全 文 ：药理药化
收稿日期:2012-07-05; 修订日期:2012-11-26
作者简介:顾媛媛( 1982-) ，女( 汉族) ，黑龙江双城人，现任黑龙江中医药
大学中医药研究院助理研究员，博士在读，硕士学位，主要从事中药药效
物质基础研究工作．
* 通讯作者简介:田振坤( 1955-) ，男( 汉族) ，黑龙江哈尔滨人，现任黑龙
江中医药大学副教授，主要从事中药新药开发研究工作．
凤仙透骨草不同萃取部位体外抗真菌作用研究
顾媛媛，王建明，田振坤* ，宋成贵，代金红
(黑龙江中医药大学中医药研究院，黑龙江 哈尔滨 150040)
关键词:凤仙透骨草; 抗真菌作用; 最低抑菌浓度
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 02． 114
中图分类号:R285． 5 文献标识码:C 文章编号:1008-0805( 2013) 02-0481-01
凤仙透骨草来源于凤仙花科(BALSAMINAEEAE)凤仙花属
(IMPATIENS L．)植物凤仙花(IMPATIENS BALSAMINA L．)的干
燥茎，凤仙始载于《救荒本草》，其种子名为急性子，李时珍［1］谓:
“其花头翅尾足，俱翘翘然如凤状，故以名之”，在我国大部分地区
均有分布，南北各地均有栽培，资源十分丰富。Yang Xiaolong等［2］
用生物鉴定方法对凤仙透骨草茎叶提取物进行抗菌活性研究，发
现凤仙透骨草茎叶提取物对 7 种细菌(2 种革兰氏阴性菌和 5 种
革兰氏阳性菌)和 8种真菌均有很好的抑制效果。为进一步明确
其化学成分与药效之间的相关性，本实验以凤仙透骨草全草为研
究对象，用 95%乙醇提取后，以水混悬后分别用石油醚、二氯甲烷、
乙酸乙酯、正丁醇萃取，参照美国临床实验室标准化委员会(NC-
CLS)推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验
方案》(M38 － A)［3］考察凤仙透骨草不同萃取部位对红色毛癣菌、
犬小孢子菌、絮状表皮癣菌和白色念珠菌的抑制效果。
1 材料与仪器
1． 1 药物 凤仙透骨草药材采摘于黑龙江中医药大学药用植物
园，经生药学鉴定为凤仙花科凤仙花属植物凤仙透骨草(IMPA-
TIENS BALSAMINA L．) ;阳性对照药:达克宁散剂(主要成分硝
酸咪康唑) ，西安杨森制药有限公司，批号:120220256。
1． 2 菌种 红色毛癣菌(CMCC(F)T19)1 株;犬小孢子菌(CMCC
(F)M3h)1 株;絮状表皮癣菌 1 株(CMCC(F)E19) ;白色念珠菌 1
株(CMCC(F)C1O)。本试验所采用的菌株均购自中国医学科学
院皮肤病研究所真菌科。
1． 3 培养基 沙堡氏液体培养基(SDA)的配制:称取葡萄糖40． 0
g，蛋白胨 10． 0 g，加蒸馏水混匀，调整 pH值至(5． 6 ± 0． 2) ，用电
磁炉加热煮沸后不断用玻璃棒搅拌使各种成分溶解，过滤后 121
℃高压灭菌 20 min，分装，4 ℃冰箱保存，备用。
1． 4 生理盐水的配制 称取氯化钠 4． 5g，加 500ml蒸馏水溶解制
成 0． 9%的生理盐水，灭菌后 4 ℃冰箱保存备用。
1． 5 仪器 BHC － 1300ⅡA 型生物安全柜，苏州安泰空气技术有
限公司产品;DHP － 9162 型电热恒温培养箱，上海一恒科技有限
公司产品;Leica DM －2500 型显微镜，德国产品;全自动立式压力
蒸气灭菌器 YXQ － LS － 50SⅡ，上海博迅实业有限公司医疗设备
厂产品;THZ － C 台式恒温振荡器，太仓市豪诚实验仪器有限公
司产品。
2 方法
2． 1 凤仙透骨草不同部位的提取方法 取凤仙透骨草全草 5kg，
粉碎，加 95%乙醇回流提取 3 次，2h /次，合并醇提液，减压回收
至浸膏，加水混悬后，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇
萃取，每种有机溶剂萃取 5 次，合并有机溶剂萃取液，分别将各有
机溶剂萃取液及萃取后的水相减压回收，冻干后分别得到石油
醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇及水相 5 个溶剂萃取部位，分别
用 60%乙醇制成 100 mg /ml的溶液，备用。
2． 2 抗真菌药物稀释液和菌悬液的制备 采用二倍稀释法将凤
