全 文 ：果 树 学 报2 0 0 5, 2 2 ( 3 ) : 2 2 0 一 2 2 3
J o u r n a l o f F r u i t S e i e n e e
葛枣称猴桃组织培养中的
器官形成与植株再生
刘永立 ’ ,2 , 兰大伟 ’ , 毕静华 陈 超 T a k a s h i H a r a d a Z
(
’ 浙江大学 园艺系 农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室 , 杭州 3 1 00 29 ;
Z G r a d u a t e s e h o o l o f A gh
e u lt u re
,
H o k k a id o U n i v e rs it y
,
S a p p o or 0 60 )
摘 要 : 以葛枣称猴桃 (A ct i in d ia p o匀, m a )的叶柄为外植体 , 通过愈伤组织的形成产生不定芽从而建立了高效的再
生系统 。 在附加蔗糖 ( 30 g/ L ) ,琼脂 ( 8 g/ L )和植物生长调节物质 IBA (0 、 0 . 0 1 、 l 、 10 林m o l/ L )与 CP p U ( 0 、 0 . 1 、 l 卜rn o F L )
的全组合培养基中 , IB A 和 CP P U 对愈伤组织的形成有促进作用 。 不定 芽从叶柄形成的愈伤组织表 层分化 出来 ,
C>lP U 对不定芽的分化有良好的促进效果 , 而高浓度的 BI A 对不定芽的分化有抑制作用 。 将分化的枝芽转移至含有
1 网 lo F L N A A 的 B W 培养基 上 , 4 0 d 后发根率为 10 0% , 并长成健康植株 。
关键词 : 葛枣称猴桃 ; 不定芽 ; CP P U ; BI A
中图分类号 : 5 66 3 .4 文献标识码 : A 文章编号 : 1 00 9一 99 80 (2 00 5 )0 3一 2 20一0 4
O r g a n fo r m a t i o n a n d P l a n t r e g e n e r a t i o n in v i tr o o f A e ha id 记 P o ly g a m a
L IU Y o n g一111 2 , L A N D a 一 w e i ’ , B l J i n g一 h u a ,
,
C H E N C h a o
’ ,
T a k a s h i H ar a d a Z
(’ lZ ej i。嗜 nU i o e sr iyt , hT e iM n 。 `叮 of A邵 e u l` u re 3 L ab of H o 邝 ic u l` u心 lP an ` C or w `h , D e o e l叩me n ` & B i o ` e e h on l叨 , H山 l岁h o u , hZ el i。够
了1 0 02 夕Ch i n a ; ZCdrn ,
`以 e cS h o o l of A邵 i e u l乙u er , oH k k瓜do nU i o e rs i ty , 柳尸o ro 0 6-0 舒8 9柳 an)
A b s t r a c t : Pe t io l e e x p l a n t s e o ll e e t e d fro m A
e t in id i a P o匀, m a w e er e u lt u er d o n BW m e d ia (a e o m b i n e d m e d i u n飞 o f h alf
s to n g th s o f b o th b or a d一 l e疵 d t r e e m e d i u m a n d w o o dy p l a n t m e d i u m ) e o n t a i n i n g 3 0酬 L s u e or s e a n d s 岁 L a g a r , a n d 12
e o n lb in a t io n s o f IBA (0
,
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.
1
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10 林m o l/ )L a n d CP P U (0 , 0
.
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.
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e x p l a n t s fr o m A
. 尸0 1〕恻刀 l a . Sh o o t fo mr a t io n w a s in e er a s e d w i th th e in e er a s e o f C P P U e o n e e n tar t i o n a n d d e e er a s e d w i th t h e
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.
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e n t h e s h o o t s w e er atr
n s fe r e d t o BW m
e d i u m s u P P le m e n t e d iw t h l 卜m o l/ L N A A a l o n e ,
th e in t a e t s h o o t s s h o w e d a 10 0% or o t i n g ar t e aft
e r
40 d a y s
, a n d 邵e w v e叮 h e al th i ly .
