全 文 :[收稿日期] 20130511(009)
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30960512)
[第一作者] 张宏涛,主管药师,从事药品检验,Tel:0991-4975201,E-mail:zht2727@ 163. com
[通讯作者] * 耿东升,主任药师,硕士生导师,从事中药与抗炎免疫药理,Tel:0991-4975278,E-mail:dongsheng811@ sina. com
瘤果黑种草子总黄酮抗炎及平喘作用
张宏涛,张淑锋,陈雪莲,耿东升*
(新疆军区联勤部药品仪器检验所,乌鲁木齐 830063)
[摘要] 目的:观察瘤果黑种草子总黄酮(TFNG)的抗炎及平喘作用。方法:选择昆明种小鼠、SD 大鼠及健康豚鼠为实
验动物,随机分为生理盐水组、阳性药对照组、TFNG低、高剂量组(小鼠 100,400 mg·kg -1,大鼠 71. 5,286 mg·kg -1)。采用二
甲苯致小鼠耳廓肿胀、大鼠棉球肉芽肿实验观察总黄酮抗炎作用;采用整体动物小鼠喷雾致喘实验、离体豚鼠肺支气管灌流实验
及离体回肠实验考察总黄酮的平喘作用。结果:TFNG 100,400 mg·kg -1可明显抑制小鼠二甲苯所致的耳廓肿胀度,TFNG 71. 5,
286 mg·kg -1可抑制大鼠棉球肉芽肿(P <0. 01) ;TFNG 100,400 mg·kg -1可明显延长小鼠哮喘反应的潜伏期(P < 0. 01) ;TFNG 3,
6,12 g·L -1可明显增加豚鼠肺灌流量,降低豚鼠回肠平滑肌收缩张力(P <0. 01)。结论:瘤果黑种草子总黄酮具有一定的抗炎及
平喘作用。
[关键词] 瘤果黑种草子总黄酮;抗炎作用;平喘作用;耳廓肿胀;棉球肉芽肿;支气管肺灌流
[中图分类号] R285. 5 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2014)01-0166-04
[doi] 10. 11653 /syfj2014010166
Anti-inflammatory and Asthma-relieving Effects of
Total Flavones from Nigella glandulifera
ZHANG Hong-tao,ZHANG Shu-feng,CHEN Xue-lian,GENG Dong-sheng*
(Institute for Drug and Instrument Control,Xinjiang Military Command,Urumqi 830063,China)
[Abstract] Objective:To investigate the anti-inflammatory and asthma-relieving effects of total flavones
from Nigella glandulifera (TFNG). Method:KM mice,SD rats and New Zealand rabbits were selected as
experiment animal,randomly devided into saline control group,positive control group,TFNG low dosage and high
dosage groups (mouse 100,400 mg·kg -1,rat 71. 5,286 mg·kg -1). The mice external ear swelling induced by
dimethyl benzene and rats cotton ball granuloma experiments were employed to evaluate the anti-inflammatory
effect;asthma experiment induced by spraying the whole mice,isolated lung perfusion and isolated ileum smooth
muscle experiments in guinea pigs were employed to evaluate the asthma-relieving effect. Result:TFNG 100,
400,71. 5 mg·kg -1 could significantly inhibit dimethyl benzene-induced mice ear swelling and TFNG 286 mg·
kg -1 could siginificatey inbibit cotton pellet granuloma in rats (P < 0. 01) ;the low and high dosage (100,400
mg·kg -1)TFNG could significantly prolong the mice asthmatic response latency (P < 0. 01) ;the low,middle and
high dosage TFNG (3,6,12 g·L -1)could increase the perfusion of the isolated guinea pig lung,reduce the
smooth muscle contraction of isolated guinea pig ileum significantly (P < 0. 01). Conclusion:TFNG has some
anti-inflammatory and asthma-relieving effects.
