全 文 ：机体内许多细胞产生的一种具有多种生物活性的刺
激因子，其作为机体的复杂的细胞因子网络中的一
个重要成员，在正常情况下调节免疫应答，而在病理
状态下，其浓度的升高可有广泛的促炎作用，并能促
进急性期反应，导致组织损伤，致使盆腔局部粘连、
纤维化和免疫异常，从而促进 EMS的形成和发展。
本研究发现，模型动物血清 IL-1、IL-6 含量明显
增加，与上述研究报道结果一致，说明模型制备成
功。目前测定血清 IL-1、IL-6 水平已成为临床估计
EMS病程的参考指标之一，同时血清 IL-6、IL 一 8
水平的高低也作为 EMS 患者中医临床辨证分型的
参考指标之一〔7、8〕，抑制机体的 IL-1、IL-6 水平可能
成为治疗 EMS的新途径。
丹皮为一清热凉血药，具有清热凉血、活血化瘀
的功效，现代研究证实其具有抗菌、抗炎、抗过敏及
免疫调节、改善血液流变学等作用，是治疗妇科疾病
的常用要药〔1〕，本研究发现丹皮不同提取物对子宫
内膜异位症模型大鼠异位子宫组织有一定的病理学
改善;能明显降低 EMS 模型动物血清 IL-1、IL-6 的
水平，减轻炎症反应，其中丹皮酚、丹皮总苷作用最
为明显;各提取物对模型动物的血液流变学改善无
显著性差异。故推测，丹皮治疗 EMS 的作用机制可
能与降低 IL-1、IL-6 水平，减轻炎症反应有关，其主
要物质基础可能为丹皮酚及丹皮总苷。
参 考 文 献
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厚皮树树皮乙醇提取物的抗氧化和抗肿瘤活性研究
韵小娟1，2，纪明慧2，舒火明2，3* ，郭飞燕2，王小红2，王 菁2
(1. 海南省兽药饲料监察所，海南 海口 570203;2. 海南师范大学化学与化工学院 /省部共建-热带药用植物
化学教育部重点实验室，海南 海口 571158;3. 海南经贸职业技术学院，海南 海口 571127)
摘要 目的:研究厚皮树树皮乙醇提取物的抗氧化和抗肿瘤活性。方法:分别用石油醚、氯仿、乙酸乙酯对厚
皮树树皮乙醇提取物进行萃取，得到不同部位的浸膏，用羟基自由基和 DPPH·法检测不同部位浸膏的抗氧化性;
用噻唑兰(MTT)法检测其体外抗肿瘤活性。结果:石油醚萃取物对羟基自由基(·OH)有很好的清除效果，其 IC50
值为 65. 17 μg /mL，乙酸乙酯萃取物对 DPPH·有很好的清除效果，其 IC50值为 0. 011 μg /mL。石油醚萃取物的抗
肿瘤活性最高，对人胃癌细胞 SGC的 IC50值为 8. 05 μg /mL;氯仿萃取物仅对人胃癌细胞 SGC细胞有抑制活性，IC50
值为 21. 8 μg /mL。结论:厚皮树树皮乙醇提取物在抗氧化和抗肿瘤方面有一定的活性。
关键词 厚皮树;抗氧化;羟基自由基 ;DPPH·;抗肿瘤;MTT
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)09-1652-05
收稿日期:2012-03-07
基金项目:国家自然科学基金(21162009) ;海南省重大科技研发专项(ZDZX20100007)
作者简介:韵小娟(1980-) ，女，在读硕士研究生，主要从事天然产物化学研究;Tel:15249030469，E-mail:121740219@ qq． com。
* 通讯作者:舒火明，E-mail:stuhm2000@ sina． com。
厚皮树 Lannea coromandelica (Houtt. )Merr. 为
漆树科厚皮树属植物。主要分布于中南半岛，印度
和其他一些热带地区。在我国南部，云南、广东、广
西、海南等地低海拔较干燥的山坡疏林中也有分
布〔1〕。
据《全展选编·内科》记载，厚皮树可以治骨
·2561· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 10 期 2012 年 10 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.10.038
