全 文 ：书95． 57(C － 8) ，96． 48(C － 6) ，101． 1(C － 10) ，107． 6(C － 2＇，6＇) ，
127． 8(C － 1＇) ，133． 8(C － 4＇) ，146． 2(C － 3＇，5＇) ，163． 2(C － 9) ，
163． 7(C － 5) ，167． 2(C － 7) ，198． 2(C = O)。以上核磁谱数据与
文献［14］报道的基本一致。故鉴定化合物 4 为 2α，3β －双氢杨
梅树皮素。
化合物(5) :黄色针状结晶。mp． 310 ～ 313 ℃，ESI － MS
m/z 302． 8［M + H］，1H － NMＲ(500 MHz，DMSO － d6)δ:7． 68
(1H，s，H －2＇) ，7． 54(1H，dd，J = 8． 5 Hz，H － 6＇) ，6． 88(1H，dd，J
= 8． 5 Hz，H －5＇) ，6． 42(1H，s，H － 8) ，6． 20(1H，s，H － 6)。13C
－ NMＲ(125 MHz，DMSO － d6)δ:93． 94(C － 8) ，98． 64(C － 6) ，
103． 5(C － 10) ，115． 5(C － 2＇) ，116． 1(C － 5?) ，120． 6(C － 6＇) ，
122． 5(C － 1 ＇) ，136． 2(C － 3) ，145． 5(C － 3 ＇) ，147． 3(C － 4 ＇) ，
148． 1(C － 2) ，156． 7(C － 9) ，161． 3(C － 5) ，164． 3(C － 7) ，176． 3
(C = O)．以上核磁谱数据与文献［14］报道的基本一致。故鉴定
化合物 5 为 2α，3β －双氢杨梅树皮素。
化合物(6) :白色针状结晶 (乙醇)． mp． 122 ～ 123 ℃ ． EI －
MS m/z:123． 1［M － H］+ ． 1H － NMＲ (CDCl3，500 MHz)δ:8． 14
(2H，dd，H － 2，6) ，7． 49 (2H，td，H － 3，5) ，7． 63 (1H，td，H －
4) ;13C － NMＲ (CDCl3，125MHz)δ:130． 19 (C － 1) ，129． 27 (C －
2) ，128． 47 (C － 3) ，133． 82 (C － 4) ，172． 58(－ COOH)． 以上核
磁谱数据与文献［15］报道的基本一致。故鉴定化合物 6 为苯甲
酸。
3 讨论
本实验对蒙药森登 － 4 汤的 4 种溶剂萃取物的抗炎镇痛作
用进行对照发现，其乙酸乙酯部位的抗炎作用及镇痛作用均为显
著。因此，实验以抗炎镇痛药效作用为导向，对森登 － 4 汤乙酸
乙酯部位进行分离、纯化和精制，鉴定出 6 个化合物。其中化合
物 2α，2β －双氢杨梅树皮素没食子酸在已报道的组成森登 － 4
汤的 4 味药材的众多化合物中未见到新化合物，初步判断该化合
物是森登 － 4 汤的煎煮过程中形成的新物质。森登 － 4 汤乙酸乙
酯部位的进一步的分离纯化鉴定工作在进行中。
致谢: 感谢东北师范大学化学学院刘群教授课题组提供化合
物的波谱测试。
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收稿日期:2012-06-27; 修订日期:2012-11-05
基金项目:国家自然科学基金( No． 81160536)
作者简介:李辉敏( 1974-) ，女( 汉族) ，江西九江人，现任九江学院基础医学院副教授，硕士学位，主要从事中药药效物质基础与作用机制研究工作．
刺头复叶耳蕨不同提取部位
体外抗 HIV － 1 蛋白酶活性的研究
李辉敏，殷嫦嫦，吴家忠，张 磊
(九江学院基础医学院，江西 九江 332000)
摘要:目的 对鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物刺头复叶耳蕨不同提取部位体外抗 HIV － 1 蛋白酶活性进行研究。方法 用荧
光光度法测定蛋白酶的半数抑制浓度( IC50 ) 。结果 刺头复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物抑制 HIV －
1 蛋白酶的半数有效浓度 IC50分别为 0． 73，1． 17，2． 47μg /ml。结论 刺头复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物与水提
取物具有体外抑制 HIV － 1 蛋白酶活性。
关键词:刺头复叶耳蕨; 不同提取部位; 抗 HIV － 1 蛋白酶活性
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 01． 002
中图分类号:Ｒ284． 2; Ｒ962 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 01-0003-02
Inhibitory effect of different extract parts from Arachniodes exilis Ching anti － HIV － 1
PＲ
LI Hui-min ，YIN Chang-chang，WU Jia-zhong，ZHANG Lei
·3·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期
书( Basic Medical college，Jiujiang university，Jiangxi Jiujiang 332000，China)
Abstract: Objective To evaluate the anti － HIV － 1PＲ activities of the different extracted parts from Arachniodes exilis Ching．
Methods The inhibitory effect of the different extracted parts on HIV － 1 protease reverse were detected by Fluorophotometry ． Ｒe-