[Key words] total flavones from Nigella glandulifera;anti-inflammatory effect;asthma-relieving effect;
ear swelling;cotton pellet granuloma;bronchial-pulmonary perfusion
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第 20 卷第 1 期
2014 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 20,No. 1
Jan.,2014
瘤果黑种草属毛茛科黑种草属金莲花亚科植
物,是新疆特有的植物资源,其种子具油性及特异芳
香,性味甘、辛、温,为我国新疆维吾尔族常用药
材[1]。黑种草子对哮喘和支气管炎有治疗作用,是
呼吸道疾病常用的维药之一,如治哮喘,用黑种草子
拌蜂蜜冲服[2]。瘤果黑种草子总黄酮(TFNG)是维
药瘤果黑种草的干燥成熟种子中提取的化学组
分[3]。目前,TFNG是否是瘤果黑种草子(NG)抗炎
平喘的药效物质基础研究尚未见报道。为进一步探
讨瘤果黑种草子总黄酮的药理作用,本文采用相关
药理实验研究其抗炎及平喘作用,为研究和开发该
民族药材奠定理论基础及实验依据。
1 材料
1. 1 动物 SPF 级昆明种小鼠,体重 18 ~ 22 g,雌
雄各半;SPF 级 SD 大鼠,体重 180 ~ 220 g,雌雄各
半;普通级健康豚鼠,体重 350 ~ 450 g,雌雄各半,均
由新疆医科大学实验动物中心提供,许可证号
SCXK(新)2011-0004。
1. 2 药物与试剂 瘤果黑种草子购自新疆和田墨
玉县,经新疆中药民族药研究所研究员李晓瑾鉴定
为 Nigella glandulifera Freyn 的种子,批号 2011308;
总黄酮苷粉末由课题前期对瘤果黑种草子采用
40%乙醇回流提取,大孔树脂分离及聚酰胺树脂纯
化而得,总黄酮质量分数为 65. 5%;NG 水煎液浓缩
至 1 mL药液含 1 g 药材浸膏后加蒸馏水配成相应
浓度的溶液。戊巴比妥钠,中国医药集团上海化学
试剂公司,批号 F20030816;二甲苯,天津市百世化
工有限公司,批号 20070416;阿司匹林片,西安利君
制药有限责任公司,批号 20101006;氯化乙酰胆碱,
四川锡成药业有限公司,批号 11070203;磷酸组胺,
上海蓝季科技发展有限公司,批号 110318;氨茶碱
片,四川锡成药业有限公司,批号 11070203;异丙肾
上腺素溶液,上海禾丰制药有限公司,批号
20060903;硫酸阿托品,上海禾丰制药有限公司,批
号 20081029。
1. 3 仪器 AB104-N 型电子天平(梅特勒-托利多
仪器有限公司) ,BS124S 型电子天平(北京赛多利
斯仪器系统有限公司) ,支气管灌流装置(新疆医科
大学机能中心药理实验室) ,恒温水浴泵(重庆试验
设备厂一分厂) ,BL-420 生物机能实验系统(成都泰
盟科技有限公司) ,HV-20 型无油空压机(济南浩伟
实验仪器有限公司)。
2 方法
2. 1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验[4] 小鼠 50 只,随
机分成 5组,每组 10只,雌雄各半。分组为:对照组、
阳性药(阿司匹林 100 mg·kg -1)组、NG 水煎液对照
组(900 mg·kg -1)及 TFNG 低、高剂量组(100,400
mg·kg -1)。均 ig给药 10 mL·kg -1,1 次 /d,连续 5 d,
末次给药后 30 min,在小鼠右耳廓内外侧涂抹二甲
苯 0. 02 mL /只,30 min 后处死并剪下左右耳,以 6
mm打孔器在每只小鼠的左右耳取相同面积的耳
