全 文 :岗梅水提取物抗炎作用的实验研究
朱伟群 1 ,晏桂华 1 ,李沛波2
(1.湘南学院 临床医学系 ,湖南 郴州 423000;2.中山大学 生命科学学院 , 广东 广州 510275)
摘要:目的 研究岗梅水提取物的抗炎作用。方法 采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法 、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀法 、大鼠棉球肉芽
肿法和醋酸致小鼠毛细血管通透性增高法观察岗梅水提取物的抗炎作用。结果 岗梅水提取物能明显抑制二甲苯所致的小鼠
耳廓肿胀和角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀及炎性组织中 PGE2的生成 ,减少大鼠棉球肉芽肿的形成 , 同时对醋酸所致小鼠毛
细血管通透性增高具有显著抑制作用。结论 岗梅水提取物具有明显抗炎作用。
关键词:岗梅;水提取物;抗炎;大鼠
中图分类号:R965 文献标识码:A 文章编号:1006-8783(2007)03-0304-03
作者简介:朱伟群(1973-),女 , 大学本科 , 讲师 , 主要从事中
医药基础研究。
Experimentalstudiesonanti-inflammatoryactivityofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicis
Asprelae
ZHUWei-qun1 , YANGui-hua1 , LIPei-bo2(1.DepartmentofClinicalMedicine, XiangnanCollege, Chenzhou, Hunan423000 , China;
2.CollegeofLifeSciences, SunYat-senUniversity, Guangzhou, Guangdong510275 , China)
Abstract:ObjectiveTostudytheanti-inflammatoryactivityofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprelae.MethodsThe
modelsofxylene-inducedearedemainmice, hindpawedemainducedwithcarrageeninrats, granulomainducedwithcotonballin
rats, andcapilarypermeabilityincreaseinducedwithaceticacidinmicewereusedtoobservetheanti-inflammatoryefects.Results
ThewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprelaecouldinhibitxylene-inducedearedemaandcapillarypermeabilityincreasein
mice, hindpawedemaandPGE2 increaseinducedwithcarrageenandgranulomainducedwithcotonballinrats.ConclusionThe
waterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprellaehassignificantanti-inflammatoryefects.
Keywords:RadixetCaulisIlicisAsprellae;waterextract;anti-inflammatory;mice
岗梅是冬青科植物梅叶冬青 Ilexasprela(Hook
.etArm.)champ.exBenth.的干燥根及茎 。其味
苦 、微甘 、性凉。有清热解毒 、生津止渴 、利咽消肿 、
散瘀止痛之功 , 常用于感冒发热 、肺热咳嗽 、热病津
伤口渴等[ 1] 。岗梅主产于两广地区(广东 、广西),
是多种凉茶中的主要药味 ,应用较广。但目前尚未
见有关岗梅水提取物抗炎作用的系统报道 ,笔者对
岗梅水提取物进行抗炎作用的动物实验研究 ,报告
如下。
1 材料与方法
1.1 药物及试剂
岗梅水提取物采用水煎法自制 ,方法为:取适量
岗梅 ,每次用 8倍量水煎煮 1 h,共 2次 ,合并 2次水
煎煮液 ,浓缩 ,备用;阿司匹林片:河北石家庄制药集
团生产 ,批号:041114;乌拉坦:国药集团化学试剂有
限公司生产 ,批号:E60521;二甲苯:广东光华化学
厂有限公司生产 ,批号:20050218;角叉菜胶购自美
国 Sigma公司 , 批号:59C-0328;青霉素和链霉素
