全 文 ：肖凤艳，高郁芳． 黄花忍冬提取物抑菌作用的研究［J］． 江苏农业科学，2011，39(6) :524 － 525．
黄花忍冬提取物抑菌作用的研究
肖凤艳，高郁芳
(吉林农业科技学院，吉林吉林 132101)
摘要:采用滤纸片法和琼脂块法对黄花忍冬不同部位不同溶剂提取物进行了抑菌试验。结果表明，黄花忍冬叶
的正丁醇提取物对真菌细辛叶枯病病原菌的抑制效果最好，抑菌率达到 100%，叶的乙酸乙酯提取物效果最差，抑菌
率只有 13． 3%，两者达到极显著差异;黄花忍冬各部位的乙酸乙酯、正丁醇提取物对大肠埃希菌抑菌效果较好，水的
提取物对大肠埃希菌无抑菌活性。试验表明，黄花忍冬叶的提取物中存在丰富的抗菌天然活性物质，为寻找植物源抑
菌剂提供了理论依据。
关键词:黄花忍冬;抑菌活性;琼脂块法;滤纸片法
中图分类号:S482． 2 + 92 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2011)06 － 0524 － 02
收稿日期:2011 － 04 － 02
作者简介:肖凤艳(1977—) ，女，吉林吉林人，硕士，讲师，主要从事中
药学及中药新产品开发教学和研究工作。Tel: (0432)63509063;
E － mail:gfxfyglz@ 163． com。
黄花忍冬(Lonicera chrysantha)为忍冬科忍冬属植物，分
布于东北、华北、西北等地。花蕾具有清热解毒、散痈消肿的
功效，常用于治疗痈肿疔疮、喉痹、丹毒、热毒血痢等［1］。有
关黄花忍冬的研究较少且多集中于化学成分绿原酸的含量测
定［2 － 4］，而对其提取物的抑菌活性研究未见报道。本研究对
药用植物病害真菌———细辛叶枯病病原菌和人类病原细
菌———大肠埃希菌进行抑菌活性研究，以期为资源的充分利
用及开发新的植物源抑菌剂提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
黄花忍冬花、叶、果实采摘于吉林农业科技学院左家校区
校园内，阴干，备用。
1． 2 供试菌种
大肠埃希菌(E． coli)由吉林农业科技学院微生物实验室
提供;细辛叶枯病病原菌(Mycocentrospora acerina)从吉林农
业科技学院药用植物园得病寄主植物细辛上采用组织分离并
纯化得到。
1． 3 仪器及试剂
YX －400 智能型全自动不锈钢立式电热高压灭菌锅，
YX280B型不锈钢手提式压力蒸汽消毒器，SHP － 1S00 型恒
温培养箱，回流提取器，无菌操作台。乙酸乙酯、正丁醇、乙
醇，均为国产分析纯。
1． 4 方法
1． 4． 1 黄花忍冬不同部位不同溶剂提取物母液的制备 将
黄花忍冬的花 30 g、叶 40 g、果实 45 g粉碎，分别加 95%乙醇
回流提取 3 次，每次 1 h，药渣加水回流提取 3 次，每次 1 h。
分别过滤，合并醇提液，挥发溶剂至浸膏状;合并水提液，挥发
溶剂至浸膏状。将花、叶、果实的醇提部分分别以水分散，依
次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别将有机溶剂萃取液及萃取后
的水相挥发溶剂至浸膏状，分别得到黄花忍冬花、叶、果实的
乙酸乙酯、正丁醇、乙醇、水相 12 个萃取提取物。最后用
95%的乙醇分别将这 12 种浸膏定容，使溶液的质量浓度为
1 g /mL(1 mL提取物中含有 1 g 干中药材样品) ，放入冰箱，
备用。
1． 4． 2 试验菌种的活化扩繁及菌悬液的配制 细辛叶枯病
病原菌的纯化及扩繁:将纯病原菌从冰箱中取出，在无菌操作
台上用接种钩各挑取适量的病原真菌分别接种到 PDA 平板
中央，置 25 ℃的培养箱中，恒温培养 5 ～ 7 d，备用。
大肠埃希菌的活化及菌悬液的配制:将菌种用接种环接
种在牛肉膏蛋白胨培养基上划线斜面培养，用接种环各挑取
适量的细菌，接种于灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，
37 ℃暗培养箱静止恒温培养 24 h，备用。用接种环挑取适量
已活化的细菌，放入含有 20 mL无菌水的无菌试管中，稍加振
摇，即得大肠埃希菌 20 mL的菌悬液。
1． 4． 3 抑菌试验［5］
1． 4． 3． 1 黄花忍冬不同粗提物对细辛叶枯病病原菌的抑制
作用 采用琼脂块法:将 12 种样品液分别取 1 mL 与 10 mL
的 PDA 培养基均匀混合，冷却，得到含药平板，空白对照组
(CK)则加入等量的 95%的乙醇，每种样品设 3 个重复，再用
直径为 0． 6 cm的打孔器取细辛叶枯病病原菌菌饼，将其放入
各处理中央，25 ℃的温度下进行恒温培养。3 d后进行观察，
