全 文 ：广枣总黄酮对大鼠缺血心肌组织蛋白质表达的影响
张　琪1 ,杨玉梅 1 ,刘凤鸣 2 ,宋一亭3
(1.包头医学院心血管研究室 ,内蒙古 包头　014010;2. 北京亿立生物技术研究所 , 北京　100044;
3. 内蒙古中蒙医研究所 ,内蒙古 呼和浩特　010020)
收稿日期:2006 - 06 - 01,修回日期:2006 - 08 - 20
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 30160102)
作者简介:张　琪 (1980 - ), 女 ,硕士生 , Tel:0472-5991217, E-m ail:
Zhangqi2018@yahoo. com. cn;
杨玉梅(1959 - ), 女 , 教授 , 硕士生导师 , 研究方向:中
(蒙)药药理学 , 通讯作者 , Te l:0472-5991217, E-m ail:
yym 457@ yahoo. com. cn
中国图书分类号:R-332;R 282.71;R 284. 1;R 322.11;
R 341;R 394.3;R 542.205. 3;R 977.6
文献标识码:A　文章编号:1001-1978(2006)11 - 1344 -05
摘要:目的　探讨广枣总黄酮对缺血心肌的保护作用及其相
关蛋白表达谱的改变。方法　应用表面增强激光解吸离子
化( surface enhanced laser deso rption /loniza tion, SELDI)蛋白
质芯片技术检测了经广枣总黄酮处理后的缺血心肌组织和
未经广枣总黄酮处理后的缺血心肌组织中的蛋白质谱。用
PHSII-C型蛋白芯片阅读机读取数据并进行比较分析。结果
　与未经广枣总黄酮处理后的缺血心肌组织相比 ,有 7个蛋
白质在经广枣总黄酮处理后的缺血心肌组织中有变化 , 其中
有 2个在广枣总黄酮处理后的缺血心肌组织中呈高表达 , 5
个蛋白低表达 , 其中有 4个出现在 IMAC3芯片上 , 1个出现
在 SAX2芯片上。结论　广枣总黄酮在缺血心肌组织中可
调节相关蛋白表达谱从而产生保护作用。
关键词:广枣总黄酮;心肌缺血;蛋白质组
　　广枣为藏 、蒙医习用药材 ,来源于漆树科南酸枣
属植物南酸枣 [ choerospond ias axillaris roxb burtt et
hill]的干燥果实 。广枣总黄酮 (to tal flavones o fCho-
erospondias axiaris fruc tus, TFC)为其活性成分 ,具有
多种生理活性 ,尤其对心血管系统有明显的作用 。
我研究室研究证实 , TFC具有明显的抗心肌缺血损
伤的作用 ,对实验性急性心肌缺血导致的多种房性
和室性心律失常具有明显的保护作用[ 1 ～ 3] 。为进一
步探讨 TFC抗心肌缺血损伤作用的物质基础 ,本实
验应用 SELD I蛋白质芯片技术对 TFC处理后与未
处理心肌组织蛋白质表达的差异进行了比较研究。
1　材料
1. 1　动物　W istar大鼠 20只 ,由内蒙古大学实验
动物中心提供 ,许可证号 SCXK(蒙)2002 - 0001(清
洁级)。
1. 2　药品和试剂　TFC由内蒙古中蒙医研究所提
供 ,生药浓度为 1.15 kg L- 1 ,以芦丁计 ,总黄酮的
纯度为 48%。尿素 、蛋白酶抑制剂 、T ris(三羟甲基
氨甲烷 )、HEPES(羟乙基哌嗪乙磺酸 )CHAPS [ 3-
(3-胆胺丙基 )二甲氨基-1-丙磺酸 〕均购自 S igm a公
司。 SPA购自 Fluka公司。 IMAC3、 SAX2和 NP20
蛋白芯片由北京师范大学高等学校蛋白质组学研究
院提供。
1. 3　仪器　PHSII-C型蛋白芯片阅读机 (美国 C i-
phergen公司),超声波破碎仪 (美国思博明科学器
材有限公司), BL-410生物信号处理系统(成都泰盟
公司 )。
2　方法
2. 1　心肌缺血模型的建立　20只大鼠 , ♂♀兼用 ,
体重 (215±30) g,随机分为对照组和给药组 ,每组
10只 ,大鼠以 20m l kg- 1容量灌胃 ,对照组给予生
理盐水 ,给药组给予广枣总黄酮 23 g kg -1(按生药
