全 文 ：刺头复叶耳蕨（Arachniodes exilis Ching）为鳞毛蕨科复叶耳
蕨属植物，广泛分布于世界热带和亚热带湿润区域，在我国主
要分布于长江流域以南地区，具有清热利湿、抗菌消炎等作用，
民间用于治疗急性黄疸型肝炎、痢疾、烫火伤等，其主要化学成
分为黄酮类化合物[1]。有研究表明鳞毛蕨类植物有包括抗病毒、
抗肿瘤等药理作用，产生这些药理作用的成分为黄酮类化合物[2]。
本研究经过预实验摸索，在参考文献的基础上[3，4]，选择 60-90
目的聚酰胺来纯化刺头复叶耳蕨总黄酮，建立纯化工艺，为刺
头复叶耳蕨总黄酮的开发研究提供科学依据。
1 材料与仪器
1.1 材料
刺头复叶耳蕨采自江西省星子县，经九江学院高春华教授
鉴定为鳞毛蕨科（Dryopteridaceae）复叶耳蕨属（Arachniodes）刺
头复叶耳蕨（Arachniodes exilis Ching）的根茎。对照品：芦丁（中
国生物制品检定所，批号100080-200306）；Al（NO3）3，上海科思
精密化学品公司；60-90目聚酰胺，河北沧州化工有限公司；其
他所有试剂（均为分析纯），汕头市西陇化工有限公司。
1.2 仪器
电子分析天平（BT224S型），德国赛多利斯；紫外可见分光
光度计（TU-1901），北京普析通用仪器有限责任公司；旋转蒸发
仪（RE-52AA），上海亚荣生化仪器厂；真空干燥箱，上海精密仪
器有限公司。
2 方法
2.1 总黄酮含量测定
利用紫外-可见分光光度法，以芦丁为标准品，采用Al（NO3)3
显色法，在 486.4 nm 波长下测定标准曲线[5]，得到线性回归
方程：Y=0.0121X-0.0322，R2=09998，线性关系在17.20~
68.80μg/ml范围内。根据标准曲线法测定各样品中总黄酮的含量。
2.2 刺头复叶耳蕨总提取物溶液的制备
取一定量刺头复叶耳蕨根茎粉末以60%乙醇，固液比1∶20，
超声提取3次，每次超声提取时间为30 min。将所得提取液经
过滤后减压浓缩至一定浓度，冷冻干燥得复叶耳蕨总提取物干
燥粉末，测定该固体粉末中总黄酮含量为46.45%。取200 mg复
叶耳蕨总提取物冻干粉用蒸馏水定溶于100 ml容量瓶，超声溶
解，摇匀即得供试品溶液。
2.3 聚酰胺预处理
取60-90目的聚酰胺用95%乙醇浸泡24 h，用乙醇冲洗至
洗出液加蒸馏水无白色浑浊，再用大量的蒸馏水洗至无醇味。
2.4 聚酰胺纯化条件的选择
2.4.1 上样液 pH值选择 取供试品溶液10 ml各5份，分别滴
加稀盐酸或稀氢氧化钠溶液调pH值为3、4、5、6、7。另外分别取
2.0 g已预处理好的60-90目聚酰胺树脂5份，湿法装柱，取10
ml供试品溶液上样，控制流速为2.0 BV/h进行动态吸附，用蒸
馏水洗至Molish反应呈阴性，再用70%乙醇进行洗脱至洗脱终
点，收集洗脱液，减压浓缩成浸膏后定容于25 ml容量瓶中，测
定吸光度，计算聚酰胺树脂的吸附率。
2.4.2 上样液浓度选择 分别取2.0 g已预处理好的60-90目
聚酰胺树脂3份，湿法装柱，精密吸取不同质量浓度的刺头复
叶耳蕨总提取物溶液各10 ml，控制流速为2.0 BV/h进行动态
吸附，用蒸馏水洗至Molish反应呈阴性，再用70%乙醇进行洗
脱至洗脱终点，收集洗脱液，减压浓缩至20 ml，测定吸光度，计