K e y W o r d s
:
A
e `in id i a p o l儿笋 I 71a : Ad v e n t i t i o u s b u d ; S h o o t ; C PP U ; IBA
A b b r e v i a it o n s : NA A : a 一N a p h t h a le n e a e e t ie a e id : IB A : I n d o le b u tiyr
e a e id ; C p p U : N 一 (2
一 Ch lo or 一4 一 p y ir d y l) 一 N
’ 一p h e n y -
lu r e a ; BW
: a e o n lb in e d m e d i u m o f h澎 s tr e n gt h s o f b o th bor a d一 le afe d etr e m e d iu m a n d w o o dy P la n t m e d i u m .
A e t in id i a 尸0 1, , m a
,
g r o w i n g w i ld i n m o u n t a i n o u s
a r e a s i n n o r t h一 e a s t e r n A s i a , h a s h i gh ly fer
e z i n g r e s i s
-
ta n t
.
A l i d t h e fr u i t s a r e o ft e n u s e d fo r e ur d
e m a t e ir a l o f
fr u i t w i n e
.
Th e e s t a b l i s hm e n t o f a n e if
e ie n t e u l t u r e s y s
-
te m fo r m i e r o p r o P a g a t i o n o f A
.
P o l光arn z a p l a n ts w i t h
s u P e r i o r e h a r a e t e r i s t i e s 15 n e e e s s a巧 fo r d o m e s t i e a t i o n
a n d w id e e u l ti v a t i o n
.
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s s u e e u l t u r e o f t h e g e n u s A e
-
t i n id i a h a s b e e n r e p o rt e d
.
A t if r s t
, a d v e n ti t i o u s b u d s r e
-
g e n e r a t e d i n v i tor fr o m s t e m a n d r o o t e x P la n ts o n M S
m e d i u n 、 e o n ta i n i n g Z e a ti n l l ]
.
S o m a ti e e m b刁 0 5 w e r e i n -
d u e e d th r o u g h e n d o s P e r m a n d a n t h e r e u l t u er i n A
.
e h i
-
n e n s is [2一 A n d p l a n t l e t s r e g e n e r a t e d s u e e e s s fu l l y v i a
p or t o P l a s t e u l t u r e o f A
.
e h i n e ns i
s阎 . C PP U w a s af v o r a b l e
fo r s h o o t fo mr
a t i o n for m t h
e e
al
u s o f A
.
d i li e i o s a 网 . A d -
v e n ti ti o u s b u d s r e g e n e r a t e d fr o m e u r e n t s h o o t i n t e r n
-
o d e s a n d g r e w i n t o p l a n t l e t s i n t i s s u e e u l t u r e o f A
.
少邵逮t a a n d A . k o l o m ik t a I7 ,8] . S o m a t i e e m b理0 5 fo r m e d
fr o m i n o i t r o 一 e u l t u r e d r o o t s o n BW 9[] m e d i u m e o n t a i n i n g
Z e a t i n a n d Z
,
4一 D [ , 0]
.
I n th i s er p o rt
,
t o e s ta b l i s h a n e f
if e i e n t m e t h o d fo r v e g e t a ti v e P or Pa g a t i o n a n d P o s s ib l y
fo r g e n e t i e im P r o v e m e n t
,
w e e x a m i n e d t h e i n fl u e n e e o f
g r o wt h r e g u l a to r s o n th e e a l l u s a n d o r g a n fo r m a ti o n
一I父稿 日期 : 2 00 4 一 12一 2 3 接受日期: 2 0 0 5一 0 3一 2 8
作者简介 : 刘永立 , 男 , 教授 , 博士 。
DOI : 10. 13925 /j . cnki . gsxb. 2005. 03. 007
3期 刘永立等 :葛枣称猴桃组织培养中的器官形成与植株再生 (英文 ) 221
r o fm P
e t io l e e xp l n a to s fA
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p o l刀笋盯 Z u.