浓度计算),连续 14 d。 d 14给药 1 h后腹腔注射
3%戊巴比妥钠 1m l kg- 1麻醉 ,仰位固定 ,记录 Ⅱ
导心电图 ,分离颈总动脉 ,行气管插管术 ,连接动物
呼吸机 ,左侧第四肋间开胸 ,剪开心包 ,轻压胸壁挤
出心脏 ,结扎冠脉左前降支后迅速将心脏送回胸
腔[ 4] , 用 BL-410生物信号处理系统监测缺血前后
心电图变化。待心肌缺血 5 h后快速取出心脏 ,用
生理盐水灌注以清除血液成分 ,保存于液氮中待测。
2. 2　细胞总蛋白的提取　从液氮中取出心肌组织 ,
称重 ,剪碎后加入 5倍体积的细胞裂解液 (8 mo l
L
-1
U rea、4% CHAPS、40 mmo l L -1 Tris-HC l pH
7.4、1 mg L -1的 Leupeptin和 Apro tinin、0.1 mmo l
L - 1 PMSF),应用超声波破碎仪于冰上将组织块
进一步破碎 ,小心匀浆 ,防止产生过多泡沫 ,放入离
心机中(14 000×g)离心 30 m in ,取上清用 BCA蛋
白定量试剂盒的微量测试法测定总蛋白浓度 ,其余
上清分装于 Eppendorf管中 ,置于 - 80℃以备用 。
2. 3　 IMAC3蛋白芯片实验步骤　在 IMAC3蛋白
芯片 8个点 (A-H)的表面加 10 μl 100 mmo l L - 1
CuSO 4 ,置入温盒内室温下孵育 15m in,吸去剩余的
CuSO 4 ,加 5 μl结合缓冲液 (100 mmo l L -1 N aC l,
1344 中国药理学通报　Ch inese Pharm acological Bu lletin　2006 Nov;22(11):1344 ～ 8
pH 7)于芯片各点上 ,孵育 5 m in,吸去芯片各点上
的液体 ,用超纯水冲洗芯片后 ,将其安装于 B iopro-
cessor上 ,每点分别加 20μl的样品(100μg 点 - 1)
和 80μl结合缓冲液 ,振荡后室温下孵育 30 m in,弃
去液体 ,各点用 200 μl洗脱缓冲液 (100mmol L -1
N aC l, pH 7)洗涤 2次 ,每次 5 m in,卸去 B ioproces-
sor,取出芯片 ,用超纯水洗涤 2次 ,待芯片表面自然
干燥后 ,各点加 2次 0.5 μl SPA , 芯片表面干后 ,用
蛋白芯片阅读型机 (PHS II-C型 )进行蛋白质谱分
析 。
2. 4　SAX2蛋白芯片实验步骤　芯片每点用 50 μl
结合缓冲液 (20 mmo l L - 1 N aC l, 50 mmol L -1
Tris, pH 8)预处理后 , 温盒内室温下孵育 15 m in,
吸去液体 ,用超纯水冲洗芯片后安装于 B ioprocessor
上 ,向芯片 A-H各点加 200μl SAX2结合缓冲液 ,室
温振荡 5 m in,弃去液体 , 重复上述步骤 1次 ,每点
分别加 20μl样品 (100 μg 点 - 1)和 80 μl的结合
缓冲液 , 振荡后室温下孵育 60 m in,弃去液体 ,用
200μl洗脱缓冲液(20 mmo l L -1 N aC l, 50mmo l
L
- 1
Tris, pH 8)洗涤芯片 3次 ,每次 5 m in, 用 1
mmo l L -1 HEPES洗涤芯片 1次 , 卸下 B ioproces-
sor, 取出芯片 ,待芯片表面自然干后 ,向各点加 0.5
μl SPA , 待芯片表面自然干后 , 重复点加 0.5 μl
SPA , 芯片表面干后 ,用蛋白芯片阅读型机(PHS II-C
型 )进行蛋白质谱分析 。
2. 5　NP20蛋白芯片实验步骤 　调节蛋白浓度至
0.2 g L- 1每点上样 2 μl,晾干后 ,向各点加 0.5 μl
SPA , 待芯片表面自然干后 ,重复点加 0.5 μl SPA ,
芯片表面干后 ,用蛋白芯片阅读型机 (PHS II-C型 )
进行蛋白质谱分析。
2. 6　数据采集　蛋白质芯片采用蛋白芯片阅读机
PHS II-C型读取数据 。仪器每天用标准多肽和低于
200 000 u的蛋白标准分子校正 ,系统的质量偏差为
0.1%。检测芯片时蛋白质芯片阅读机设置如下:激
光强度 230,检测灵敏度 8,优化分子量范围 3 000 ～