算聚酰胺树脂的吸附率。
2.4.3 洗脱溶剂选择 分别取2.0 g已预处理好的60-90目聚
酰胺树脂5份，湿法装柱，取10 ml供试品溶液上样，控制流速
为2.0 BV/h，用蒸馏水冲洗至清洗液的Molish反应无现象，再
分别用浓度为10%、30%、50%、70%、90%的乙醇进行洗脱，收
集洗脱液，减压浓缩成浸膏后定容于25 ml容量瓶中，测定吸光
度，优化筛选洗脱溶剂。
注:本文系江西省教育厅资助项目（GJJ12737)；江西省卫生厅资助项目（2012A014)
实验与实习 卫生职业教育
聚酰胺纯化刺头复叶耳蕨总黄酮的研究
李辉敏
（九江学院基础医学院，江西 九江 332000）
摘 要：目的 研究聚酰胺树脂纯化刺头复叶耳蕨总黄酮的工艺条件。方法 以总黄酮的吸附率、纯化率为评价指标，考察聚
酰胺树脂对刺头复叶耳蕨总黄酮的吸附和洗脱条件。结果 所得最佳纯化工艺：上样液pH值为5，上样溶液黄酮质量浓度
调节为2.0 mg/ml，以70%乙醇为洗脱剂，洗脱流速为2.0 BV/h。结论 聚酰胺树脂能有效富集、纯化刺头复叶耳蕨总黄酮。
关键词: 刺头复叶耳蕨;总黄酮;聚酰胺树脂;纯化工艺
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1671-1246（2015）09-0104-03
Vol．33 2015 No．9
104- -
2.4.4 泄露曲线考察 取2.0 g已预处理好的60-90目聚酰胺
树脂，湿法装柱，加入100 ml供试品溶液，取蒸馏水进行冲洗，
直至清洗液的Molish反应无现象。在流速为2.0 BV/h的条件
下，取70%乙醇对树脂中所吸附的刺头复叶耳蕨总黄酮进行解
吸附，收集洗脱液，以每10 ml为一个流份，减压浓缩成浸膏后
定容于100 ml容量瓶中，分别依法测定吸光度，以累计总体积
为横坐标、吸光度为纵坐标绘制泄露曲线，确定最佳上样量。
2.4.5 洗脱流速选择 取2.0 g已预处理好的60-90目聚酰胺
树脂3份湿法装柱，取10 ml供试品溶液上样，取蒸馏水进行冲
洗，直至清洗液的Molish反应无现象。分别控制流速为1.0、
2.0、3.0 BV/h，取70%乙醇对树脂中所吸附的刺头复叶耳蕨总
黄酮进行解吸附。收集洗脱液，减压浓缩至20 ml，测定其黄酮
含量，计算解吸附率。
2.4.6 验证试验 取样品溶液3份，按以上所得最佳条件进行
分离纯化，测定计算所得黄酮洗脱率，并计算RSD值。
3 结果
3.1 上样液 pH值选择
结果见图1，上样液pH值变化可影响聚酰胺树脂的吸附
率。当pH=5.0时聚酰胺树脂的吸附率最大。当溶液pH值高于
样品溶液中黄酮类成分的pKa值时，样品易以盐的形式而不以
游离状态存在，不利于吸附；而当溶液pH值低于4时，吸附率
较低，这可能是由于黄酮类成分在酸性过强的条件下转变为佯
盐，不利于吸附。当pH=5.0时，样品溶液中黄酮类化合物保持
分子状态，以游离形式存在，易被吸附，故此pH条件下吸附量最大。
3.2 上样液浓度选择
结果见图2，聚酰胺树脂对样品溶液中黄酮的吸附率随着
上样溶液浓度的增加而有所降低，提示样品溶液中黄酮质量浓
度较低时易于吸附与解吸附，同时考虑上样体积增加对生产效
率有一定降低作用。本研究最终选择将样品溶液黄酮质量浓度
调节为2.0 mg/ml后进行纯化。
3.3 洗脱溶剂选择