2 M a ter ial n a s dm
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1 Pl a以 m ster il a
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o l e e xp l an t swer e eo l l e e te dr o fm
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o l dtr e eo A f
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Po l y g c盯 z u
.
At fer r em o a vl o ft hel n e e a a v d
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o l e s w e er w a s h e d w i t h t a P一 w a t e r fo r 30 m i n ,
d ip件d i n 70% e t h a n o l fo r 30 5 , s u far e e s t e ir l i z e d w i t h
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s o d i u m h y P o e h l o ir t e (5%
a v a il a b l e e h l o ir n e )
e o n -
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.
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e e n 2 0 fo r 1 0 m i n a n d t h e n ir n s e d t h o r
-
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.
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Pe t i o l e w e er e u t (5
一 8 m m i n l e n gt h ) a n d P l a e e d o n t h e
m e d i u m (2 5 m )L i
n E r l e n m e y e r fl a s k s w i t h 4 e x p l a n t s
p e r fl as k a n d 6 fl a s k s p e r t r e a tm e n t
.
2
一
2 C ul 加代 Co n山it o璐
BW I列 me d i
u m w a s u s e d a n d s u p p l e m e n t e d w i t h
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0
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1 a n d l 林m o l / )L
.
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w a s s o l id i if e d w i t h s 岁 L a g a r a n d e o n t a i n i n g 3 0 岁L
s u e or s e
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H o mr
o n e s w e er a d d e d a n d t h e PH o f th e m e d i a
w a s a dj
u s t e d t o 5
.
8 w it h 1 m o l / L N a 0 H o r 1 m o l / L H C I
b e fo er a u t o e l a v e a t 12 1℃ fo r 2 0 m i n . T h e e u l tu r e s w e er
m a i n tia n e d i n a 目旧 w t h e h a m b e r a t ( 2 5土 2 )℃ u n d e r a
16 / 8 h Oihg t/ dar k ) p h
o t o p e ir o d w i t h l i gh t s u p p l i e d b y
e o l一 w h i t e fl u o er s e e n t t u b e s a t a n i n t e n s i t y o f a PP or x i
-
m at e ly 50 林m o l/ m Z · 5 . 7 w e e k s l a t e r d a t a w e er e o l le e t -
e d o n e al l u s fo mr
a ti o n
, a n d t h e n u m b e r o f s h o o t s w a s
d e t e mr i
n e d a ft e r 9 w e e k s o f th e e u l t u er
.
23 R o t i in t i a it on Of r e罗 n e ar t e d s ho st
oT
o b t a i n e n o u g h e x P l a n t s
, s h o o t s w e er e u t t o s e g
-
m e n t s w i t h o n e l a t e ar l b u d a b o u t 1 e m a n d p l a e e d o n
BW m e d i u m e o n t a i n i n g l 林m o l / L N A A a n d l 卜m o F L
BA
.
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e r o n e m o n t h
, n e w s h o o t s h a d gor
w n for m l
a t e r
-
al b u d s a n d Por v id e d e x P l a n t s fo r or o t i n g e x P e ir m e n t
.
BW m e d i u m e o n tia n i n g B A (0
a n d l 林m o l / L ) o r/ a n d
N A A (0
,
0
.
1
,
1 a n d 10 卜m o l / )L , 3 0 酬 L s u e or s e a n d
8 g/ L
a g a r w a s u s e d t o i n d u e e or o t s
.
T h e er w e er 2 4 e x
-
P l a n t s 卯 r t er a tme n t . C u l t u er e o n d i t io n s w e er id e n t i e al
杭ht a bo v e . R e se n e e of or t s w as er e o记 e d aft e r 4 0 d a y s
试 ht e e ul tur e `
3 R e s u l t s a n d di s e u s s i o n
蕊 I C油Ilus fo n口 a lt o n
N
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ou ld ge
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e iw t h o u t p l a n t脚wt h er g -
u l a t o r a d d e d (T a b l e l )
.