折，也可以解毒，用于河豚鱼中毒、木薯中毒、地菠萝
中毒;五指山黎族地区用其来治疗胃炎，肠炎，白带
过多〔2〕;国外学者对厚皮树属植物进行了化学成分
研究，发现该属植物中所含化学成分主要为黄酮类、
甾醇类、蒽醌类、氢醌类、酚类、烯醇类等成分〔3-6〕，且
大多具有较好的生物活性。
近年来，随着对自由基研究的深入，人体中的活
性氧和自由基被认为是引发衰老、癌变和细胞损伤
的主要原因。筛选新的抗氧化剂和抗肿瘤天然药物
成为研究重点。本文对厚皮树树皮乙醇提取物的抗
氧化和抗肿瘤活性进行了研究，为将其进一步开发
为新型抗氧化剂和抗肿瘤药物提供理论依据。
1 材料与仪器
1. 1 细胞株 人肺腺癌细胞(SPCA-1)、人胃癌细
胞(SGC-7901)和人白血病细胞 K562 由中科院上海
生物所提供。细胞用含 10%胎牛血清、100 μg /mL
青霉素、100 μg /mL链霉素、0. 2%NaHCO3 的 RPMI-
1640 培养液，于37 ℃、5%CO2 饱和湿度的培养箱中
培养。
1. 2 药物与试剂 厚皮树树皮 2010 年 6 月采自
海南儋州，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯老
师鉴定为漆树科厚皮树属植物厚皮树(Lannea coro-
mandelica)的树皮，标本存于热带药用植物化学省
部共建重点实验室;石油醚、氯仿、乙酸乙酯、无水乙
醇、邻菲罗啉均为分析纯，天津市化学试剂一厂产
品;过氧化氢，分析纯，西陇化工股份有限公司产品;
七水合硫酸亚铁，分析纯，广州化学试剂厂产品;抗
坏血酸(Vc) ，分析纯，广东汕头转宁化工厂产品;三
羟甲基氨基甲烷，分析纯，上海山浦化工有限公
司) ;DPPH·，美国 Sigma-Aldrich 公司产品;RPMI-
1640 培养液，Gibco 公司;胰酶，Gibco 公司;四甲基
偶氮唑兰(MTT) ，Sigma 公司;超级新生牛血清，杭
州四季青生物科技有限公司;二甲基亚砜(DMSO) ，
天津市化学试剂二厂。
1. 3 主要仪器 S-603 电子分析天平，丹佛仪器北
京有限责任公司;TU-1901 双光束紫外可见分光光
度计，北京普析通用仪器有限责任公司;DHG-9123A
电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司;
SK5200LHC超声波清洗仪，上海科导超声仪器有限
公司;高压灭菌锅，日本森展企业有限公司;倒置显
微镜，重庆光学仪器厂;ELx800 酶标仪，BioTek 公
司;CO2 恒温培养箱，日本 SANYO 公司;超净工作
台，苏州净化设备厂;可调式移液器，BRAND 公司;
96 孔细胞培养板，Pore 公司;电子天平，Sartious 公
司。
2 方法
2. 1 厚皮树树皮乙醇粗提取物的制备 取干燥粉
碎的厚皮树树皮 1 kg，用 78%乙醇浸泡，加热回流
提取 3 次，合并提取液，减压浓缩，得黑色浸膏。浸
膏用水溶解后依次用等体积石油醚 (沸程
60 ～ 90 ℃)、氯仿、乙酸乙酯反复多次萃取。萃取液
减压浓缩得石油醚萃取物 6. 2 g、氯仿萃取物 1. 8 g、
醋酸乙酯萃取物 3. 0 g。
2. 2 厚皮树树皮乙醇提取物抗氧化能力测定
2. 2. 1 对羟基自由基(·OH)的清除作用:参照文
献〔7〕方法，称取一定质量不同部位的样品，用无水
乙醇溶解，配制成 100 mL溶液备用。在 10 mL容量
瓶中依次加入 0. 2 mL邻菲咯琳 (5 mmol /L)、1 mL
Tris-HCl溶液 (50 mmol /L pH 6. 0)、0. 2 mL FeSO4
(7. 5 mmol /L)、2 mL H2O2(1%)和不同体积的样品
溶液，用无水乙醇定容至 10 mL，然后于37 ℃恒温
