全 文 ：第 24卷 第 4期
2009年 8月
天津科技大学学报
Journal of Tianjin University of Science & Technology Vol.24 No. 4 Aug. 2009

收稿日期：2008-11-19；修回日期：2009-02-25
作者简介：杨庆伟（1983—），男，天津人，硕士研究生，yangqingwei222@163.com.




灰树花菌丝体多糖的硫酸酯化及其降血脂作用

杨庆伟，鲁梅芳，金玉妍
(天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457)

摘 要：对灰树花菌丝体的水不溶性多糖进行硫酸酯化，得到硫酸酯化多糖(S-GF)，并对其进行降血脂活性研究．通
过对 S-GF 的红外光谱分析，其中两个特征吸收峰(1.236 和 823.cm−1)的出现表明硫酸酯化反应已经完成．S-GF 中
硫酸根质量分数为 17.7%．通过 Sephadex G50 柱层析图谱，证明 S-GF 为均一组分．小鼠实验表明，S-GF 明显反映
出对小鼠血脂的调节作用．在实验条件下给药剂量为 50.mg/(kg·d)时，高血脂症模型小鼠可达到治愈的程度．S-GF
呈现出明显的降血脂作用．
关键词：灰树花；硫酸酯化多糖；降血脂
中图分类号：Q539 文献标志码：A 文章编号：1672-6510(2009)04-0025-04

Sulfation and Hypolipidemic Effect of Polysaccharide of
Grifola frondosa Mycelia
YANG Qing-wei，LU Mei-fang，JIN Yu-yan
(College of Food Engineering and Biotechnology，Tianjin University of Science & Technology，Tianjin 300457，China)
Abstract：Determine hypolipidemic effects of a chemically sulfated polysaccharide(S-GF)，which was derived from water-
insoluble polysaccharide of Grifola frondosa mycelia. Two characteristic absorption bands(1 236 and 823 cm−1)appeared in
FTIR spectrum of S-GF，which indicated that the sulfation reaction had actually occurred. The sulfur content in S-GF was
17.7%. A single and homogeneous peak was found on Sephadex G50 chromatographic profile for S-GF. S-GF showed the
notable regulating effect on mice blood lipidemic profile. Hyperlipidemia models were cured at the dose of 50 mg/(kg·d). S-
GF indicated notable hypolipidemic effects.
Keywords：Grifola frondosa；sulfated polysaccharide；hypolipidemic

