20] 吕春茂, 王新现, 包静, 等. 越橘果实花色苷的体外抗氧化性[J]. 食
品科学, 2010, 31(23): 27-31.
[21] VEBERIC R, SLATNAR A, BIZJAK J, et al . Anthocyanin
composition of different wild and cultivated berryspecies[J]. LWT-
Food Science and Technology, 2015, 60(1): 509-517. DOI:10.1016/
j.lwt.2014.08.033.
[22] MYJAVCOVÁ R, MARHOL P, KŘEN V, et al. Analysis of
anthocyanin pigments in Lonicera (Caerulea) extracts using
chromatographic fractionation followed by microcolumn liquid
chromatography-mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A,
2010, 1217(51): 7932-7941. DOI:10.1016/j.chroma.2010.05.058.
[23] 罗赟, 陈宗玲, 宋卫堂, 等. 草莓果实花色苷成分组成鉴定及分
析[J]. 中国农业大学学报, 2014, 19(5): 86-94. DOI:10.11841/
j.issn.1007-4333.2014.05.12.
[24] 赵善仓 , 刘宾 , 赵领军 , 等 . 蓝、紫粒小麦籽粒花色苷组成分
析[J]. 中国农业科学, 2010, 43(19): 4072-4080. DOI:10.3864/
j.issn.0578-1752.2010.19.020.
[25] 刘德江, 杜汉军, 申健. 蓝靛果花色苷研究进展[J]. 内蒙古农业科技,
2012(4): 44-45. DOI:10.3969/j.issn.1007-0907.2012.04.020.
[26] 谭亮, 董琦, 曹静亚, 等. 黑果枸杞中花色苷的提取与结构鉴定[J].
天然产物研究与开发, 2014(11): 1797-1803.
[27] 舒希凯, 赵恒强, 王岱杰, 等. 高效液相色谱-电喷雾串联质谱法鉴
定芍药花色苷[J]. 食品与药品, 2013, 15(1): 38-41. DOI:10.3969/
j.issn.1672-979X.2013.01.013.
[28] LOHACHOOMPOL V, MULHOLLAND M, SRZEDNICKI G, et al.
Determination of anthocyanins in various cultivars of highbush
and rabbiteye blueberries[J]. Food Chemistry, 2008, 111: 249-254.
DOI:10.1016/j.foodchem.2008.03.067.
[29] CHEN Liang, XIN Xiulan, LAN Rong, et al. Isolation of cyanidin
3-glucoside from blue honeysuckle fruits by high-speed counter-
current chromatography[J]. Food Chemistry, 2014, 152: 386-390.
DOI:10.1016/j.foodchem.2013.11.080.