水浴反应 60 min。在 536 nnm 处测量光密度 D
(λ) ，平行 3 次。D(λ)0参比 :0. 4 mL邻菲咯琳 + 2
mL Tris-HCI缓冲液 + 7. 6 mL 无水乙醇，实测 :0. 4
mL邻菲咯琳 + 2 mL Tris-HCI 缓冲液 + 0. 4 mL Fe-
SO4 + 7. 2 mL无水乙醇;D(λ)1 参比 :0. 4 mL 邻菲
咯琳 + 2 mL Tris-HCI 缓冲液 + 0. 4 mL H2O2 + 7. 2
mL无水乙醇，实测:0. 4 mL 邻菲咯琳 + 2 mL Tris-
HCI缓冲液 + 0. 4 mL FeSO4 + 0. 4 mL H2O2 + 6. 8
mL无水乙醇;D(λ)2参比:0. 4 mL邻菲咯琳 + 2 mL
Tris-HCI缓冲液 + 0. 4 mL H2O2 + V mL样品 +(7. 2
－ V)mL无水乙醇，实测:0. 4 mL 邻菲咯琳 + 2 mL
Tris-HCI缓冲液 + 0. 4 mL FeSO4 + V mL 样品 + 0. 4
mL H2O2 +(6. 8 － V)mL 无水乙醇。
清除率(%)=
D(λ)2 － D(λ)1
D(λ)0 － D(λ)1
× 100%
其中 D(λ)0:不加双氧水和样品时的光密度;D(λ)1:加
入双氧水，不加入样品时的光密度;D(λ)2:加入双氧水和样
品时的光密度。
2. 2. 2 对 DPPH·的清除作用:参照文献〔8〕方法:
称取一定质量不同部位的样品，用无水乙醇溶解，配
制成 100 mL溶液备用。分别准确量取不同体积样
品溶液于 10 mL棕色容量瓶中，加入 1 mL DPPH·
溶液，用无水乙醇定容至 10 mL，室温避光下反应 30
min，在 517 nnm处测定其光密度 D(λ) ，平行 3 次。
D(λ)1参比:10 mL无水乙醇，实测:1 mL DPPH· +
9 mL无水乙醇;D(λ)2参比:1 mL样品 + 9 mL无水
乙醇，实测:V mL样品 + 1 mL DPPH· +(9 － V)mL
无水乙醇。
清除率(%)=
D(λ)1 － D(λ)2
D(λ)2
× 100%
·3561·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 10 期 2012 年 10 月
式中:D(λ)1 为空白光密度(t = 0 min) ，D(λ)2 为反应
30 min后的光密度。
2. 3 厚皮树树皮乙醇提取物抗肿瘤活性测定
MTT比色法〔9〕:人肺腺癌细胞(SPCA-1)、人胃癌细
胞(SGC-7901)和人白血病细胞 K562 分别以 2 ×
104、7 × 104、1 × 104 /mL 接种于 96 孔板中，每孔体
积 180 μL，在 CO2 培养箱内培养(8 ～ 12)h。同时设
置空白组(仅加入不含细胞的培养液)和对照组(以
培养液替代药物)。待细胞贴壁后，加入不同浓度
药液(板内终浓度为 1、10、100 μg /mL)20 μL。加
药细胞培养 44 h 后，每孔加入 MTT 溶液 (1 mg /
mL)50 μL，继续在培养箱内孵育 4 h，取出倾去上
清液，每孔加入 150 μL DMSO，振荡 10 min后，使用
酶标仪于 570 nm 下测定各孔的光密度值。细胞增
殖抑制率〔10〕以抑制率大于 50%为有效。
抑制率 IR (%)=
D(λ)空白对照 － D(λ)药物作用
D(λ)空白对照
× 100%
2. 4 统计学处理 实验数据以 珋x ± s 表示，采用
SPSS 13. 0 统计软件包进行 One Way Anova 统计分
析。以 P≤0. 05 为有统计学差异。
3 结果
3. 1 羟基自由基(·OH)的清除结果 本实验以
Vc 为对照品，采用羟基自由基(·OH)法来测定厚
皮树树皮的抗氧化性，Fe2 +与邻二氮菲能够生成稳
定的橙红色络合物在 536 nm 波长有最大吸收峰。