片,分别称重,以右耳减去左耳的差值为肿胀度,计
算各组耳廓肿胀抑制率。
肿胀抑制率 =(肿胀度对照组 -肿胀度给药组)/肿胀度对照组
× 100%
2. 2 大鼠棉球肉芽肿实验[5] 大鼠 40 只随机分为
5 组,雌雄各半,每组 8 只。分别为模型组、阳性对
照组(阿司匹林 70 mg·kg -1)、NG 水煎液对照组
(650 mg·kg -1)及 TFNG 低、高剂量组(71. 5,286
mg·kg -1) ;大鼠用 0. 3%戊巴比妥钠溶液(10 mL·
kg -1)麻醉后,腹部去毛消毒,在无菌操作下经腹部
切口,将 2 个无菌棉球(分别植入大鼠腹部两侧皮
下,随即缝合皮肤,用碘液消毒后常规饲养。各给药
组在手术次日灌胃给药,连续 7 d,第 8 天颈椎脱臼
处死,取出棉球,在 60 ℃烤箱放置 12 h 后称重,计
算各组棉球肉芽抑制率。
肉芽抑制率 =(肉芽肿重正常对照 -肉芽肿重给药组)/肉芽
肿重正常对照 × 100%
2. 3 小鼠喷雾致喘实验[6] 选择在引喘预实验中
引喘潜伏期 > 15 s的小鼠 50 只,除阳性药为氨茶碱
100 mg·kg -1外,分组及给药剂量同 2. 1,于末次给药
后 1 h分别置于 2. 5 L的玻璃钟罩内,恒压引喘装置
均匀并持续雾化喷入 2%氯化乙酰胆碱和 0. 1%磷
酸组胺等量混合液 15 s,记录小鼠的引喘潜伏期(从
喷雾开始到哮喘发作、呼吸极度困难,直至抽搐跌倒
的时间) ,超过 360 s以 360 s计算。
2. 4 豚鼠肺支气管灌流实验[4,7] 豚鼠 36 只随机
分为 6 组,雌雄各半,每组 6 只。分别为模型组、阳
性对照(异丙肾上腺素 50 g·L -1)组、NG 水煎液对
照组(27 g·L -1)及 TFNG 低、中、高剂量组(3,6,
12 g·L -1)。预先准备好肺支气管灌流装置,贮流瓶
内充满含氧的乐氏营养液。取豚鼠,木槌击毙,切开
颈动脉放血,迅速打开胸腔,暴露心脏及肺,剪下一
段气管连同心脏及左右肺取出胸腔外,将肺浸入
37 ℃含氧乐氏营养液的培养皿中,轻轻挤捏肺数
次,以排除肺内的气体,然后将气管用线扎于灌流装
置的套管上,以乐氏液灌流之,在肺表面可用针头散
在穿孔 7 ~ 9 个,并调节灌流速度,液体流速为 25
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张宏涛,等:瘤果黑种草子总黄酮抗炎及平喘作用
mL·min -1(可计滴数)。待灌流量恒定后,可将 0. 5
mL 药物注入套管顶端的橡皮管内。灌流量恒定
后,注入 0. 01%组胺溶液(10 g·L -1)0. 5 mL,用药
后 0. 5 min,开始记录每分钟液体流出量,仔细观察
其作用到达高峰时间及其作用持续时间;待恢复稳
定后重复注入等量组胺,其作用明显后,各给药组按
不同剂量分别注入药液 0. 5 mL,模型组注入等量生
理盐水。观察各组 10 min内液体流出量,计算灌流
量(mL·min -1)。
2. 5 豚鼠离体回肠实验[8] 取豚鼠 36 只,除阳性
药为硫酸阿托品 2 g·L -1外,分组及给药剂量同
2. 4。豚鼠在实验前 1 d禁食(不禁水)过夜,实验前
木槌猛击其头部致死,颈动脉放血,迅速剖腹,取近
盲肠部约 10 cm回肠,置于盛有 37 ℃的 botting 液器
皿中,沿肠壁剪去肠系膜,将肠管剪成 1. 5 ~ 2 cm的
小段备用。将压力换能器与 BL420 生物机能实验
系统连接,水温保持在(37 ± 0. 5)℃。取回肠 1 段,
两端各穿 1 线,其中 1 线固定于 L型通气管上,放入
有 15 mL botting液的浴漕内,溶液呈无色透明,溶液
pH 7. 3,固定 L型通气管,并调节恒温平滑肌槽的高
度,然后缓慢通入氧气 (2 个气泡 / s)。肠管另一端
与压力换能器相连,加 1 g负荷,打开 BL420 生物机