混合液(每毫升含 800 U青霉素和 650 U链霉素)。
1.2 动物
昆明种小鼠 ,雄性 ,体质量 20 ~ 24 g, SPF级 ,由
第一军医大学实验动物中心提供 ,动物合格证号:
2004A063号;SD大鼠 ,雄性 ,体质量 150 ~ 180 g,清
洁级标准 ,由中山大学实验动物中心提供 ,动物合格
证号:粤检证字 2003A070。
1.3 仪器
大鼠足跖容积测定装置 ,参照文献 [ 2]方法定
制。
1.4 方法
1.4.1 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 [ 2]
取昆明种小鼠 60只 ,随机分为正常对照组 、模
型对照组 、岗梅水提取物低 、中 、高剂量组 、阳性对照
药物(阿司匹林)组 ,共 6组 ,每组 10只 ,实验前小
304
第 23卷第 3期 广 东 药 学 院 学 报 Vol.23 No.3
2007年 6月 JOURNALOFGUANGDONGCOLLEGEOFPHARMACY Jun.2007
鼠禁食不禁水 12 h,然后各组小鼠按 0.1 mL/10 g
体质量灌胃给药 , 1次 /d,共 7 d,其中正常对照组和
模型对照组给等体积蒸馏水 。末次给药后 30 min,
除正常对照组外 ,其余各组小鼠于右耳正反两面涂
上二甲苯 50 μL致炎 ,致炎 1h后脱颈椎处死动物 ,
用直径 9 mm打孔器冲下左耳和右耳同一部位的圆
片 ,于分析天平上称重 ,以两耳片重差值为炎症肿胀
度 。
1.4.2 对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及炎症组织中
PGE2(前列腺素 E2)的影响[ 2]
取 SD大鼠 50只 ,随机分为空白对照组 、岗梅
水提取物低 、中 、高剂量组 、阳性对照药物 (阿司匹
林)组 ,共 5组 ,每组 10只 。实验前大鼠禁食不禁水
12 h,然后各组大鼠按 1mL/100g体质量灌胃给药 ,
1次 /d,共 7 d,其中空白对照组给等体积蒸馏水 。
末次给药后 1h,先按容积测定方法测量各鼠右踝关
节以下容积 ,然后于各鼠右后足跖皮下注射 ρ=1%
角叉菜胶 0.1 mL致炎 ,分别于致炎后 1 h、2h、3 h、
4 h时 ,按原法测量右踝关节以下容积 。测完后 ,颈
椎脱臼处死大鼠 ,于踝关节上 0.5 cm处剪下炎性肿
胀足称重 ,将以上剪下的致炎足剥皮 ,剪碎放入 5
mL生理盐水中浸泡 1 h后 ,离心足浸出液 ,取上清
液 0.1mL,加 0.5mol·L-1 KOH-甲醇液 2mL,在
50 ℃下异构化 20 min,用甲醇稀释至 5 mL,于波长
278nm处测定吸光度 (A)值 , A值的大小反应
PGE2的含量。
1.4.3 对大鼠棉球肉芽肿的影响 [ 3]
取 SD大鼠 50只 ,每只大鼠按 1g/kg体质量腹
腔注射乌拉坦进行麻醉 ,在各鼠的左右蹊部用碘酒
消毒 , 75%(φ)乙醇脱碘后 ,各切开 1 cm长小口 ,用
眼科镊子将已称重为 30 mg的灭菌脱脂棉球(直径
6.5 ~ 8.5 mm)一个植入皮下 ,每个棉球加青霉素
和链霉素混合液 0.3mL,以防感染 ,随即缝合皮肤 。
将所有大鼠随机分为空白对照组 、岗梅水提取物低 、
中 、高剂量组 、阳性对照药物 (阿司匹林)组 ,共 5
组 ,每组 10只 ,实验前大鼠禁食不禁水 12 h,术后 2
h开始按 1 mL/100 g体质量灌胃给药 ,其中空白对
照组给等体积蒸馏水 , 1次 /d,共 7 d。在第 8天杀
死动物 ,打开原切口 ,将棉球连同周围结缔组织一起
取出 ,剥出周围已包裹肉芽组织的棉球 ,剔除脂肪组
织 ,在 60 ℃烘箱放置 12 h后称重 ,减去原棉球重量
即为肉芽肿净重 。
1.4.4 对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高的影
响 [ 3]
取昆明种小鼠 50只 ,随机分为空白对照组 、岗
梅水提取物低 、中 、高剂量组 、阳性对照药物(阿司
匹林)组 ,共 5组 ,每组 10只 ,实验前小鼠禁食不禁
水 12 h,然后各组小鼠按 0.1 mL/10 g体质量灌胃
给药 , 1次 /d,共 7 d,其中空白对照组给等体积蒸馏
水。末次给药后 1 h,各组小鼠尾静脉注射 0.5%伊
文思蓝生理盐水溶液 0.1 mL/10 g体质量 ,随即 ip
0.6%(φ)醋酸 0.1mL/10g体质量 , 20min后 ,断头
放血处死小鼠 , 腹腔注射 6 mL生理盐水 ,轻揉腹
部 ,收集腹腔洗出液 , 1 000 r/min离心 5 min,取上
清液用紫外 -可见分光光度计于 590 nm处测吸光
度值(A值)。
1.5 统计学处理