灰树花(Grifola frondosa)是担子菌亚门，层菌
纲，无隔担子菌亚纲，非褶菌目，多孔菌属中的一种大
型真菌，又名贝叶多孔菌(Polyporus frondosus)、栗子
蘑、佛菌以及重菇等．大量的药理药效的研究证明，灰
树花多糖具有显著的抗肿瘤、降血糖、抗肝炎、抗 HIV
病毒以及改善免疫系统功能等功效[1-3]．而在降血脂
方面只有袁德云等人[4]曾对其水溶性多糖进行过研
究．最近 10 年，多糖及其他的衍生物，尤其是硫酸酯
化衍生物的生物活性的研究越来越受到人们的关
注[5]．在对灰树花多糖的研究中发现，该菌丝体中水
不溶性多糖的占有量为水溶性多糖的 6 倍．因此，本
文针对灰树花的水不溶性多糖进行修饰，使其提高水
溶性和生理活性，并且对该修饰物的降血脂活性进行
了研究．
1 材料与方法
1.1 材料
灰树花菌丝体干粉，天津科技大学菌种保藏中心
提供，编号 39025；雄性健康昆明种小鼠，体重 18～
22,g；高脂饲料(以质量分数计)：基础饲料添加 1%胆
固醇、10%猪油、0.2%胆酸盐、10%蛋黄粉、5%蔗糖．
琼脂糖凝胶 DEAE Sepharose F.F.，天津博美科生
物技术有限责任公司；葡聚糖凝胶 Sephadex G50，北
·26· 天津科技大学学报 第 24卷 第 4期
京欣经科生物技术公司；总胆固醇(TC)、甘油三酯
(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白
胆固醇(LDL-C)试剂，中生北控生物科技股份有限
公司．
SP-2102PC 分光光度计，上海光谱仪器有限公
司；VECTOR22 傅里叶变换红外光谱仪；酶标仪
(Fcc)；垂直电泳系统(Bio-rad)．
1.2 方法
1.2.1 水不溶性多糖制备
取灰树花菌丝体干粉加蒸馏水至菌丝体的质量
分数为 60%，在冰水浴下超声波破壁 10,min，然后加
水稀释到质量分数为 4%，80,℃水浴 6,h．剩余残渣
溶解在 2% NaOH 溶液中 4,℃过夜，上清液用冰醋酸
中和，碱溶性沉淀物溶解在 0.05,mol/L NaOH 溶液
中，离心得到的上清液加 3 倍体积的 95%乙醇溶液，
过夜，沉淀物真空干燥，得到白色絮状物质水不溶性
多糖 GF[6]．将样品 GF 配制成 10,mg/mL 溶液，微孔
过滤后上 DEAE Sepharose F.F.柱，上样体积为
20,mL．
1.2.2 硫酸酯化多糖制备与分离
通过氯磺酸-吡啶法对灰树花水不溶性多糖 GF
进行硫酸酯化．酯化试剂的制备：无水吡啶(40 mL)
置于反应瓶中，冰盐浴冷却，剧烈搅拌下缓慢加氯磺
酸 20 mL，继续搅拌 30 min，备用[7]．
将 GF(200,mg)悬浮于无水 N，N-二甲基甲酰胺
(100,mL)中，倒入上述酯化试剂的反应瓶，于 60,℃
搅拌反应 3,h，用 2.5,mol/L NaOH 溶液中和，加入
95%的乙醇，离心分离，收集沉淀，将沉淀溶于适量的
蒸馏水中，超滤、浓缩后转至 DEAE Sepharose F.F.
(1.8,cm× 10,cm)阴离子交换柱，0～1.5,mol/L NaCl溶
液梯度洗脱，流量为 0.25,mL/min，用苯酚-硫酸法检
测多糖含量．通过 DEAE Sepharose F.F.层析图谱，收
集一个主要洗脱峰，冷冻干燥，得到硫酸酯化多糖
S-GF．
1.2.3 Sephadex G50凝胶柱层析
取 1,mL的 S-GF溶液，上 Sephadex G50柱(柱高
10,cm)，流量为 0.25,mL/min，以去离子水洗脱，分部
收集(每管2,mL)，用苯酚-硫酸法检测多糖的纯度．
1.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳
将 S-GF 溶解于蒸馏水中，配成 10,mg/mL 的溶
液，备用．参照文献[8]配制适宜浓度的分离胶和 5%
的浓缩胶并处理样品溶液．以 40,V/cm 进行电泳，直
到染料抵达分离胶的底部．阿里新兰染液染色，80%
乙醇溶液脱色．
1.2.5 硫酸基含量测定
采用氯化钡-明胶浊度法[9]．
1.2.6 红外光谱分析
溴化钾压片，测定范围为 400～4 000,cm-1．
1.2.7 降血脂实验
首先对实验小鼠进行高血脂症建模，经 14,d 的
有效饲喂后分析血样确证．将建模小鼠分为高脂对
照组和高、中、低剂量给药组与阴性对照组，每组 6
只．建模实验成功后，对给药组灌胃不同剂量的 S-GF
生理盐水溶液，高脂对照组灌胃等量生理盐水，并同
时继续饲喂高脂饲料，阴性对照组饲喂基础饲料外，
同样灌胃等剂量生理盐水．再过 14,d 后摘眼球取
血，测定小鼠血清 TC、TG、HDL-C 和 LDL-C 含
量．采用组间 t检验法．
2 结果与分析
2.1 S-GF的分离纯化
从图 1看出，经 DEAE Sepharose F.F.柱层析洗脱
可以得到两个峰，收集第一个高峰，命名为 S-GF．

图 1 硫酸酯化多糖 DEAE Sepharose F.F.层析图谱
Fig.1 DEAE sepharose fast flow chromatographic profile
for sulfated polysaccharide
2.2 S-GF纯度鉴定
如图 2所示，对 S-GF进行 Sephadex G50凝胶柱
层析，所得的洗脱峰为单一的洗脱峰．

