全 文 ：收稿日期:2010-09-15; 修订日期:2011-03-08
基金项目:江西省自然科学基金(No． 2007GQY0114)
作者简介:李辉敏(1974-) ，女(汉族) ，江西九江人，现任九江学院基础医
学院副教授，硕士学位，主要从事中药开发与药品质量控制工作．
复叶耳蕨提取物体外抗 HIV － 1 RT活性的研究
李辉敏，殷嫦嫦，吴家忠，张 磊
(九江学院·基础医学院，江西 九江 332000)
摘要:目的 对鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物复叶耳蕨不同提取部位体外抗 HIV － 1 逆转录酶活性进行研究。方法 在体外无
细胞系统内采用酶联免疫吸附测定 HIV －1逆转录酶的半数有效浓度(IC50)。结果 复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取
物抑制 HIV －1 逆转录酶的半数有效浓度 IC50分别为 84． 06，9． 74 μg·ml
－1，水提取物抑制 HIV － 1 逆转录酶的半数有效浓
度 IC50 ＞ 200 μg·ml
－1。结论 复叶耳蕨乙酸乙酯提取物与正丁醇提取物具有体外抑制 HIV －1 逆转录酶作用。
关键词:复叶耳蕨; 不同提取部位; HIV － 1 逆转录酶
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 09． 010
中图分类号:R962 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)09-2081-01
Anti －HIV －1 RT Effect of Different Extracts from Arachniodes exilis Ching
LI Hui-min ，YIN Chang-chang，WU Jia-zhong，ZHANG Lei
(Medical School，Jiujiang College，Jiangxi，Jiujiang 332000，China)
Abstract:Objective To evaluate the anti － HIV － 1 RT activities of the different extracts from Arachniodes exilis Ching．Meth-
ods The inhibitory effect on HIV － 1 RT was detected by enzyme － linked immunosorbent assay． Results In the experiment of an-
ti － HIV RT，the IC50 of the n － butanol extract、acetic ether extract were 84． 06，9． 74μg·ml
－1，respectively． The IC50 of the a-
queous extract was higher than 200 μg·ml －1 ． Conclusion The n － butanol extract，acetic ether extract from Arachniodes exilis
Ching have the inhibitory effect on HIV － 1 RT．
Key words:Arachniodes exilis; Different extracted parts; HIV － 1 RT
人类免疫缺陷病毒(HIV)为获得性免疫缺陷综合征 AIDS的
病原体。AIDS的广泛传播及耐药 HIV株的出现使得人们不断研
究、寻找与开发其预防和治疗药物。本研究考察复叶耳蕨不同提
取部位对 HIV － 1 逆转录酶活性的抑制作用，为开发新型的天然
抗 AIDS药物提供实验依据。复叶耳蕨 Arachniodes exilis Ching为
鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物，主要分布于世界热带和亚热带湿润区
域，其中在亚洲东部和东南部种类最为丰富，在我国主要分布于
长江流域以南地区及山东、河南等省，具有抗菌消炎，清热利湿，
镇静作用，民间用于治疗急性黄疸型肝炎、腰腿疼、关节炎、痢疾、
烫火伤等［1］。本课题组前期的初步研究发现，复叶耳蕨乙醇提
取物在体外具有一定的抗 HIV － 1 逆转录酶活性。本研究进一
步探索复叶耳蕨不同提取部位体外抗 HIV － 1 逆转录酶活性的
作用。
1 材料与方法
1． 1 样品制备 复叶耳蕨材料采自江西省九江市星子县，由九江
学院吴家忠副教授鉴定。采集后取样品根部洗净，切碎，80℃烘
干，粉碎，过 70 目筛，以 80%乙醇提取 3 次，合并滤液，经旋转蒸
发仪减压浓缩至稠膏状。采用液 －液分配法，将复叶耳蕨根部粗
提物用适量蒸馏水溶解，然后加石油醚萃取 3 次，对水层依次用
氯仿、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取 3 次，将各步萃取组分浓缩，分
别得稠浸膏，经国家新药筛选中心送至中国医学科学院医药生物