实验数据以 x±s表示 ,采用 SPSS统计软件进
行统计学处理 ,以 P<0.05为差异有显著性 。
2 结 果
2.1 岗梅水提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影
响
岗梅水提取物中 、高剂量组的耳重差与模型组
比较 ,差异具有显著性(P<0.01),说明岗梅水提
取物能抑制二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀 ,提示岗梅
水提取物对急性炎性肿胀具有抑制作用 。见表 1。
2.2 岗梅水提取物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及
炎症组织中 PGE2含量的影响
低 、中 、高剂量岗梅水提取物对角叉菜胶致炎后
1h、2 h、3 h、4 h时大鼠的足跖肿胀及炎症组织中
PGE2含量增加均具有明显的抑制作用(P<0.05或
0.01),提示岗梅水提取物对急性炎性肿胀具有显
著抑制作用。见表 2。
2.3 岗梅水提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响
岗梅水提取物低 、中 、高剂量组的棉球肉芽肿净
重与空白对照组比较 ,差异具有显著性(P<0.05或
0.01),说明岗梅水提取物组能明显抑制大鼠棉球
肉芽肿的形成 ,提示岗梅水提取物具有一定的抗炎
作用 。见表 3。
2.4 岗梅水提取物对醋酸致小鼠毛细血管通透性
增高的影响
岗梅水提取物低 、中 、高剂量组腹腔洗出液的吸
光度值与空白对照组比较 , 差异具有显著性 (P<
0.05或 0.01),说明岗梅水提取物组能明显抑制醋
酸致小鼠毛细血管通透性增高 ,提示岗梅水提取物
对炎性过程中毛细血管通透性增高具有一定的抑制
作用 。见表 4。
305
第 3期 朱伟群 ,等.岗梅水提取物抗炎作用的实验研究
表 1 岗梅水提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响
Tab.1 TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprelaeonxylene-inducedearedemainmice( x±s, n=10)
组别 w/ (g生药· kg-1) m(左耳重)/mg m(右耳重)/mg m(肿胀度)/mg
正常对照 - 21.43±2.54 21.78±4.78 0.32±0.26
模型对照 - 22.19±3.87 37.68±6.46 15.64±4.32#
岗梅水提取物 低剂量 4 19.88±3.26 33.66±5.89 13.43±2.76
中剂量 8 20.54±4.19 28.75±4.77 8.32±1.53**
高剂量 16 20.47±3.27 28.35±7.34 7.83±2.35**
阿司匹林 0.2 g 20.01±2.72 25.09±3.19 6.18±2.32**
与模型对照组比较:**P<0.01;与正常对照组比较:#P<0.01(t检验)
表 2 岗梅水提取物对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及炎症组织中 PGE2含量的影响
Tab.2 TheeffectsofthewaterextractfromRadixetCaulisIlicisAsprelaeonhindpawedemaandPGE
2
increaseinduced
withcarrageeninrats( x±s, n=10)
组别 w/(g生药· kg-1) A值
肿胀率 /%
1 h 2 h 3 h 4 h
空白对照 - 2.56±0.46 36.81±6.81 48.98±9.60 57.43±10.13 73.37±11.91
岗梅水提取物 低剂量 2.8 2.45±0.52 28.53±7.94* 32.86±4.13* 37.07±8.25** 46.18±8.72**
中剂量 5.6 1.63±0.33** 26.71±4.23* 31.23±5.74* 33.80±5.12** 35.15±6.3**
高剂量 11.2 1.46±0.32** 25.57±6.05** 28.51±6.96** 30.65±4.37** 32.97±7.46**
阿司匹林 0.2 g 1.37±0.27** 21.32±3.37** 26.82±4.16** 30.17±8.72** 31.23±5.12**
与空白对照组比较:*P<0.05;**P<0.01(t检验)
表 3 岗梅水提取物对大鼠棉球肉芽肿的影响
Tab.3 Theeffectsofthewaterextractfrom Radixet