图 2 硫酸酯化多糖的 Sephadex G50层析图谱
Fig.2 Sephadex G50 chromatographic profile for S-GF

2009年 8月 杨庆伟，等：灰树花菌丝体多糖的硫酸酯化及其降血脂作用 ·27·

图 3 显示 S-GF 聚丙烯酰胺电泳图，形成单一
带，这两种方法都证明了 S-GF 是均一组分．

图 3 硫酸酯化多糖聚丙烯酰胺电泳图
Fig.3 Polyacrylamide gel electrophoresis of S-GF
2.3 S-GF的性质鉴定
2.3.1 硫酸根含量测定
样品 S-GF 中含硫量为 17.7%，硫酸基取代度为
2.05．
2.3.2 GF，S-GF红外光谱分析
由红外吸收光谱分析图 4 显示，GF、S-GF 都含
有多糖母体特征吸收峰，在 1,236,cm-1 和 823,cm-1
处，硫酸酯化后 S-GF出现强吸收峰，而 GF在这两处
均无明显吸收．其中 1,236,cm-1 为 S═O 的伸缩振动
特征峰，823,cm-1 为糖环 C－O－S 的伸缩振动的特
征峰．以上结论充分说明水不溶性多糖 GF 已经形成
硫酸酯化多糖 S-GF．

图 4 GF和 S-GF红外光谱分析对比
Fig.4 Comparison of GF and S-GF IR spectra
2.4 降血脂实验测定结果
如表 1 所示， S-GF 在一定剂量下，具有较显著
的调节血脂代谢的作用．中剂量组小鼠血清中 TC、
TG、LDL-C 与高脂对照组相比，浓度分别降低
20.9%、24.8%、53.7%，说明有明显作用；高剂量组测定
TC、TG、LDL-C 与高脂对照组相比，浓度分别降低
32.8%、43.1%、65.1%，也有明显作用；HDL-C 浓度在
25～100 mg/(kg·d)剂量范围内没有明显变化，但是
cHDL-C∶cTC 值与高脂对照组相比，中剂量组升高
27.2%，高剂量组升高 48.7%，都有显著差异．TC、TG、
LDL-C 浓度随着样品剂量增大而减小，cHDL-C∶cTC
值随着剂量增大而增大，其中中剂量组各项指标最接
近阴性对照组．
表 1 S-GF对实验性高血脂症小鼠血脂水平的影响(n=6，x±s)
Tab.1 Effects of S-GF on serum of experimental hypercholeterolemia mice (n=6，x±s)
组别 cTC/(mmol·L-1) cTG/(mmol·L-1) cHDL-C/(mmol·L-1) cLDL-C/(mmol·L-1) cHDL-C∶cTC
阴性对照 4.30±0.61 1.70±0.32 1.59±0.17 1.71±0.29 0.372±0.031
高脂对照 7.13±1.04 2.46±0.35 2.11±0.26 3.07±0.39 0.302±0.060
低剂量组 6.77±0.88 2.23±0.44 2.04±0.37 2.42±0.40* 0.303±0.051
中剂量组 5.64±0.82* 1.85±0.45* 2.11±0.22 1.42±0.20*** 0.384±0.084*
高剂量组 4.79±0.69** 1.40±0.42*** 2.13±0.27 1.07±0.20*** 0.449±0.063**
注： 低、中、 高剂量组(25、 50、 100 mg/(kg·d))与阳性对照比较，* P＜0.05，** P＜0.01，*** P＜0.001.
3 讨 论
灰树花菌丝体中水不溶性多糖经过硫酸酯化后，
上 DEAE Sepharose F.F.柱层析，得到 S-GF．通过
Sephadex G50 凝胶柱层析和聚丙烯酰胺电泳鉴定 S-
GF为均一组分．红外吸收光谱分析S-GF除了多糖母
体特征吸收峰得以保留外，还有硫酸根的特征峰，证
明水不溶性多糖GF 已经形成硫酸酯化多糖 S-GF．氯
化钡-明胶浊度法鉴定，硫酸根取代度为 2.05．
高血脂症是一种常见的代谢性疾病，表现为体内
血浆中不同脂质异常堆积．主要脂质包括胆固醇和
甘油三脂[10]．LDL-C 含量越高，HDL-C 含量越低，胆
固醇在血清中含量越高，越易诱发各种高血脂症和心
血管疾病[11]．cHDL-C∶cTC 值升高，具有防止动脉粥样
硬化的作用．袁德云等[4]报道灰树花胞内多糖 GIP 10
mg/(kg·d)和发酵液 GFL 160,mg/(kg·d)降血脂功效
接近阴性对照组，与本文中中剂量组 50 mg/(kg·d)功
效类似．灰树花菌丝体水不溶性多糖进行硫酸酯化
后得到的 S-GF 降血脂作用比菌丝体水溶性多糖低，
比灰树花胞外多糖高．因此，灰树花硫酸酯化多糖 S-
GF 具有显著的降血脂作用，是一种有良好开发前景
的新型降脂保健品．
参考文献：
［1］ Kawagishi H，Nomura A，Mizuno T，et al. Isolation and
characterization of a lectin from Grifola frondosa fruiting
·28· 天津科技大学学报 第 24卷 第 4期
bodied[J]. Biochimica Et Biophysica Acta，1990，1034：
247–252.
［2］ Suzuki I，Itani T，Ohno N，et al. Antitumor-activity of a
polysaccharide fraction extracted from cultured fruiting
bodied of Grifola frondosa[J]. Journal of Pharmacobio-
dynam，1984，7：492–500.
［3］ Smith J E ，Rowan N J ，Sullivan R. Medicinal
mushrooms：a rapidly developing area of biotechnology
for cancer therapy and other bioactivities[J]. Biotechnol-
ogy Letters，2002，24：1839–1845.
［4］ 袁德云，章克昌. 灰树花发酵液及其胞内纯化物的降血
脂作用[J]. 中国药学杂志，2003，38(7)：507-508.
［5］ Xing R，Liu S，Yu H H，et al. Preparation of high-
molecular weight and high-sulfate content chitosans and
their potential antioxidant activity in vitro[J]. Carbohy-
drate Polymers，2005，61：148–154.
［6］ Nie X H，Shi B J，Ding Y T，et al. Preparation of a chemi
cally sulfated polysaccharide derived from Grifola fron-
dosa and its potential biological activities[J]. Interna-
tional Journal of Biological Macromolecules，2006，39：
228–233.
［7］ Yoshida T，Yasuda Y，Mimura T，et al. Synthesis of
curdlan sulfates having inhibitory effects in vitro against
AIDS viruses HIV-1 and HIV-2[J]. Carbohydrate Re-
search，1995，276：425–436.
［8］ 董晓燕. 生物化学实验[M]. 北京：化学工业出版社，
2002：22.
［9］ 张惟杰. 糖复合物生化研究技术[M]. 杭州：浙江大学
出版社，1994：91-92.
［10］ 王艳梅，李智恩，牛锡珍，等. 孔石莼多糖降血脂活性的
初步研究[J]. 中国海洋药物，2003，22(2)：33-35.
［11］ 沈同 . 生物化学(下)[M]. 北京：高等教育出版社，
1991：213.