结果见图3，乙醇浓度低于70%时，对聚酰胺树脂柱上黄酮
的洗脱作用较弱，而当乙醇浓度高于70%时，对黄酮的洗脱作
用增加不明显，从节省溶剂等方面考虑，最终选择以70%乙醇
作为聚酰胺树脂纯化条件下的洗脱溶剂。
3.4 泄露曲线考察
结果见图4，当上样量过载时，黄酮发生泄漏，随清洗液流
出，当用蒸馏水清洗到第8个流份时，所得累计流份中黄酮含
量几乎不再发生变化，证明此时过载的黄酮已随清洗液全部流
出。计算清洗液中黄酮含量，可知2 g聚酰胺树脂对黄酮的饱和
吸附量为79 mg，所以要求每克聚酰胺树脂总黄酮上样量不能
超过39 mg。
3.5 洗脱流速选择
结果见图5，洗脱流速分别为1.0、2.0、3.0 BV/h时，吸附率
相应有一定程度的下降。当洗脱流速为1.0BV/h时，吸附与解吸作
用最好。同时考虑到洗脱时间的控制，生产效率的提高，本研究
最终选择2.0 BV/h作为洗脱流速。
图 1 上样液pH值对聚酰胺树脂吸附率的影响
吸
附
率
（
%
）
0 2 4 6 8
PH值
100
80
60
40
20
0
图 2 上样液浓度对吸附率的影响
黄酮质量浓度（mg/ml）
0 1 2 3 4 5 6
85
80
75
70
65
吸
附
率
（
%
）
图 3 不同洗脱溶剂对聚酰胺树脂解吸附率的影响
乙醇浓度（%）
吸
光
度
（
A
）
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 20 40 60 80 100
图4 泄露曲线
流份
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10 12 14
吸
光
度
（
A
）
图 5 流速对吸附率的影响
流速（BV/h）
吸
附
率
（
%
）
88
86
84
82
80
78
76
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
105- -
3.6 纯化工艺验证
精密称取已经预处理的聚酰胺树脂2g各3份，湿法装柱；
按上述实验所得到的最佳纯化工艺条件（即上样液pH值为5，
上样溶液黄酮质量浓度调节为2.0 mg/ml，以70%乙醇为洗脱
剂，洗脱流速为2.0 BV/h）进行验证实验，平行3次，收集洗脱
液，减压浓缩后按标准溶液配制方法显色得到待测溶液，测定
吸光度，计算总黄酮的洗脱率，结果显示：平均洗脱率为79.50%，
RSD为3.98%，表明该纯化工艺稳定可行（见表1)。该纯化后
的溶液经减压浓缩冷冻干燥后得到的干燥粉末中黄酮含量为
71.64%，比纯化前提高了25.19%。
4 结论
本研究建立了以聚酰胺树脂纯化的方法获得刺头复叶耳
蕨总黄酮，得出其最佳纯化工艺条件：上样液pH值为5，上样
溶液黄酮质量浓度调节为2.0 mg/ml，以70%乙醇为洗脱剂，洗
脱流速为2.0 BV/h，洗脱率可达到79.50%。该条件下所得洗脱
液经减压回收溶剂，冷冻干燥后得到黄酮含量为71.64%的刺
头复叶耳蕨总黄酮冻干粉。聚酰胺树脂纯化条件的建立为刺
头复叶耳蕨中黄酮成分的纯化提供了依据，从而为进一步研究
刺头复叶耳蕨中黄酮成分的药理活性提供基础。
参考文献：
[1]周道年，阮金兰，蔡亚玲.复叶耳蕨地上部分黄酮类化合物[J].中国药
学杂志，2008，43（16）:1218-1220.