C a l li o e e u r e d for m tw
o e u t
s id e s o f e x p l a n t s i n t h e m e d iu m e o n t a i n i n g 0
.
1 卜m o l / L
I BA a n d 0
.
1 林m o l / L C P P U . C a l l i a PP e a er d ger
e n i n
e o l o r a n d e o m P a e t i n te x t u r e
.
A s a (
: o n t r a s t
, e a l l i o e
-
e u r e d i n t w o e u t s id e s a n d b o t t o m o f s e g m e n t s t o u e h i n g
w i t h n l e d i u m e o n t a i n i n g l 林m o l / L IBA a n d l 卜m o l / L
C PP U
.
C a l l i a p p e a er d w h i t e i n e o lo r a n d lo s e i n te x
-
t u r e
, a n d 脚w v e yr v i g o or u s e v e n e o v e er d t h e w h o l e e x -
P l a n t s
.
T a b le 1 E n触C st o f d in触理n t e o m b in 日d o ns o f a u x in a n d
e y ot 址 in n o n c a】lus fo n 旧a d o n fr o m 碑U o k se g m e n肠 o f A .
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2士D . 5
8
.
5士0 . 5
1 1
.
1土0 . 6
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.
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.
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D a t a w e er ta k e n a ft e r 7 w e e k
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M e a n 上 S E ( S E s l a n d a n] e o
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.
In t e mr
s o f t h e fo mr
a t i o n ar t e o f e a l lu s
,
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th a t t h e e a l lu s fo mr
a t i o n ar t e w a s z e or i n t h e m e d i u m
w i t h o u t P l a n t g or w t h er gu l
a to r a dd e d
.
W h e n t h e m e d ia
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,
i n t h e t er a tm e n t o f o
.
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a ti o n r a te w a s 7 9
.
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,
b u t o t h e r e o n e e n t ar
-
ti o n t r e a tm e n t s e a l l u s fo mr
a t i o n ar t e s al l er a e h e d lX() %
.
W h e n t h e m e d i a o n ly C P P U a d d e d
,
i n th e t er a tm e n t o f
0
.
1 林m o l / L C P PU e al l u s fo mr a t i o n ar t e w as 9 1
.
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o t h e r e o n e e n t ar t i o n t er a tm e n t s e a l l u s fo mr
a ti o n ar te s a l l
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e er a s i n g e o n e e n tar t i o n s o f I BA a n d C P P U
.
W h e n th e
e o n e e n t ar t i o n s o f C P PU w e er lo w e r
,
t h e s i z e s o f e a l l i
e n l a gr
e d q u ie k ly w i t h i n e r e a s i n g o f IB A e o n e e n加t i o n s .
H o w e v e r
,
w h e n th e e o n e e n t ar t io n s o f C P PU w e er h ihg
e r
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IB A
3
一
2
s i z e s o f e a ll i e n la 飞e d s l o w ly w i th t h e i n e er as i n g o f
C o n C e n t r s t l o n S
.
S h o t fo mr
a t i o n fr o m 碑 it o l e e x P la n tS
A d v e n t i t io u s b u d s w e er g e n e ar t e d for m ht
e
of e a l l i d e ir v e d for m
e u t s id e s Of
e x p l a n t s (F i g
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l )
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22 2果 树 学 报 22卷
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at io n o fade n vt it io s ub u ds w as s i gn i i fe an t lye e f
e te d
by t he e e e o n n t r at io n s o C p p U fn adB A I(介 b一 e Z ) .we
o fun dn o ad ve n t it io s ub u de r ge e n r ate do n t he me di u m
wit h o ut CP P U
.
In t he te s te dt re at me n t s
,
b o t h fo mr
a t i o n
ar te a n d th e n u m b e r o f a d v e n t i ti o u s b u d s i n e er a s e d w i t h
th e i n e er a s i n g o f C P P U e o n e e n t ar t i o n s
.
W h e n th e e o n
-
c e n t ar t i o n s o f I BA w e er l o w e r (0
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.