反应体系中定量加入的 Fe2 +和 H2O2通过 Fenton 反
应产生羟自由基。自由基和氧化剂将一部分 Fe2 +
氧化为 Fe3 +，使橙红色络合物减少。体系中加入抗
氧化剂与体系中自由基和氧化剂反应，使 Fe2 +的减
少受到抑制。用分光光度计测定橙红色络合物光密
度的变化即可知道抗氧化剂抗氧化能力的高低。厚
皮树树皮乙醇提取物的不同萃取物及 Vc 分别对羟
基自由基(·OH)的清除作用及线性回归求得各萃
取物的 IC50值如图 1 ～ 4 及表 1 所示，厚皮树树皮乙
醇提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取物及 Vc 分
别对由 Fenion 体系产生的·OH 有一定的清除作
用，随着各萃取物和 Vc 浓度的增加，对·OH 自由
基的清除能力也增强。3 种不同萃取物对羟基自由
基(·OH)均有较强的清除能力，且清除率分别随
萃取物量的增加而增大，有一定的量效关系。厚皮
树树皮乙醇提取物有一定的抗氧化性，且 3 种不同
萃取物对羟基自由基(·OH)的清除作用存在一定
的差异。从 IC50值可知，3 种不同萃取物及 Vc 对羟
基自由基(·OH)的清除能力由强至弱依次为:石
油醚萃取物 ＞乙酸乙酯萃取物 ＞氯仿萃取物 ＞ Vc，
在 40 ～ 150 μg /mL浓度范围内，Vc 比氯仿萃取物清
除羟基自由基(·OH)的能力强。
表 1 清除羟基自由基(·OH)的 IC50值
样品名称 乙酸乙酯萃取物
氯仿
萃取物
石油醚
萃取物
Vc
IC50值(μg /mL) 117. 79 213. 69 65. 17 254. 4
3. 2 DPPH·法抗氧化结果 本实验以 Vc 为对照
品，采用 DPPH·法来测定厚皮树树皮的抗氧化性，
DPPH·在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其孤对
电子在517nm附近有强吸收(显深紫色)。当有机
图 1 厚皮树树皮乙醇提取物的乙酸乙酯
萃取物对羟基自由基的清除作用
图 2 厚皮树树皮乙醇提取物的氯仿萃
取物对羟基自由基的清除作用
图 3 厚皮树树皮乙醇提取物的石油醚
萃取物对羟基自由基的清除作用
·4561· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 10 期 2012 年 10 月
图 4 厚皮树树皮乙醇提取物的 Vc
对羟基自由基的清除作用
图 5 厚皮树树皮乙醇提取物的乙酸乙酯
萃取物对 DPPH·的清除作用
图 6 厚皮树树皮乙醇提取物的氯仿
萃取物对 DPPH·的清除作用
清除剂存在时，孤对电子被配对，吸收消失或减弱，
通过测定吸收减弱的程度，可评价自由基清除剂的
活性。厚皮树树皮乙醇提取物的不同萃取物及 Vc
分别对 DPPH·的清除作用及线性回归求得各萃取
物的 IC50值如图 5 ～ 8 及表 2 所示，厚皮树树皮乙醇
提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取物及 Vc 分别
对 DPPH·有一定的清除作用，随着各萃取物和 Vc
浓度的增加，对 DPPH·的清除能力也增强。3 种不
同萃取物对 DPPH·均有较强的清除能力，且清除
率分别随萃取物量的增加而增大，有一定的量效关
系。3 种不同萃取物对 DPPH·清除的 IC50值表明，
不同萃取物及 Vc 对 DPPH·自由基的清除能力由
强至弱依次为:乙酸乙酯萃取物 ＞氯仿萃取物 ＞ Vc
＞石油醚萃取物。由于石油醚萃取物对 DPPH·的
清除能力太低，故未能测出其 IC50。
图 7 厚皮树树皮乙醇提取物的石油醚萃
取物对 DPPH·的清除作用
图 8 厚皮树树皮乙醇提取物的
Vc 对 DPPH·的清除作用
表 2 清除 DPPH·的 IC50值
样品名称 乙酸乙酯萃取物
氯仿
萃取物
石油醚
萃取物
Vc