技术研究所病毒药物实验室进行体外抗 HIV － 1 逆转录酶筛选
测试。
1． 2 体外抗 HIV － 1 逆转录酶活性筛选测试 采用酶联免疫吸
附法测定:将 HIV － 1 逆转录酶作用的模板包被在酶标板上，在
最适酶反应条件和反应体系中，HIV － 1 逆转录酶(reverse tran-
scriptase RT)可将含有 Biotin － dUTP底物加到反应模板上，用链
亲合素标记的辣根过氧化物酶检测酶反应产物中 Biotin － dUTP
掺入量来反映酶的活性。在反应体系中加入样品可用于筛选该
酶的抑制剂。HIV － 1 RT:由中国医学科学院医药生物技术研究
所病毒药物实验室提取并保存。阳性对照药:奈韦拉平(NVP) ，
南京泽众医化信息研究中心。供体底物和靶底物:上海生工合
成。样品处理:复叶耳蕨水提取部位临用前用双蒸水配成适当浓
度，乙酸乙酯、正丁醇提取部位临用前溶于 DMSO 配成适当浓
度，并用双蒸水作 5 倍稀释，各 5 个稀释度。
2 结果
样品稀释后加入含有 Biotin － dUTP 和基因工程靶酶的反应
Buffer中，在最佳反应条件下孵育，以亲合素标记的辣根过氧化
物酶系统显色，测定 OD450值，计算出各样品对 HIV － 1 RT 活性
的抑制程度，得出各样品的半数抑制浓度(IC50)。结果见表 1。
表 1 复叶耳蕨提取物抗 HIV － IRT活性结果 μg·ml －1
样品 初始浓度 IC50
S － y 1． 6 0． 16
复叶耳蕨乙酸乙酯部位 200 84． 06
复叶耳蕨正丁醇部位 200 9． 74
复叶耳蕨水提取部位 100 ＞ 200
3 讨论
HIV － 1 是人类最为严重的致死性疾病 ，因此寻找有效的抗
HIV － 1 药物 ，彻底攻克恶疾，是世界医学界重要的研究课题。
近年来 ，合成类化学药在临床治疗方面取得了显著的进展。但
由于 HIV － 1 的高变异特性，接受药物治疗的大多数艾滋病患者
对至少一种药物产生耐药，因而研究开发更多结构新颖的抗艾滋
病药物仍具有重要的意义［2］。由于化学合成药具有较强的毒副
作用使得其应用受到局限，从多种天然药物中提取高效、无毒的
抗 HIV － 1 药物为势之所趋。我国传统中药在治疗 HIV － 1 方面
具有作用机制独特、毒副作用小等特点，备受患者青睐［3］。
体外药物抑制 HIV － 1 RT 实验初筛结果显示，复叶耳蕨根
乙酸乙酯部位、正丁醇提取部位抑制 HIV － 1RT的半数有效浓度
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9 时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期
IC50分别为 84． 06，9． 74 μg·ml
－1。证明其乙酸乙酯提取部位、
正丁醇提取部位具有体外抗 HIV － 1RT活性，其中正丁醇提取部
位作用强于乙酸乙酯提取部位，可进一步进行研究，寻找其抗
HIV － 1RT活性的有效成分，开发抗 HIV － 1 新药。
蛋白酶(PR)、逆转录酶(RT)和整合酶(IN)是 HIV － 1 生命
周期中的 3 个重要的酶，抑制这 3 种酶的活性可抑制 HIV － 1 的
复制，目前抗 HIV － 1 四类药物［4，5］中的 3 类是这些酶的抑制剂，
即逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂及整合酶抑制剂［6，7］，我们的
研究证明复叶耳蕨提取物对 HIV － 1 逆转录酶有抑制作用，一定
程度上表明它是一种具有抑制 HIV － 1 病毒复制的草药，为证实
该作用还需进一步在细胞水平及整体水平进行抗 HIV － 1 作用
的研究。
参考文献:
［1］ 李辉敏，张 磊． 复叶耳蕨地上部分微量元素锌铁铜锰含量测定
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2008，51 (2) :137．
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［6］ Merschman SA，Vallano PT，Wenning LA，et al． Determination of the
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matogrB Analyt Technol Biomed Life Sci，2007，857:15．
［7］ 杨勤刚，何煦昌，白东增． HIV 蛋白酶抑制剂研究进展［J］． 药学学
报，2005，40:389．
收稿日期:2010-09-16; 修订日期:2011-04-05
基金项目:天津市自然科学基金重点项目(No． 09JCZDJC21500) ;高等学校博士学科点专项科研基金(新教师基金)资助课题(No． 20091202120012)
作者简介:刘 洁(1986-) ，女(汉族) ，新疆伊宁人，现为天津医科大学硕士研究生，学士学位，主要从事临床药理学与药物代谢动力学研究工作．
* 通讯作者简介:娄建石(1954-) ，男(汉族) ，天津人，现任天津医科大学教授，博士研究生导师，硕士学位，主要从事心血管药理学及临床药理学研究