[2]李辉敏.复叶耳蕨属植物研究进展[J].九江医学，2009（3）：91-93.
[3]胡军萍，依再提古丽·司马义，杨建华.酒花黄酮的纯化工艺[J].食品科
学，2013，34（12）:40-44.
[4]吴新荣，刘志刚，颜仁梁，等.聚酰胺颗粒分离纯化土茯苓总黄酮研究
[J].中药材，2009，32（10）:1606-1609.
[5]张玉祥，邱蔚芬，银杏叶超声波提取工艺研究[J].时珍国医国药，2006，17
（5）:784-785.蒉
编号 总黄酮吸附洗脱率 均值 RSD
1
2
3
82.51
79.72
76.17
79.50 3.98
表 1 刺头复叶耳蕨总黄酮纯化工艺验证结果（%）
蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉蒉
注：本文系 2013年浙江省大学生科技创新活动计划（新苗人才计划）项目立项课题（2013R434007）
牙合架是一种模仿人体上下颌、颞下颌关节，借以固定上
下颌模型和牙合托，具有与人体颞下颌关节相似运动形式的机
械装置，可以再现上颌对颞下颌关节的固有位置关系，将患者
上下颌高度、颌位关系转移到牙合架上，也可借助面弓将患者
上颌对颞下颌关节的固有位置关系，转移至牙合架上从而保持
稳定不变，模拟人体下颌运动。将模型放置到牙合架上，形成假
想的牙合平面，是修复体制作过程中必不可少的步骤。上牙合
架时用石膏将上下颌模型与牙合架上下颌体固定，调和并构筑
石膏，固定上下颌体，针对不同材料施加不同压力，使切导针与
切导盘紧密接触，待石膏完全固化后，撤除固定物，检查切导针
是否与切导盘紧密接触，如接触不良则需重新上牙合架。由于
石膏在水化凝结过程中，会产生一定程度的体积膨胀，因此要
注意防止模型移位。临床上也常会出现因切导针上浮而导致重
新上牙合架，或修复体在试戴过程中出现患者咬合升高、颞下
颌关节不适、无法恢复咀嚼功能和容貌等情况，这就需要大量
时间进行修改，使修复体制作时间延长，同时也增加了患者的
就诊次数。如何选择石膏、减小石膏的凝固膨胀和恰当施加合
适的压力，一直是困扰口腔医技人员的难题，也是口腔专业学
实验与实习 卫生职业教育
3种石膏上牙合架对颌位关系影响的研究
姬海莲
（浙江医学高等专科学校，浙江 杭州 310053）
摘 要：目的 研究普通石膏、硬石膏、超硬石膏在指定上牙合架时的膨胀性和施加不同压力对颌位关系的影响。方法 选用
普通石膏、硬石膏、超硬石膏，按一定的水粉比例调拌，在 ARUKOSO型牙合架上牙合架过程中针对石膏膨胀施加适当压力
测量相应石膏膨胀率与切导针上浮距离的关系。分析石膏在牙合架上不同时间和不同压力处理后由膨胀引起的切导针上
浮的差异。结果 对普通石膏、硬石膏、超硬石膏上牙合架分别施加平均 2.006 8 kg 、1.508 3 kg 、1.487 8 kg压力，3 h后上下
牙合架切导针上浮距离合计为 0 mm。结论 本研究选择的普通石膏、硬石膏、超硬石膏均可在控制压力下抵抗石膏凝固过
程中由膨胀引发的切导针上浮现象，使颌位关系记录保持不变。3种石膏材料上牙合架都不会影响义齿的制作质量。
关键词：石膏；牙合架；线性膨胀；颌位关系
中图分类号：G424.31 文献标识码：A 文章编号：1671-1246（2015）09-0106-02
Vol．33 2015 No．9
106- -