IC50值(μg /mL) 0. 011 124. 84 未测出 523. 33
3. 3 抗肿瘤实验结果 本实验采用 MTT 法来测
定厚皮树树皮乙醇提取物的抗肿瘤活性。厚皮树树
皮乙醇提取物的不同萃取物分别对 SPCA-1 、SGC-
7901、K562 三种肿瘤细胞增殖抑制率及 IC50值如表
3、4 所示，乙酸乙酯萃取物无抗肿瘤活性，石油醚萃
取物对 SPCA-1 、SGC-7901、K562 这三种细胞均有
抑制活性，氯仿萃取物仅对 SGC-7901 细胞有抑制
活性。根据 MTT实验初步筛选所得到的数据，选择
有细胞增殖抑制活性的样品进一步测定其半数抑制
率 IC50。以浓度的对数值作横坐标，以抑制率作纵
坐标，作回归曲线，计算 IC50值。随着浓度的增加，
·5561·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 10 期 2012 年 10 月
石油醚萃取物对 SPCA-1 、SGC-7901、K562 这三种
细胞的抑制作用呈明显的量效关系。其中石油醚萃
取物对 SGC-7901 的抑制作用最强，IC50值为 8. 05
μg /mL;对 SPCA-1 的抑制作用次之，IC50值为 11. 27
μg /mL。氯仿萃取物对 SGC-7901 细胞也有很好的
抑制活性，IC50值为 21. 8 μg /mL。
表 3 厚皮树树皮乙醇提取物对肿瘤
细胞增殖抑制率(%)
供试细胞 乙酸乙酯萃取物 氯仿萃取物 石油醚萃取物
SPCA-1 24. 26 － 145. 26 95. 58
SGC-7901 － 2. 16 100. 66
K562 － 139. 72 － 0. 64 62. 25
表 4 厚皮树树皮乙醇提取物抑制肿瘤细胞的 IC50值
供试细胞 SPCA-1 SGC-7901 K562
浓度(μg /mL) 1 10 100 1 10 100 1 10 100
石油醚萃取物 抑制率 /% 5. 32 19. 06 97. 82 5. 49 6. 38 100 6. 32 11. 13 79. 08
IC50 11. 27 8. 05 37. 18
氯仿萃取物 抑制率 /%
IC50
－
1. 20 10. 86 94. 46
21. 8
－
4 讨论
通过上述实验表明，厚皮树树皮乙醇提取物对
实验中的两种自由基均有一定的清除作用，同时也
具有一定的抗肿瘤活性，这可能与厚皮树树皮所含
的化学成分有关，据《全展选编·内科》和文献〔3，4〕
记载，厚皮树树皮含有:dl-表儿茶素、d-无色矢车菊
素、槲皮素、异槲皮素等黄酮类化合物。黄酮类化合
物是一种天然抗氧化剂，具有清除人体中超氧离子
自由基、抗衰老和增加机体免疫力的作用;同时，还
具有明显的抗肿瘤活性。此外，厚皮树树皮提取物
中的非黄酮成分也可能对自由基的清除和抑制肿瘤
细胞增殖起一定的作用，其具体机理尚待进一步的
研究。
本研究发现，厚皮树树皮乙醇提取物对 DPPH·
和羟基自由基(·OH)都具有明显的清除作用，且
随着乙醇提取物的浓度的增大，其清除能力增强。
石油醚萃取物对羟基自由基(·OH)有很好的清除
效果，其 IC50值为 65. 17 μg /mL。乙酸乙酯萃取物
对 DPPH·的清除率可达到 84%以上，IC50为 0. 011
μg /mL;而乙酸乙酯萃取物对羟基自由基(·OH)的
清除率可达到 95%以上，IC50为 117. 79 μg /mL。
石油醚萃取物对 SGC-7901 和 SPCA-1 肿瘤细
胞抑制作用显著，IC50 值分别为 8. 05 μg /mL 和
11. 27 μg /mL。氯仿萃取物仅对 SGC-7901 细胞有
很好的抑制作用，IC50值为 21. 8 μg /mL。该研究对
厚皮树进行了抗氧化及抗肿瘤活性的初步探讨，为
更好地研究、开发、推广厚皮树提供了实验依据。
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