0 1 林n l o l / L ) , I BA
h a d n o e f l论e t o n th e fo mr a t i o n o f a d v e n t i t io u s b u d s
.
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e er aft
e r , b o t h th e fo r m a t io n r a t e a n d t h e n u m b e r o f
a d v e n t i ti o u s b u d s d e e er a s e d w i t h th e i n e er a s i n g o f I B A
e o n e e n t ar t io n s
.
d e e er a s e d aft
e r e a l l i w e r e s u b e u l t u r e d
.
T h i s p h e
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n o m e n o n w a s a l s o fo u n d 111 o th e r P l a n t s l
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a t i o n
ar t e o f a d v e n t i t i o u s b u d s d e e r e a s e d w i t h i n e er a s i n g I B A
e o n e e n t ar t io n s
.
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e n u m b e r o f a d v e n t i r i o u s b u d s Pe r e x
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P l a n t i n e er as
e d w i th i n e er a s i n g C P PU e o n e e n t ar t i o n s
a n d d e e er a s e d w i t h i n e er a s i n g IB A e o n e e n t ar t i o n s
.
A s a
e o n t r a s t
,
th e n u m b e r o f a d v e n t i t io u s b u d s fr o m ( : a l l i
s u b e u l t u er d w a s q u i t e lo w e r t h a n t h o s e for m P
e ti o l e (
·
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-
t u r e d
.
T a b l e 3 o f 山 n短er n t c o m b i n a d o sn o f a U址 n 自 n d
T . 址e Z of dj 们er er n t co m ib l . a tio sn o f a ux i n a n d
c y ot 灿川 n o n s h o t fo mr a it o n fr o m 碑 ti o l e - d e ir v ed c a lli o f
A
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P o ly g o ma
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e y ot ld in n on
s ho st fo n . a it o n fr o m 伴 d o le se gm e n st o f G or w th er 四 la t o sr
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4
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.
8 士 0
.
5
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.
6 士《) ,4
0
.
0
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3 期 刘永立等 :葛枣称猴桃组织培养中的器官形成与植株再生 (英文 )2 23
T .b leE 4肠 e cs toA A N f an dA Bo0 0 n r s tf on r lai ton r f o m
b别蛇 r os bo o te di rv e d介 o m伴 U o lef oA .P og y la a m.
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, i t or l刀. A c t a B o t a n i e a S in ie a , 19 8 2 , 2 4 : 3 0 3一 306 .
【4』Frase
r 比 , Hvar e y C F . oS am t i e e lnb 叮。罗n e s i s of rm a n th e r一e ir v de
e al lu s in t w o A e ￡i成 d必 。钾 c ie破J]. cS i H o rt , 19 8 6 , 2 9 : 3 3 5 一 34 6 .
【5】 M i i M , o has h i H . lP a n t l e t re 罗 n e ra t i o n fro m p ro t o p l朋 t s of k iw ifru i t .
A e ￡i n iid a e h ine o is P l a n e h lJI
.
Ae t a H o rt
.
19 8 8
.
2 3 0 : 16 7 一 17 0 .
【6】 S h im u二 I , H i , e h i y , Is h i ka w a 5 . S h o 一of rm a t io n ofr m I n t e rn 记 e
Cal lu s o f Ki w ifru i一(A e ￡in 记如 d “比谕 a) C a n e b y N 一 ( 2一 C h lo or -4 -
py ir d y l )
一 N
`一 ph e n y l u二 a闭 . J Ja p a n 撇 Ho rt 50 1 . 19创】, 5 8 : 84 1-
84 .7
【7 1 L iu Y L . Kas i N , Har d a T . o r g an of n ” at i o n a n d P lan t 倪g e n e ar t i o n
fm m
v丽 o u s t i s s u e s of atr v i n e (A e ￡in 记沁 嘶到加 Plan e h
.
)
e u l t u耐
i n , i t or lJ ]
.
J J a p an S
洲二 Hort cS i
,
19 5
,
64
: 2 6 1一 26 5 .