能实验系统,待肠管运动恢复正常后,记录一段回肠
正常活动的曲线,然后开始滴加药物。浴槽内加入
乙酰胆碱(10 g·L -1)0. 5 mL,待作用明显时加入各
组药物 0. 5 mL,给药剂量同 2. 4。每次加入药物后
使之作用 3 ~ 5 min,观察其对回肠平滑肌收缩张力
的影响,随后加入等量乙酰胆碱,观察其曲线的变化
后,以 botting液冲洗 2 ~ 3 次,待肠管收缩曲线恢复
后再加入另一种药物。实验通过观察给药前后回肠
肌收缩张力的变化来判断药物对平滑肌收缩的
影响。
2. 6 统计学处理 采用 SPSS 17. 0 软件进行数据
分析,数据以 珋x ± s 表示,组间比较采用单因素方差
分析,以 P < 0. 05 为差异有统计学意义。
3 结果
3. 1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 阿司匹林
组及 TFNG高剂量组小鼠耳廓肿胀度均明显低于对
照组(P < 0. 01) ;TFNG 低、高剂量对小鼠耳廓肿胀
抑制率随剂量的增加而升高,见表 1。
3. 2 对大鼠棉球肉芽肿的影响 阿司匹林组、NG
水煎液组及 TFNG 低、高剂量组大鼠棉球肉芽肿质
量明显轻于模型组(P < 0. 01) ,阿司匹林组棉球肉
芽肿质量明显轻于水煎液组(P < 0. 01) ,见表 2。
表 1 TFNG对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(珋x ± s,n = 10)
组别 剂量 /mg·kg -1 肿胀度 /mg 抑制率 /%
对照 - 9. 52 ± 3. 38
阿司匹林 100 5. 08 ± 2. 941) 46. 64
NG水煎液 900 7. 84 ± 3. 62 17. 65
TFNG 100 7. 02 ± 3. 74 26. 26
400 5. 90 ± 2. 291) 38. 03
注:与对照组比较1)P < 0. 01。
表 2 TFNG对大鼠棉球肉芽肿的影响(珋x ± s,n = 8)
组别 剂量 /mg·kg -1 肉芽肿重 /mg 肉芽抑制率 /%
模型 - 131. 0 ± 22. 1
阿司匹林 70 82. 0 ± 16. 91,2) 37. 4
NG水煎液 650 106. 2 ± 16. 31) 18. 9
TFNG 71. 5 99. 6 ± 15. 41) 24. 0
286 102. 2 ± 16. 11) 22. 0
注:与模型组比较1)P < 0. 01;与 NG 水煎液组比较2)P < 0. 01
(表 5 同)。
3. 3 对小鼠平喘实验的影响 与对照组比较阳性
药(氨茶碱)组、NG 水煎液组及 TFNG 低、高剂量均
可明显延长小鼠哮喘反应潜伏期(P < 0. 01)。氨茶
碱组及 TFNG高剂量小鼠哮喘反应潜伏期长于 NG
水煎液组(P < 0. 01) ,见表 3。
表 3 TFNG对小鼠平喘实验的影响(珋x ± s,n = 10)
组别 剂量 /mg·kg -1 潜伏期 / s
对照 - 81. 9 ± 4. 28
氨茶碱 100 150. 5 ± 7. 841,2)
NG水煎液 900 103. 2 ± 6. 341)
TFNG 100 108. 8 ± 5. 901)
400 133. 9 ± 30. 031,2)
注:与对照组比较1)P < 0. 01;与 NG水煎液组比较2)P < 0. 01。
3. 4 对豚鼠离体肺支气管灌流量的影响 与模型
组比较,异丙肾上腺素组及 TFNG 低、中、高剂量均
可显著增加豚鼠离体肺支气管气道灌流量(P <
0. 01,P < 0. 05) ,异丙肾上腺素对照组及 TFNG高剂
量豚鼠离体肺支气管气道灌流量,明显高于 NG 水
煎液组(P < 0. 01) ,见表 4。
3. 5 对豚鼠离体回肠平滑肌的影响 与模型组比