仙透骨草萃取物用沙堡氏液体培养基稀释成 100，50，25，12． 5，
6． 25，3． 125，1． 562 5，0． 781 25，0． 390 6，0． 195 3 mg /ml的系列浓
度。达克宁的终浓度为 20，10，5，2． 5，1． 25，0． 62 5，0． 312 5，
0． 156 3，0． 078 1，0． 039 1 mg /ml。
用接种钩挑取已转种活化的皮肤癣菌受试菌菌块，置于研钵
中，加入无菌生理盐水缓慢研磨均匀，肉眼呈毛玻璃状外观，在振
荡器上振荡 30s，用血细胞计数板计数，将菌悬液浓度控制在 106
～ 107 cfu /ml，备用。
2． 3 最低抑菌浓度的测定［4，5］ 采用 CLSI 推荐的微量两倍稀释
法进行。将 96 孔细胞培养板置于超净工作台上紫外照射 2 ～ 3
h，将 100 μl已配制好的药液，由第 2 排第 1 孔至第 10 孔分别由
高浓度到低浓度加入无菌 96 孔细胞培养板中，第 11 孔为生长对
照孔(仅加菌悬液 100 μl和 SDA液体培养基 100 μl，不加药物) ，
第 12 孔为空白对照孔(真菌菌悬液、药物都不加，只加 SDA培养
基 200 μl)。将调好的菌接种液 100 μl，分别加入相应的微孔内，
这将使每一梯度的抗真菌药物和菌接种液(2 倍终浓度)分别被
1∶ 1 稀释到终浓度。每个浓度做 3 个平行样，皮肤癣菌于 26℃
培养 7 d后观察结果，白色念珠菌于 37℃培养 48 h观察结果。
3 结果
判断标准:读取 MIC值时，以有无菌落生长为判断标准，与对
照组(菌落生长正常)相比较，有肉眼可见菌落生长的无抑菌活性，
无菌落生长的药物最低浓度为药物的 MIC。结果见表 1。
表 1 凤仙透骨草不同萃取部位体
外抗真菌作用平均 MIC值 mg·ml －1
药物 红色毛癣菌 犬小孢子菌 絮状表皮癣菌 白色念珠菌
1 0． 390 6 0． 781 25 0． 781 25 0． 781 25
2 1． 562 5 0． 3906 0． 781 25 0． 781 25
3
4
5
6 0． 156 3 0． 156 3 0． 156 3 0． 312 5
1 凤仙透骨草石油醚萃取部位;2 凤仙透骨草二氯甲烷萃取部位;3 凤
仙透骨草乙酸乙酯萃取部位;4 凤仙透骨草正丁醇萃取部位;5 凤仙透骨
草水部位;6 达克宁阳性对照
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL． 24 NO． 2 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 2 期
4 讨论
近年来，由于广谱抗生素、糖皮质激素、化疗药物和免疫抑制
剂的普遍应用，真菌感染和条件致病菌感染逐渐增多，对抗真菌药
物的研制工作变得越来越迫切，目前临床应用的抗真菌化学药物
大部分毒性很大，并容易产生耐药性，而且种类较少且价格昂贵。
因此从天然药物中寻找低毒高效的抗真菌药物就更显重要［6］。
本研究采用不同极性溶剂萃取的方法将凤仙透骨草分成不同
极性部位，选择浅部真菌感染中最常见的三种皮肤癣菌，包括红色
毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌和白色念珠菌，进行体外抗真菌
试验考察其不同萃取部位的体外抑菌活性。结果发现，凤仙透骨
草 5个不同萃取部位中，石油醚和二氯甲烷部位对皮肤癣菌和白
色念珠菌有明显的抑制作用，其强度石油醚部位 ＞二氯甲烷部位，
而其它部位没有测出最低抑菌浓度，无明显的抑菌效果。本研究
方法简便，结果可靠，确定了凤仙透骨草抗真菌活性部位，为进一
步研究凤仙透骨草抗真菌有效单体及新药开发奠定了基础。
参考文献:
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［2］ YANG Xiao － long，Summ erhurst D K，Kovals F，etal Isolation of an
antimicrobial compound from Im patiens balsamina L． using bioassay －
guided fraction［J］． Phytotherapy Research，2001，15:676．
［3］ National Committee for Clinical Laboratory Standards． Reference Method