sults In the experment of anti － HIV PＲ，the IC50 of the n － butanol extract、acetic ether extract、the aqueous extract are 0． 73、
1． 17、2． 47μg /ml． Conclusion The n － butanol extract、acetic ether extract and aqueous extract from Arachniodes exilis Ching have
the inhibitory effect anti － HIV － 1 PＲ ．
Key words: Arachniodes exilis; The different extracted parts; Anti － HIV － 1 PＲ
人类免疫缺陷病毒(HIV)为获得性免疫缺陷综合征 AIDS的
病原体。AIDS的广泛传播及耐药 HIV株的出现迫使人们不断研
究、寻找与开发其预防和治疗药物。本研究考察复叶耳蕨不同提
取部位对 HIV － 1 蛋白酶活性的抑制作用，为开发新型的天然抗
AIDS药物提供实验依据。刺头复叶耳蕨(Arachniodes exilis Ch-
ing)为鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物，主要分布于世界热带和亚热带
湿润区域，其中在亚洲东部和东南部种类最为丰富，在我国主要
分布于长江流域以南地区及山东、河南等省，具有抗菌消炎，清
热利湿，镇静作用，民间用于治疗急性黄疸型肝炎、腰腿疼、关节
炎、痢疾、烫火伤等［1］。本课题组前期的初步研究发现，刺头复
叶耳蕨乙醇提取物在体外具有一定的抗 HIV － 1 蛋白酶(HIV － 1
PＲ)活性。本研究进一步探索刺头复叶耳蕨不同提取部位体外
抗 HIV － 1 蛋白酶活性的作用。
1 材料与方法
1． 1 样品制备 刺头复叶耳蕨材料采自九江市星子县，采集后
取样品根部洗净，切碎，80℃烘干，粉碎，过 70 目筛，以 80%乙醇
提取 3 次，合并滤液，经旋转蒸发仪减压浓缩至稠膏状。采用液
－液分配法，将刺头复叶耳蕨根部粗提物用适量蒸馏水溶解，然
后加石油醚萃取 3 次，对水层依次用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别
萃取 3 次，将各步萃取组分浓缩，分别得稠浸膏，经国家新药筛选
中心送至中国医学科学院医药生物技术研究所病毒药物实验室
进行体外抗 HIV － 1 蛋白酶活性筛选测试。
1． 2 体外抗 HIV － 1 蛋白酶活性筛选测试 采用荧光光度法测
定:HIV － 1 蛋白酶在最佳反应条件和反应体系中可将荧光标记
底物切开，检测酶反应产物中荧光强度来反映酶的活性。在反应
体系中加入样品可用于筛选该酶的抑制剂。HIV － 1 PＲ:由中国
医学科学院医药生物技术研究所病毒药物实验提取，－ 85℃保
存。阳性对照药:印地那韦(indinavir) ，葛兰素公司提供。底物:
Invitrogen公司提供。样品处理:样品临用前溶于 DMSO 或双蒸
水配成适当浓度，5 倍稀释，各 5 个稀释度。
2 结果
样品稀释后加入含有荧光标记底物的反应缓冲液中，并加入
基因工程靶酶，在最佳反应条件下孵育，用 FLUO star Galaxy荧光
仪测定荧光值。计算出各样品对 HIV － 1 PＲ 活性的抑制程度，
得出各样品的半数抑制浓度(IC50)。阳性对照药 indinavir 在
10nmol /L浓度下的抑制率为 83． 9%。刺头复叶耳蕨各部位提取
物在不同浓度下的抑制率及 IC50。结果见表 1。
表 1 刺头复叶耳蕨各部位提取物在不同浓度下的抑制率及 IC50(珋x ± s)
样品
抑制率(%)
50
μg·ml － 1
10
μg·ml － 1
2． 0
μg·ml － 1
0． 04
μg·ml － 1
0． 08
μg·ml － 1
IC50
μg·ml － 1
乙酸乙酯部位 99． 40 88． 67 47． 36 29． 30 37． 56 0． 73
正丁醇部位 97． 10 71． 89 38． 33 29． 81 32． 88 1． 17
水提取部位 86． 54 48． 13 30． 75 32． 79 32． 37 2． 47
3 讨论
蛋白酶(PＲ)、逆转录酶(ＲT)和整合酶(IN)是 HIV － 1 生命
周期中的 3 个重要的酶，抑制这三种酶的活性可抑制 HIV － 1 的
复制，现抗 HIV － 1 四类药物［2，3］中的三类是这些酶的抑制剂，即
逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂及整合酶抑制剂［4，5］，目前从天
然产物中筛选 HIV逆转录酶抑制剂的报道颇多，而 HIV 蛋白酶
活性抑制剂的筛选较少。HIV 蛋白酶有两种类型，即:HIV － 1
蛋白酶和 HIV － 2 蛋白酶。最有效的 HIV － 1 蛋白酶抑制剂仍为
多肽类化合物，但是这类化合物的口服生物利用度很低，价格不
菲且不断有耐药株出现，发展天然 HIV 蛋白酶活性抑制剂势在
必行［6］。
体外药物抑制 HIV － 1 PＲ 实验初筛结果显示，刺头复叶耳
蕨根乙酸乙酯部位、正丁醇提取部位与水提取部位抑制 HIV － 1
PＲ的半数有效浓度 IC50分别为 0． 73，1． 17，2． 47μg /ml。证明其
乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位与水提取部位具有体外抗
HIV － 1 PＲ活性，其中乙酸乙酯提取部位作用强于正丁醇提取部
位，水提取部位作用最弱，可进一步进行研究，寻找其抗 HIV －
1PＲ活性的有效成分，开发抗 HIV － 1 新药。
我们的研究证明刺头复叶耳蕨提取物对 HIV － 1 蛋白酶有
抑制作用，一定程度上表明它是一种具有抑制 HIV － 1 病毒复制
的草药，为证实该作用还需进一步在细胞水平及整体水平进行抗
HIV － 1 作用的研究。
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时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 1