（上接第 24 页）

［4］ Al-Hasan R H，Ali A M，Kawash H H，et al. Effect of
salinity on the lipid and fatty acid composition of the
halophyte Navicula sp.：Potential in mariculture [J].
Journal of Applied Phycology，1990，2(3)：215–222.
［5］ 朱松玲，王怡洁. 盐度变化对杜氏盐藻游离氨基酸和脂
肪酸含量的影响[J]. 海洋科学，2005，29(3)：8–11.
［6］ 周洪琪，易翠平，丁卓平，等. 环境因子对青岛大扁藻、
亚心形扁藻、微绿球藻脂肪酸组成的影响[J]. 浙江海
洋学院学报：自然科学版，2001，20(增刊)：112–117.
［7］ 吴瑞珊，魏东. 盐度及其调节方式对眼点拟微球藻的生
长和 EPA 积累的影响[J]. 现代食品科技，2007，23
(12)：4–8.
［8］ Teshima S，Yamasaki S，Kanazawa A， et al. Effect of
water temperature and salinity on eicosapentaenoic acid
level of marine Chlorella. Bull[J]. Jap Soc Sci Fish Nis-
suishi，1983，49：805-807.
［9］ 缪锦来，王波，阚光峰，等. 环境因子对 2 种南极绿藻脂
肪含量和脂肪酸组成的影响[J]. 海洋科学，2005，
29(1)：4–11.
［10］ 梁英，麦康森，孙世春，等 . 不同培养基对筒柱藻
Cylindrotheca fusiformis 生长及脂肪酸组成的影响[J].
海洋湖沼通报，2000(1)：60–67.
［11］ Sultana N，Hossain M A. Mass-scale mono-culture of
marine unicellular algae Chlorella minutissima under dif-
ferent salinities[J]. Indian J Fish，1989，36：307–313.
［12］ Al-Shayji Y，Hamdan J. Selection of Chlorella species for
intensive culture production. 1. Growth of five species in
high salinity conditions[J]. Annu Res Rep Kuwait Inst
Sci Res，1985，10：70–72.
［13］ 蒋敏霞，柳敏海，邢晨光，等. 不同生长条件对绿色巴夫
藻生长与脂肪酸组成的影响[J]. 水生生物学报，2007，
31(1)：88–93.
［14］ 缪晓玲，吴庆余. 微藻生物质可再生能源的开发利用
[J]. 可再生能源，2003，109(3)：13–16.