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gi． Approved Standard (M38 － A) ［S］． USA，2002．
［4］ 安惠霞，斯拉甫·艾白，古力娜·达吾提，等．地锦草不同萃取部位
体外抗真菌作用研究［J］．中国中医药信息杂志，2010，17(1) :40．
［5］ 袁带秀，袁志忠，侯娟． 鱼腥草乙醚粗提物体外抗真菌作用研究
［J］．中国病原生物学杂志，2008，3 (11) :872．
［6］ 方建茹，龙 凯，谢小梅．中药抗真菌的研究进展［J］． 上海中医药
杂志，2005，39(3) :60．
临床报道
收稿日期:2012-10-21; 修订日期:2012-12-29
中西医结合治疗急性重症胰腺炎疗效
及安全性的临床观察
肖钟林
(湖北省黄冈市黄州区人民医院 438000)
关键词:重症胰腺炎; 中西医结合治疗; 大承气汤; 丹参
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 02． 115
中图分类号:R259 文献标识码:C 文章编号:1008-0805( 2013) 02-0482-01
急性胰腺炎是临床一种起病急骤，临床表现复杂，病程进展
迅速，易引起多脏器功能损害，病变率高，难于治疗的急腹症。近
年来我科运用中西医结合治疗胰腺炎有较好的效果，现予报道。
1 临床资料
本组 45 例患者符合急性胰腺炎 ASP 的诊断标准。其中男
19 例，女 26 例。年龄 19 ～ 52 岁。诱因;胆源性胰腺炎 28 例，脂
餐饱食 9 例，酗酒 5 例。无明显诱因 3 例。患者均有上腹剧痛，
腹胀，恶心，呕吐和腹膜炎体征。部分患者伴有发热，休克或呼吸
窘迫综合征(ARDS) ，血尿淀粉酶升高，血象显著升高。CT 提示
不同类型的胰腺体积增大。轮廓模糊，密度不均，腺周液性暗区
等。
诊断标准:参照中华医学会外科分会胰腺外科组与 2000 年
修订的诊断和分级的标准〔1〕。增强 CT 是诊断急性胰腺炎并区
别轻、重型胰腺炎的金标准，B超及腹腔穿刺对诊断有一定帮助。
急性重症胰腺炎(SAP)的 APACH －Ⅱ评分≥8 分，BalthazarCT分
级系统≥Ⅱ级，Ranson指标≥3 项的患者。
2 方法
治疗方法:SAP 总的治疗原则是阻止胰腺炎病情进一步发
展，预防及治疗各种并发症，全身支持等。以积极、有效、综合的
非手术治疗为主。
2． 1 手术治疗 本组 5 例手术患者均因急性胆囊炎，坏疽性胆囊
炎，胆源性胰腺炎，全身胆系感染，梗阻，在保守治疗 72 h，梗阻症
状不能解除的情况下行手术治疗。1 例行经内镜胆 /胰管碎石和
取石术﹤ ERCP﹥，鼻胆 /胰管引流术﹤ ENPD﹥，3 例胆囊切除，
胆总管切开取石并 T管引流。1 例胰被膜切开灌洗引流。
2． 2 西医非手术治疗 患者入院后均进行监护及实验室检查和
影像学的复查，明确脏器变化及胰腺组织坏死情况等。常规给予
禁食水，胃肠减压，保持有效血容量。纠正水电解质酸碱平衡。
早期运用广谱抗生素。应用抗胰酶药物，改善负氮平衡及低蛋白
血症。密切监测呼吸功能及肾功能变化。如出现 ARDS 及肾功
能不全时及时应用机械通气和透析等。
2． 3 中药治疗 以大承气汤为主方加减(大黄、厚朴、枳实、芒硝、
黄芩、黄珀、柴胡)肠胃实热型，热重加食银花、连翘;湿热蕴结型
有黄疸者加茵陈，栀子，浓煎后取 200 L，少量多次注入胃管。若
频繁呕吐、腹胀严重的则保留灌肠 2 ～ 4 次 /d。大便通畅后，大
黄、芒硝酌减。所有患者均采用静滴复方丹参注射液并配腹部外
敷芒硝。针刺上腕、中脘、足三里等穴位。
2． 4 观察方法 从我院 2006 年至 2012 年收治的急性胰腺炎患
者从中筛选出符合条件的病例 45 例，分成对照组 22 例和治疗组
18 例，进行回顾性分析，对照组采用单纯西医常规治疗，包括禁
食、胃肠减压、抗感染及抑制胰腺外分泌、解痉等，治疗组在西医
基础上采用大承气汤从胃管注入或灌肠，静脉滴注复方丹参注射
液，芒硝腹部外敷并针灸等。
2． 5 统计方法 采用 SPSS17． 7 的统计软件，计量资料采用 t 检
验，计数资料采用 χ2 检验，P ＜ 0． 05 表示差异有显著性。
3 结果
见表 1 ～ 3。
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2013 VOL． 24 NO． 2