较,硫酸阿托品组、NG 水煎液组及 TFNG 低、中、高
剂量均可显著降低豚鼠离体回肠平滑肌收缩张力
(P < 0. 01) ;硫酸阿托品组及 TFNG 低、中、高剂量
豚鼠离体回肠平滑肌收缩张力明显低于 NG 水煎液
组(P < 0. 01) ;低、中、高剂量的 TFNG 对豚鼠离体
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第 20 卷第 1 期
2014 年 1 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 20,No. 1
Jan.,2014
表 4 TFNG对豚鼠离体肺支气管平滑肌的影响(珋x ± s,n = 6)
组别 剂量 / g·L -1 灌流量 /mL·min -1
模型 - 6. 78 ± 0. 19
异丙肾上腺素 50 16. 30 ± 0. 691,3)
NG水煎液 27 8. 70 ± 0. 212)
TFNG 3 8. 20 ± 0. 552)
6 9. 33 ± 0. 981)
12 10. 90 ± 0. 811,3)
注:与模型组比较1)P < 0. 01,2)P < 0. 05;与 NG 水煎液组比较
3)P < 0. 01,4)P < 0. 05。
回肠平滑肌收缩张力随剂量的增加而降低,见表 5。
表 5 TFNG对豚鼠离体回肠平滑肌的影响(珋x ± s,n = 6)
组别
剂量
/ g·L -1
张力 / g
给药前 给药后
收缩幅度降低
/ g
模型 - 1. 24 ± 0. 03 1. 31 ± 0. 03 0. 07 ± 0. 02
硫酸阿托品 2. 0 0. 92 ± 0. 01 0. 29 ± 0. 02 0. 62 ± 0. 021,2)
NG水煎液 27 3. 47 ± 0. 75 3. 34 ± 0. 03 0. 13 ± 0. 061)
TFNG 3 1. 37 ± 0. 16 1. 16 ± 0. 01 0. 21 ± 0. 021,2)
6 0. 89 ± 0. 32 0. 58 ± 0. 05 0. 31 ± 0. 031,2)
12 1. 59 ± 0. 49 1. 02 ± 0. 03 0. 57 ± 0. 031,2)
4 讨论
急性炎症是由致炎因子作用于血管,使血管扩
张、通透性增加,引起渗出,导致组织损伤,引起局部
炎症反应和全身反应。慢性肉芽肿炎症是由致炎因
子长期刺激局部引起慢性炎症及免疫反应,形成肉
芽肿。本文采用了急性、慢性炎症动物模型,对
TFNG的抗炎作用进行了初步研究,发现 TFNG对二
甲苯致小鼠耳廓肿胀及大鼠棉球肉芽肿均有明显的
抑制作用,提示该药具有一定抗急性炎症和慢性炎
症作用。
本实验通过对 TFNG 的平喘作用研究发现,乙
酰胆碱和组胺混合液引发哮喘的整体动物实验中
TFNG 可明显延长小鼠哮喘反应潜伏期,提示该药
具有一定的平喘作用。本文进一步通过豚鼠肺灌流
实验和离体回肠实验发现,TFNG 各剂量可明显抑
制组胺引起的离体肺支气管痉挛和乙酰胆碱引起的
豚鼠离体回肠平滑肌收缩,提示该药物对平滑肌有
一定的扩张作用。由此,笔者推测 TFNG 的平喘作
用与使支气管平滑肌扩张有关。实验结果发现,水
煎液的抗炎及对平滑肌舒张作用不及 TFNG,说明
TFNG 可能是瘤果黑种草子中发挥抗炎、平喘作用
的活性成分。另一方面,目前认为,气道慢性炎症可
导致支气管平滑肌痉挛,因此考虑 TFNG 对慢性炎
症的抑制作用也可能是其发挥平喘作用的主要原因
之一,但作用的具体机制有待进一步研究。
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[责任编辑 李玉洁]
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张宏涛,等:瘤果黑种草子总黄酮抗炎及平喘作用