50 000 u,最高分子量 200 000 u, 每个样品收集 50
个点 ,采用 C iphe rgen Prote inchip 3.0.2版本的分析
软件自动采集数据。
3　结果
3. 1　心肌缺血前后心电图的变化 (Fig 1、2)应用
BL-410生物信号处理系统监测缺血前后心电图变
化 。结果如 Fig 1、2所示 , 结扎冠脉 30 m in时两组
动物心率基本正常 ,节律均为稳定的窦性节律 , ST
段及 T波均在正常范围;当缺血时间达 5 h后 ,生理
盐水组大鼠心电图出现了明显的心肌缺血坏死改
变 , ST段抬高 (0.14 ±0.09)mV且与 T波 (抬高
0.11±0.05 mV)融合成单向曲线;而 TFC组 ST段
仅抬高(0.03±0.01)mV , T波抬高 (0.02 ±0.01)
mV ,未出现心肌缺血坏死改变 。
F ig 1　Sod ium chloride groups′E CG
F ig 2　TFC-trea ted groups′E CG
3. 2　TFC对缺血心肌蛋白表达的干预　采用 PB-
SII-C型蛋白芯片阅读机自动收集数据 ,没有意义峰
的信噪比为 3, 经分析软件自动统计检验 , P <0.05
为差异蛋白 。实验结果表明与生理盐水处理组比
较 ,广枣总黄酮 23 g kg -1连续给药 14 d后冠脉结
扎所致心肌缺血组织蛋白质表达出现差异。 3种芯
片共捕获 7个存在有差异的蛋白质峰 ,其中有 4个
出现在 IMAC3芯片上 , 分别命名为 XJPR1(5239
u)、X JPR2(6726 u)、XJPR3(7425 u)、X JPR4(8678
u), 1个出现在 SAX2芯片上 ,命名为 X JPR5(4102
u), 2个出现在 NP20芯片上。 7个差异蛋白质峰
中 ,有 2个在广枣总黄酮处理后的缺血心肌组织呈
高表达 ,有 5个广枣总黄酮处理后的缺血心肌组织
呈低表达 (Fig 3 ～ 8, Tab 1)。
4　讨论
在很多心脏疾病中都存在基因的变化 ,心肌组
织和细胞的局部缺血缺氧损伤可引起多种基因的损
伤和表达改变 ,其结果是使心肌组织和细胞内的蛋
白质在种类和数量上发生变化 ,包括与心肌细胞凋
亡相关的基因 ,如 caspase基因;与心肌细胞保护相
关的蛋白 ,如 HSP-70等[ 5] 。依据这些基因和蛋白
1345 中国药理学通报　ChinesePharmacolog ica l Bulletin　2006 Nov;22(11)
F ig 3　Partia l spectrum (9 000～ 11 500 u) of the
fraction on NP20 protein chips
　　X-axis w as th e mo lecu larw eigh t calcu lation, Y-axis was log norm al-
ized in tensity, the un itw as relative in tensity. The spectrum w ere sod ium
ch loride groups′myocardium(C 2) and TFC-treated group s′m yocard ium
(G1) from top to b ttom.
F ig 4　Partia l spectrum(16 500 ～ 18 500 u) o f the
fraction on NP20 protein chips.
　　X-axis w as th e mo lecu larw eigh t calcu lation, Y-axis was log norm al-
ized in tensity, the un itw as relative in tensity. The spectrum w ere sod ium
ch loride groups′myocard ium(C3) and TFC-treated groups′m yocard ium
(G4) from top to b ttom.
F ig 5　P artial spectrum(7 500～ 9 500 u)of the
fraction on IMAC3 pro tein ch ips.