CaulisIlicisAsprelaeongranulomainducedwith
cottonbalinrats( x±s, n=10)
组别 w/(g生药· kg-1)
m(肉芽肿净重)
/mg
空白对照 - 130.6±29.7
岗梅水提取物 低剂量 2.8 82.3±32.9*
中剂量 5.6 68.5±25.7**
高剂量 11.2 65.2±27.0**
阿司匹林 0.2 g 55.7±22.1**
与空白对照组比较:*P<0.05;**P<0.01(t检验)
表 4 岗梅水提取物对醋酸致小鼠毛细血管通透性增高的
影响
Tab.4 Theeffectsofthewaterextractfrom Radixet
CaulisIlicisAsprelaeoncapillarypermeabilityincrease
inducedwithaceticacidinmice( x±s, n=10)
组别 w/(g生药· kg-1) A值
空白对照 - 0.322±0.037
岗梅水提取物 低剂量 4 0.231±0.033*
中剂量 8 0.135±0.019**
高剂量 16 0.113±0.021**
阿司匹林 0.2 g 0.103±0.015**
与空白对照组比较:*P<0.05;**P<0.01(t检验)
3 讨 论
岗梅为两广地区的药材 ,有清热解毒 、生津止
渴 、利咽消肿 、散瘀止痛之功 ,民间多用于凉茶。关
于岗梅现代研究的文献报道较少 ,化学研究表明:岗
梅中含有三帖皂苷 、内酯 、生物碱 、赪酮甾醇 、赪酮甾
醇 3-O-β -D-葡萄糖苷 、丁香脂素 、丁香脂素 -O-β-D-
葡萄糖苷和 19-去氢乌索酸。现代药理学研究表
明:岗梅在体外试验中对金黄色葡萄球菌 、溶血性链
球菌有抑制作用;可增加豚鼠离体心脏冠脉流量和
心收缩力;对垂体后叶素所致家兔急性心肌缺血 T
波改变有保护作用 [ 1, 4] 。但与岗梅 “清热解毒 ”功效
密切相关的抗炎作用未见系统的研究报道。
炎症是机体活组织在各种损伤刺激下所表现的
以防御为主的反应 ,炎症渗出 、组织肿胀是炎症早期
的重要指标 ,在炎症晚期和慢性炎症期 ,表现为巨噬
细胞和成纤维细胞增生 ,形成肉芽组织 [ 5] 。
本研究采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法 、角叉菜
胶致大鼠足跖肿胀法 、大鼠棉球肉芽肿法和醋酸致
小鼠毛细血管通透性增高法等经典动物实验方法 ,
考察岗梅水提取物对炎症发生的早期和晚期的影
响。结果表明:岗梅水提取物既可抑制炎症早期的
水肿和渗出 ,又可抑制炎症晚期的组织增生和肉芽
组织的生成 ,且能降低局部炎症组织中 PGE2含量 ,
(下转 311页)
306
广东药学院学报 , 2007, 23(3)
和组织中占据不同的生态位。其原因可能是由于不
同部位的微环境如通气状况 、生物酶和其他化学成
分的不同 ,从而适合不同种属的内生真菌类群的侵
入和生长。
迄今的研究表明 ,植物内生菌与宿主发生联系
时 ,对宿主有以下影响:可增强宿主的抗病性 、提高
植物的生产力[ 11] 、抗逆抗虫 [ 12] 、具有除草剂活性[ 13]
等 。内生真菌对宿主的作用机制可能是由于内生菌
在植物体内繁殖和生长 ,并产生丰富多样具有生物
活性的次生代谢产物 ,从而在一定程度上调节植物
的生长和代谢。通过对峙试验研究小连翘内生真菌
对纹枯病菌 、白叶枯病菌 、恶苗病菌和棉花枯萎病菌
等植物病原菌的拮抗性 ,结果发现 ,小连翘内生真菌
中多数种类(约 52.48%)能够抑制一种或者多种病
原菌的生长 ,这表明小连翘内生真菌中存在着广泛
的抗菌生物活性资源 ,这些内生真菌及其代谢产物
在植物对抗病原菌的过程中占有一定的地位。由此
可见 ,药用植物内存在着广泛的内生真菌 ,这些内生
真菌可能成为生物防治中有潜力的生物因子 ,在生
态农业和生物农药研制方面具有重要的用途。研究
内生真菌的各种次生代谢产物及其作用机制 ,在农
业和(或)医药业中具有重要的应用潜力。研究和
开发植物内生真菌 ,从而为寻找植物病害的抗菌药
用资源提供了一条新的途径。
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(上接 306页)
提示岗梅水提取物具有显著的抗炎作用 ,且其抗炎
机制之一可能与减少炎症组织中 PGE2合成有关 。
本研究对岗梅清热解毒的功效进行了有益的探索 ,
其实验结果为岗梅及相关凉茶的应用提供了一定的
实验依据 ,但岗梅水提取物抗炎的作用机制及水提
取物中发挥抗炎的物质基础尚需进一步研究。
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311
第 3期 袁保红 ,等.小连翘内生真菌种群分布及其抗菌性研究