18」 L iu Y L , N a m ik i H , K~ N
, e t al
.
O r g a n of n 们曰 t i o n ` d P la n t re ge n -
e ar t i o n ofr m i
n t e m de al se 创叱 n一5 o f A e t i n记必 k o肠用认 t a M ax i m . i n in
。 i￡or e u lt u re 【J】. J J a p a n S以 , H o rt cS i . 19 7 6 5 : 6 7 1一 76 .
[9〕 S u , w ar F, Yam m
o t o N
,
aT
n a ka 0
.
P la n t re 罗 n e . t io n in in , 众or
e u l t u er Of leaf
, s t e m an d伴 t io le se 脚 e n t s of 月e t i n记必 p o lyj 押加 M iq
IJ]
.
lP an t T i.
u e Cu l t肠 t t , 19 4 . 1 1: 14一 18 .
110」匕 u Y L , M as u d a K , Har d a T . Plan t le t 二g e n e ar t i o n , o飞 a n of arm
-
t i o n an d
s o
am t i
e e
mb ry
o罗 n e s i s ofr m in 。众or 一e u lt u阁 阴 t t i s s u e o f
A e t i n id ia ko切而 k t叨】. J Ja aP n s x 二 H o rt 阮 i , 19 8 , 6 7 : 7 3 4一 7 3 8 .
[ 1 1 ] S y
o n o K
.
C h a n罗 5 in o rga n fo rm i n g e a p a e i t y o f e a ro t ro t e a llu se s
d u ir n g s u bC u lt u re [J ]
.
P lan t C
e l l Ph y s i o l
,
19 6 5
,
6 :4() 3一 19 .
【12 】未 泽克彦 , 松 田畏生 ,大村三 男 , 山木昭平 . 午巾才 7 少一 少振助
培善绷 胞 力` 白内植物体内 再生 IJ . 圃学 要旨 . 昭 6 2 春 : 19 8 .7
14 0一 14 1 .
【l3] 未泽克彦 . 午今 才7 玲一夕内增 殖技衍 IJ] . 幽及雇: 98 8 , 63 : 13 -
1 3 7
.
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e n 叭e r 4() d a y s o n or t i n g m ed i a .
, M e an 士 S E (S E 。 t` d a司 e , )r .
th e Pl a n t l e t s ger w
v e叮 h e a l th i ly . How e v e r , i n th e ter a t -
m e n t Of 10 林m o U L N A A , e al l i a PP e a er d for m e u t s id e s
Of s h o t
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1 31
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a t e al i
『 e w v i即or u s a n d had n e g a t i v e e fe e t o n or o t fo mr a t i o n .
R e fe er n c e ` :
川 Har 目 a H . nI 。自阳 o r g a n c u l t u , Of A e t in记记 e h i。 。 始 lP an e h . as a
咖 h n iq u e of r ve 罗 t a t i v e m u lt i p li e a* i o n l J」. J H o rt cS i . 19 7 5 , 5 0 : 8 1-
8 3
.
[2】 G u i Y L , M u xJ , X u 仪 . S t u d i e s Of om I’P h o lo ig e al d ife re n t ia t i o n of
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e t s of C h i n e . g o se be 叮 in 。众or lJ I. A e t a Bot an i e a
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2 4: 2 16一 2 2 1 .
13 ] G
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S t u d i e s o n th e h i at o lo盯 a n d h i s toc he m i s t叮 of th e
本刊开辟 “ 信息快递 ”栏 目的启事
为了宜传报道我国果树科学研究 中的重要成果和最新进展 , 本刊将从第 4 期起开辟 “ 信息快递 ”栏 目 ,
凡果树学科的成果鉴定 、 品种审定 、 学术会议 、学术交流等方面的信息 ,均可写成 80 一 1《X刃 字的科技新闻报
道 。 此栏目不收版面费 ,稿酬照付 。 欢迎全国科研 、 教学单位的有关人员积极投稿 。
《果树学报》编辑部
2 00 5 年 5 月 l 日
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