　　X-axis w as th e mo lecu larw eigh t calcu lation, Y-axis was log norm al-
ized in tensity, the un itw as relative in tensity. The spectrum w ere sod ium
ch loride groups′myocard ium(C4) and TFC-treated groups′m yocard ium
(G4) from top to b ttom
F ig 6　Partia l spectrum(6 000 ～ 8 000 u)
of the fraction on IMAC3 pro tein ch ips.
　　X-axis w as th e mo lecu larw eigh t calcu lation, Y-axis was log norm al-
ized in tensity, the un itw as relative in tensity. The spectrum w ere sod ium
ch loride groups′myocard ium (C1) and TFC-treated group s′m yocard ium
(G3) from top to b ttom
F ig 7　Partial spectrum(4 500～ 6 000 u)
o f the fraction on IMAC3 protein chips.
　　X-axisw as the m olecu lar w eigh t calcu lation, Y-axisw as log norm al-
ized inten sity, th e unit was relative inten sity. The spectrum w ere sod ium
ch loride groups′m yocard ium(C 4) and TFC-treated groups′myocard ium
(G4) from top to b ttom.
F ig 8　Partia l spectrum(4 000 ～ 4 500u)
o f the fraction on SAX2 protein chips.
　　X-axisw as the m olecu lar w eigh t calcu lation, Y-axisw as log norm al-
ized inten sity, th e unit was relative inten sity. The spectrum w ere sod ium
ch loride group s′m yocard ium(C2) and TFC-treated groups′myocard ium
(G1) from top to b ttom.
Tab 1　The distinct pro teins betw een the sodium ch loride groups′
m yocard ium and the TFC-trea ted groups′m yocardium(–x±s)
Key p roteins /u
P roteins in tensity
Contro l TFC groups
4102 29. 1±9. 7 19. 0±4. 4*
5239 14. 8±4. 6 9. 3±1. 6*
6736 7. 8±1. 4 10. 1±2. 2*
7426 13. 9±4. 4 7. 2±1. 8*
8681 8. 4±3. 2 7. 7±2. 0
10141 8. 3±2. 2 9. 6±2. 2
17627 10. 3±3. 2 6. 7±0. 9*
　　Com pare w ith the con trol by t-tex t*P<0.05
方面的变化可以寻找新的抗心肌缺血损伤药物。很
多研究证实 ,中 (蒙 )药具有明显的抗心肌缺血损伤
作用 。但由于中 (蒙 )药成份复杂 ,作用途径较多 ,
故其作用机制方面的研究已成为热点 ,尤其是在蛋
白质水平的研究越来越引起关注 [ 6 ～ 9] 。本实验应用
蛋白质组学的方法观察了广枣总黄酮干预后心肌缺
血区相关蛋白谱的变化 ,以期为阐明心肌缺血病变
机理和中 (蒙)药治疗的分子机制提供依据。
本研究结果表明 ,广枣总黄酮具有明显抗心肌
缺血损伤作用 。在此基础上 ,我们采用 SELD I蛋白
质芯片技术检测了广枣总黄酮对缺血心肌组织蛋白
1346 中国药理学通报　ChinesePharmacolog ica l Bulletin　2006 Nov;22(11)
质表达的影响。结果发现 ,与未处理的缺血心肌组
织比较 ,有 7个差异蛋白存在 , 2个在广枣总黄酮处
理后的缺血心肌组织呈高表达 ,有 5个在广枣总黄
酮处理后的缺血心肌组织呈低表达 ,这其中有 4个
出现在 IMAC3芯片上 , 1个出现在 SAX2芯片上 , 2
个出现在 NP20芯片上 ,根据芯片表面修饰的特性 ,
XJPR1、X JPR2、X JPR3、XJPR4四个蛋白可能是有磷
酸化氨基酸的蛋白或具磷酸化位点的肽 ,而 XJPR5
可能是带有负电荷基团的蛋白或多肽 。本研究室的
已有工作表明 ,广枣总黄酮可通过改善心脏功能 、改
善能量代谢 、调节离子转运等产生明显的抗缺血性
心律失常作用 [ 2, 3, 10, 11] 。尽管上述 7个差异蛋白的
性质与功能及其与心肌结构和功能的关系尚未阐
明 ,但本实验结果提示:广枣总黄酮在缺血心肌组织
中 ,可从蛋白质水平进行调节 ,从而产生抗心肌缺血
作用。此外 ,经广枣总黄酮干预后的缺血心肌组织
中共有 7个差异蛋白被捕获 ,提示调节表达的蛋白
质不是单一蛋白 ,很可能是调节几种或一组相关联
的蛋白质发生变化 ,包括与心肌收缩功能相关的蛋
白 、与心肌细胞能量代谢相关的蛋白等。由于本研
究还不能确定上述蛋白的种类 ,因此 ,我们的后续工
作将扩大检测蛋白的样本量以提高筛选出的差异蛋
白的特异性和敏感性 ,同时 ,对上述差异蛋白进行鉴
定以期明确上述蛋白在心肌缺血中的作用 ,以进一
步阐明广枣总黄酮保护心肌组织的机制。
参考文献:
[ 1] 　李增曦 ,田凤居 ,吴秀英 ,等. 广枣总黄酮对动物耐缺氧和急性
心肌缺血的保护作用 [ J] . 中草药 , 1984, 15(6):2 - 3.