以后每隔 1 d进行观察，测到第 6 d为止。以十字交叉法测量
菌落直径，并计算抑菌率。菌落生长抑制率 =(对照菌落直
径 － 处理菌落直径)/(对照菌落直径 － 打孔器直径)×
100%。所得结果进行方差分析，进而采用 SNK － q 检验法进
行显著性检验。
1． 4． 3． 2 黄花忍冬不同粗提物对大肠埃希菌的抑制作用
采用滤纸片法:将滤纸片用打孔器打成直径为 0． 8 cm 的圆
片，然后进行干热灭菌，将其放入定容好的 12 种样品液中浸
泡 1 h，将每个平板加入 0． 5 mL已配制的大肠埃希菌的菌悬
液，用三角玻璃棒均匀涂布，将浸泡好的滤纸片放入其中，每
种样品设 3 个重复，对照组(CK)的滤纸片浸泡 95%的乙醇，
放入 37 ℃的培养箱内，恒温培养 24 h。用十字交叉法测量抑
菌圈的直径。用 ψ表示抑菌圈的直径。
—425— 江苏农业科学 2011 年第 39 卷第 6 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2011.06.050
2 结果与分析
2． 1 黄花忍冬的不同提取物对细辛叶枯病病原菌的抑制
作用
由表 1 可知，黄花忍冬叶的正丁醇提取物对细辛叶枯病
病原菌的抑制作用最强，抑菌率达到 100%，与其余提取物在
0． 01 水平上有极显著差异，表现为病原菌完全不生长，效果
最好。叶的乙醇提取物抑菌率也达到 60%以上。其余各部
位提取物也都有不同程度的抑制作用，作用最小的是果实乙
酸乙酯提取物，抑菌率只有 13． 3%。果实的乙酸乙酯提取物
与叶的乙酸乙酯提取物抑菌率在 0． 05 水平上有显著差异。
花的正丁醇和乙醇提取物无显著差异。因此，黄花忍冬的大
部分提取物对此种病原菌的抑制效果偏低，少数表现出强的
抑菌效果，如叶的正丁醇提取物。从结果来看，黄花忍冬叶的
正丁醇提取物和乙醇提取物表现出较强的抑菌活性，可见黄
花忍冬的叶中含有的抑菌活性成分较高。
表 1 黄花忍冬各物提取物对细辛叶枯病病原菌的抑菌率
器官 提取剂
抑菌直径
(mm)
抑菌率
(%)
显著性
0． 05 0． 01
花 乙酸乙酯 30． 8 45． 0 c C
正丁醇 43． 6 16． 4 de D
乙醇 42． 1 19． 7 de D
水 35． 5 34． 4 cd CD
叶 乙酸乙酯 38． 9 26． 7 d D
正丁醇 6． 0 100 a A
乙醇 22． 9 62． 3 b B
水 33． 8 38． 1 cd CD
乙酸乙酯 45． 0 13． 3 e D
正丁醇 36． 0 33． 3 cd CD
果 乙醇 27． 0 53． 3 bc BC
水 25． 6 56． 3 bc BC
CK(95%乙醇) 51． 0 f E
2． 2 黄花忍冬的不同提取物对大肠埃希菌的抑制作用
由表 2 可知，黄花忍冬各部位的乙酸乙酯、正丁醇、乙醇
提取物对大肠埃希菌均有中等强度的抑制效果，而各部位的
水提取物对大肠埃希菌无抑菌活性。从这个结果来看，整体
上除水提取物外的其他各萃取物均表现出较强的抑菌活性，
抑菌作用与植物的提取部位关联不大。
3 结论
研究结果表明，黄花忍冬各部位不同溶剂提取物对细辛
叶枯病病原菌和大肠埃希菌均有不同程度的抑制作用。黄花
忍冬叶片的正丁醇提取物对细辛叶枯病病原菌抑制效果最
表 2 黄花忍冬提取物对大肠埃希菌的抑菌程度
提取物 大肠埃希菌
花乙酸乙酯物 ++
花正丁醇物 ++
花乙醇物 +
花水提物 －
叶乙酸乙酯物 ++
叶正丁醇物 ++
叶乙醇物 ++
叶水提物 －
果实乙酸乙酯物 ++
果实正丁醇物 ++
果实乙醇物 ++
果实水提物 －
CK(95%乙醇) －
注:“ －”表示无活性;“ +”表示活性较弱，7 mm ＜ ψ≤12 mm;
“++”表示活性较强，12 mm ＜ ψ≤17 mm;“ + + +”表示活性强，ψ ＞
17 mm。
好;黄花忍冬各部位的乙酸乙酯、正丁醇、乙醇提取物对大肠
埃希菌均有中等抑制效果，水提的各部位提取物对大肠埃希
菌则没有抑菌活性。值得注意的是，在对这 2 种病原菌的抑
菌试验中发现，各个器官的乙醇提取物大部分有中等强度的
抑菌作用。
本试验选用一种药用植物病原菌和一种人类致病细菌作
为研究对象。真菌细辛叶枯病病原菌为槭菌刺孢，是我国真
菌新记录的种，对细辛有较强的致病性［6］;大肠埃希菌为普
通菌株，是人类的重要病原菌。本试验已初步确定黄花忍冬
提取物对真菌以及细菌均有抑制作用，为细辛病害的生物防
治以及为药用植物忍冬扩大药源提供了理论依据，以期实现
黄花忍冬资源的充分利用。
参考文献:
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—525—肖凤艳等:黄花忍冬提取物抑菌作用的研究