工作．
* 通讯作者简介:李 芹(1971-) ，女(汉族) ，山东聊城人，现任天津医科大学基础医学院副教授，博士学位，主要从事临床药理学与药物代谢动力学研
究工作．
灯盏花素对大鼠 CYP3A4 体内活性的影响
刘 洁，韩晓文，李 芹* ，焦建杰，高思楠，孟素蕊，娄建石*
(天津医科大学基础医学院，天津 300070)
摘要:目的 以咪达唑仑作为探针药物，研究灯盏花素对大鼠细胞色素 P450 3A4(CYP3A4)体内活性的影响，为临床合理
用药提供参考。方法 将 SD大鼠随机分为 3 组，对照组、灯盏花素低剂量组和高剂量组。低剂量组和高剂量组每天分别
尾静脉给予灯盏花素粉针剂 0． 18 mg /100 g及 0． 54 mg /100 g，共 10 d，对照组给予生理盐水。各组分别于第 11 天注射咪
达唑仑溶液，于给药前及给药后不同时间点眼内眦静脉取血 0． 8 ml，使用高效液相色谱(HPLC)法测定血浆中咪达唑仑
的浓度。结果 静脉给予大鼠灯盏花素粉针剂 10 d后，与对照组相比，低剂量组和高剂量组咪达唑仑的 AUC、MRT和 t
均显著高于对照组(P ＜ 0． 05) ，CL显著低于对照组(P ＜ 0． 05) ;灯盏花素高剂量组与低剂量组无显著性差异。结论 灯盏
花素可明显抑制大鼠 CYP3A4 的体内活性。
关键词:灯盏花素; 咪达唑仑; 大鼠
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2011． 09． 011
中图分类号:R285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2011)09-2082-02
Effect of Breviscapinum on the Activity of CYP3A4 in Rats
LIU Jie，HAN Xiao-wen，LI Qin* ，JIAO Jian-jie，GAO Si-nan，MENG Su-rui，LOU Jian-shi*
(Department of Pharmacology，Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China)
Abstract:Objective To study the effect of breviscapinum on the activity of CYP3A4 in rats with midazolam as probe．
Methods The rats were randomly divided into three groups:control group，low － dose group and high － dose group． The rats in
the low － dose group and high － dose group were treated with breviscapinum powder injection by caudal vein at the dose of 0． 18
mg /100g and 0． 54mg /100g once a day for 10 days respectively，the rats in the control group were injected with normal saline． On
the 11th day，all rats in each group were injected midazolam，then venous blood samples were collected at a set of timepoints． The
plasma concentration of midazolam was determined by HPLC． Results In low － dose group and high － dose group，AUC，MRT and
t1 /2 of Midazolam were significantly higher than those of control group(P ＜ 0． 05) ，and CLs was significantly lower than that of con-
trol group(P ＜ 0． 05)． There was no significant difference between low － dose group and high － dose group (P ＞ 0． 05)． Conclu-
sion Breviscapinum can significantly inhibit the activity of CYP3A4 in rats．
Key words:CYP3A4; Breviscapinum; Midazolam; Rat
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时珍国医国药 2011 年第 22 卷第 9 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2011 VOL． 22 NO． 9