[ 1] 　Li Z X, T ian F J,Wu X Y , et a.l Protective effect of flavon es of
ChoerospondiasAxiaris on anim al anoxia and acute m yocard ial is-
chem ia[ J] . Ch in Trad HerbDrug s, 1984, 15(6):2 - 3.
[ 2] 　李增曦 ,田凤居 ,吴秀英 ,等. 广枣总黄酮抗实验性心律失常作
用 [ J] . 中国药理学报 , 1984, 5(4):25 -7.
[ 2] 　Li Z X, T ian F J, W u X Y , et a.l Ef fect of flavones of Choeros-
pondias Axiaris on experim en tal arrhythm ias[ J] . Acta Pha rmaco l
S in, 1984, (5):25 - 7.
[ 3] 　覃建民 ,杨玉梅 ,周长凤 ,等. 蒙药广枣总黄酮对培养大鼠心肌
细胞的作用 [ J] . 中国民族医药杂志 , 2000, 6(4):41 - 2.
[ 3] 　Q in JM , Yang Y M , Zhou C F, et a.l Ef fect of f lavones ofC ho-
erospond iasAx iaris in rats′cu ltu re card iom yocytes[ J] . J M ed ＆
Pharm acy Ch inM inor, 2000, 6(4):41 - 2.
[ 4] 　徐叔云 ,陈　修主编. 药理实验方法学 [M ] . 第 2版.北京:人
民卫生出版社 , 1991:1022.
[ 4] 　Xu S Y, Chen X. Methodology in pha rmaco log ica l experim ents
[M ] . 2nd ed. Bei jing:Peop le′sM ed ical pub lish ing h ouse, 1991:
1022.
[ 5] 　D epre C, Tom lin son J E, Kude jR K, et a.l Gene p rogram for car-
diac cell su rvival indu ced by transien t ischem ia in consciou s pigs
[ J] . P rocNa tl Acad S ciU S A, 2001, 98(16):9336 - 41.
[ 6] 　W asinger V C, C ordw ellS J, C erpa-PoljakA , et a.l Progressw ith
gene-produ ctm app ing of the M ollicu tes:Mycop lasm a genitalium
[ J] . E lectrophoresis, 1995, 16(17):1090 - 4.
[ 7] 　Hum phery-Sm ith I, C ordw ell S J, B lacks tock W P, et a.l Pro-
teome research:comp lem entari ty and lim itat ion sw ith respect to the
RNA and DNA w orld s[ J] . E lectrophoresis, 1997, 18(8):1217 -
42.
[ 8] 　Li B X, Yang B F, Zhou J, et a.l Inhibi tory effects ofberberine on
IK1, IK , andH ERG channels of card iac myocy tes[ J] . Acta Phar-
m aco lS in, 2001, 22(2):125 - 31.
[ 9] 　杨　明 ,隋殿军 ,朱　姝 ,等. 蜂胶总黄酮对大鼠心肌缺血再灌
注损伤 Fas、Bax和 Bcl-2基因蛋白表达的影响 [ J] . 中国药理
学通报 , 2005, 21(7):799 - 803.
[ 9] 　Yang M , Su i D J, Zhu S, et a.l E ffects of th e total flavones of
propolis(TFP) on Fas、Bax and B cl-2 p rotein expression in myo-
card ia l ischem ic reperfused in ju ry rats[ J] . Ch in Pha rmaco lBu ll,
2005, 21(7):799 -803.
[ 10] 杨玉梅 , 宋一亭 ,周长凤 , 等. 广枣总黄酮对离体大鼠心脏
cAMP含量和腺苷酸环化酶活性的影响 [ J] . 中国民族医药杂
志 , 2001, 7(1):34 - 5.
[ 10] Yang Y M , Song Y T, Zhou C F, et a.l E ffect of f lavones ofC ho-
erospond iasAx iaris on the level of cAMP and adenylate cyclase in
the iso lated rat h eart[ J] . J M ed Pharm acy Ch in M inor, 2001, 7
(1):34 - 5.
[ 11] 杨玉梅 ,覃建民, 徐继辉, 等. 广枣总黄酮对大鼠心室肌细胞
ICa、 Ito和细胞 [ C a2+] i的影响 [ J] . 中国药理学通报 , 2004, 20
(7):784 - 8.
[ 11] Yang Y M , Qin JM , Xu JH , et a.l E ffect of total flavones ofC ho-
erospond iasAxiaris Fructus on L-type Ca2+ curren t, transien t ou t-
w ard K + and in tracellu lar f ree C a2+ of ven tricu larm yocytes in rats
[ J] . Ch in Pharm acolB u ll, 2004, 20(7):784 - 8.
M icroarray expression analysis identified severa l key protein
cand idates as the potentialm ediators of tota l flavones of
choerospondias ax illaries fructus onmyocard ial protection
ZHANG Q i
1 , YANG Yu-me i1 , LIU Feng-m ing2 , SONG Y i-ting3
(1. Dept of Cardiovascular Research, BaotouM ed ical College, Neimenggu Baotou　014010, China;2. Beijing Y ili B iotechnology Institute,
B ejing 100044, China;3. Insitute of Traditiona lZhangmengMedicine, InnerMongolian AutonomousRejion, Neim enggu Huhhot 010020, China)
Abstract:A mi 　To study the mo lecu lar basis of pro-
tec tion on myoca rdia l ischem ic injuries o f total flavones
o f choerospondias axia ris fructus(TFC). Methods　
The m icroarray ana ly sis fo r the prote in exp ression in
1347 中国药理学通报　ChinesePharmacolog ica l Bulletin　2006 Nov;22(11)
myocardium prov ide a strong tool to explore the key
pro tein candidates involved in the pathogenesis o f is-
chem ic injury. Surface enhanced laser desorption /ioni-
zation(SELD I) mass spectrome try w ith prote in chip
IMAC3, SAX2 andNP20w as used to compare the d if-
ferentially expressed p ro tein in TFC-trea ted and un-
treated ischem ic myocardium in ra ts and the resu lts
w ere ana ly sized w ith Pro te inchip Softw are 3.0.2. Re-
sults　Seven d iffe rentially exp ressed pro te ins w ere in-
den tified in TFC treatedmyocard ium. These d ifferen ti-
a l effects corre lated w ith the expression of five dow n-
regu lated pro te ins and two up regu la ted pro teins, and
fou r of them were discove red on the IMAC3 chip and
one o f them was discove red on the SAX2 chip. Con-
clusions　The myocardia l pro tection o f TFC m ay be
media ted by the differentia l exp ression o f these prote ins
wh ich cou ld be the key prote in candida tes fo r further
investigation.
Key words:to tal flavones o f choerospondias ax illaries
fructurs;myocard ial ischem ia;proteome
硬脂酸对兴奋性损伤的原代培养海马细胞的神经保护作用
李广梅 1 ,王泽剑 1 ,陈学勤2 ,胡国渊 2 ,殷　明 1
(1. 上海交通大学药学院 ,上海　200240;2. 中国科学院上海药物研究所 , 上海　201203)
中国图书分类号:R-332;R 322.81;R 329. 24;R 344. 7;
R 392.11;R 743.31;R 977. 4;R 977.6
文献标识码:A　文章编号:1001-1978(2006)11 - 1348 -05
摘要:目的　评价硬脂酸对兴奋性损伤大鼠海马细胞的神经
保护作用;对硬脂酸神经保护机制进行初步探索。方法　利
用 MTT染色法检测细胞活力 , 从而检测硬脂酸对不同损伤
大鼠海马神经细胞活力的影响 , 结合信号通路阻断剂 、线粒
体呼吸链阻断剂和 PPARγ受体阻断剂研究信号通路 、线粒
体以及 PPARγ对硬脂酸神经保护作用的影响。结果　谷氨
酸损伤 、缺氧缺糖损伤以及 H2O2 损伤中 , 损伤组与对照组
细胞相比 , MTT染色 A570值均发生了明显的降低。 3 ～ 30
μmo l L -1硬脂酸对 3种损伤大鼠海马细胞具有不同的神经
保护作用 , 30 μm o l L - 1硬脂酸保护作用最强 , 与损伤组相
比 , 细胞 MTT染色 A 570值均明显升高(P <0. 01);硬脂酸对
NaN3损伤大鼠海马细胞的 M TT染色 A570值没有影响;
PPARγ受体阻断剂 BADGE及 P I-3K信号转导阻断剂 wo rt-
m annin可完全取消脂肪酸对谷氨酸损伤大鼠海马细胞的神
经保护作用。结论　硬脂酸具有剂量依赖性的神经保护作
用 , 线粒体的完整性是硬脂酸神经保护作用的必要条件;
PPARγ受体和 P I-3K信号通路在硬脂酸的神经保护途径中
起着关键的介导作用 。
关键词:硬脂酸;兴奋性毒性;PPARγ受体
　　脂肪酸 (fa tty acid, FA)是机体主要能量来源之
收稿日期:2006 - 05 - 12,修回日期:2006 - 07 - 26
基金项目:上海市科委资助项目(No 03ZR14056)
作者简介:李广梅 (1977 - ), 女 ,硕士生 ,研究方向:神经药理学 , E-
m ai l:ligu angm eioi@ 163. com;
殷　明 (1954 -), 男 ,博士生导师 , 研究方向:神经药理
药 ,通讯作者 , Tel:021-34204737, Fax:021-34204457, E-
m ai l:my in@ s jtu. edu. cn
一 ,也是母乳 、婴幼儿食品中的重要成分之一 。流行
病学 、临床及生化研究均显示:食物中不同类型的脂
肪酸对心脑血管疾病 、炎症等慢性疾病发生的危险
度具有不同的调节作用 。然而 ,对饮食中脂肪酸具
有的分子 、细胞学机制研究仍处于探索阶段 ,脂肪酸
与健康关系之间的研究也越来越受到人们的重视。
脑中的脂质含量极高 ,在胚胎发育期间 ,脂肪酸主要
影响脑的发育及神经细胞的可塑性;出生后脂肪酸
对神经系统的影响尚不清楚 。本实验室经过筛选发
现 ,硬脂酸对缺氧缺糖损伤 、H2O2损伤以及谷氨酸
兴奋性损伤的大鼠海马神经细胞具有剂量依赖性的
神经保护作用 。
　　目前认为脂肪酸主要通过 3种方式发挥作用:
①长链脂肪酸可与多种蛋白共价结合 ,明显影响细
胞外信号分子的膜转位及蛋白的功能。 ②游离的脂
肪酸可作为信号分子的调节子。比如在 PI-3K磷酸
化途径中 ,某些脂肪酸可调节磷酸肌醇 sn-1和 sn-2
的位置脂肪酸的构成 ,调节 PKB及下游底物活性;
不同脂肪酸分子可通过脂肪酸酰化分子改变二酰基
甘油的活性 ,调节 PKC的活性;③游离的脂肪酸可
直接激活信号转导通路 。脂肪酸及前列腺素类可直
接激动过氧化物酶体增殖体激活受体 (pe roxisome
pro liferato r-activa ted recep tors, PPARs), 不仅调节涉
及脂肪酸代谢的基因转录 ,而且调节不同的细胞反
应。本实验通过细胞活性检测 、阻断剂阻断实验对
硬脂酸拮抗兴奋性毒性的神经保护作用进行评价 ,
并对其作用机制进行初步的探讨 。
1　材料
1348 中国药理学通报　ChinesePharmacolog ical Bulletin　2006 Nov;22(11):1348 ～ 52