全 文 ：收稿日期:2005 02 24
作者简介:刘茁(1978 ),男(汉族), 辽宁沈阳人 ,硕士研究生;王金辉(1972 ), 男(汉族), 吉林通化人 , 教授 , 博士生
导师 , Tel.024 23986479 , E mail wang jh1972@vip.sina.com。
文章编号:1006 2858(2005)06 0422 03
广金钱草的化学成分
刘　茁 , 董　焱 ,王　宁 , 王　楠 , 王金辉 , 李　铣
(沈阳药科大学 中药学院 , 辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 研究广金钱草(Desmodium sty racifolium (Osb.)Merr.)的化学成分。方法 利用大孔
吸附树脂色谱 、硅胶色谱方法进行分离纯化;根据波谱解析 、理化常数分析及文献对照进行结构鉴
定。结果 从广金钱草水提取物经过大孔吸附树脂的体积分数为 60%的乙醇洗脱物中分离鉴定了
6 个化合物 , 分别为(3α, 4β , 5α)4 , 5 二氢 3 (1 吡咯基)4 , 5 二甲基 2(3H)呋喃酮(Ⅰ)、水杨
酸(Ⅱ)、香草酸(Ⅲ)、阿魏酸(Ⅳ)、3 , 4 二甲氧基苯酚(Ⅴ)和乙二酸(Ⅵ)。结论 化合物Ⅰ～ Ⅳ首次
从广金钱草分离得到 ,其中化合物Ⅰ为新天然产物。
关键词:广金钱草;豆科;化学成分
中图分类号:R 914;R 932　　　文献标识码:A
　　广金钱草(Desmodium styraci folium(Osb.)
Merr.)为豆科山蚂蝗属植物 ,亦称金钱草 、假花
生 、马蹄草 、银蹄草 、落地金草 、铜钱草等[ 1] ,分布
于福建 、广东 、广西和湖南等省区 ,其枝叶入药。
广金钱草具有清热祛湿 、利尿通淋 、排石的功能 ,
用于尿路感染 、泌尿系结石 、胆囊结石 、肾炎浮肿 、
黄疸型肝炎 、小儿疳积 、痈肿等病症 。文献记载广
金钱草主要含有生物碱 、黄酮 、酚类 、鞣质等成
分[ 2 ,3] ,近年来国内外对广金钱草的黄酮成分有
详细的报道 ,但对其酚酸类成分报道较少。
本次实验利用硅胶色谱 、大孔吸附树脂色谱
和Sephadex LH 20柱色谱等分离手段 ,从广金钱
草中分离得到 6个化合物 ,经理化常数和光谱分
析分别鉴定为:(3α,4 β , 5α)4 ,5 二氢 3 (1 吡
咯基)4 , 5 二甲基 2(3H)呋喃酮(Ⅰ)、水杨酸
(Ⅱ)、香草酸(Ⅲ)、阿魏酸(Ⅳ)、3 , 4 二甲氧基苯
酚(Ⅴ)和乙二酸(Ⅵ)。
1　仪器与材料
ARX 300核磁共振波谱仪(TMS 内标 ,瑞士
Bruker 公司), LCQ 液 质联用仪(美国 Finnigan
公司), MP S3 显微熔点测定仪测定(温度未校
正 ,日本 Yanaco 公司)。
HPD100大孔吸附树脂(河北沧州宝恩化工
公司),薄层色谱 、柱色谱用硅胶(青岛海洋化工有
限公司),其他试剂(分析纯 ,市售)。
广金钱草全草 ,2003年 7月购于广州市药材
公司 ,经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为广金钱
草(Desmodium styracifolium(Osb.)Merr.)
2　提取分离
取干燥的广金钱草茎叶 7.5 kg ,水提 ,滤液浓
缩后 , 经过 HPD100 大孔吸附树脂 ,体积分数为
60%的乙醇洗脱部分回收溶剂得浸膏 160 g 。浸
膏溶解拌样再经过干柱色谱 ,洗脱系统为CHCl3
MeOH HCOOH(体积比为 9.6∶9.6∶1), 共分成
27馏分 。根据 TLC 检查 ,合并极性相近且偏小
的部分 , 用硅胶柱色谱进行分离 , 并用CHCl3
MeOH 系统进行梯度洗脱 ,CHCl3 MeOH(体积比
为 100∶1)得到化合物 Ⅰ 、Ⅱ、Ⅴ和 Ⅵ , CHCl3
MeOH(体积比为 100∶2)得到化合物Ⅲ和Ⅳ。
3　结构鉴定
化合物 Ⅰ:淡黄色油状物质。 1H NMR
(300 MHz ,DMSO d 6)中 ,高场区有 2 组甲基质
子 δ1.01(3H ,d , J =6.5 Hz ,H 6)和 δ1.42(3H ,
d , J =6.1 Hz ,H 7),1组多重峰信号 δ2.44(1H ,
m ,H 4)、4.28(1H , m ,H 5)和 δ5.01(1H , d , J =
12.0Hz ,H 3),通过 HMQC 和 DEPT 谱可知该组
质子均为叔碳质子 ,在1H 1H COSY谱中以上质
子信号构成一类似异戊基的片断 。在13C NMR
(75 MHz ,DMSO d6)中 ,其中 δ173.0(C 2)为羰
基碳信号 , δ79.2(C 5)为连氧碳信号 ,HMBC谱
中 δ5.01(H 3)与 δ173.0(C 2)有远程相关 ,根
第 22 卷 第 6 期
2 0 0 5 年 1 1 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.22 　No.6
Nov.2005 p.422
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2005.06.007
据其化学位移值并与文献[ 4]对照推测分子中存
在γ内酯环的结构。但1H NMR低场区的2组
质子 δ6.07(2H , t , J =2.0 Hz)和 δ6.82(2H , t ,
J =2.0 Hz),在1H 1H COSY谱只表现为相互关
联 ,不与其他质子信号关联 ,推断低场区的 2组质
子与季碳或杂原子相连 ,根据 HMQC 谱2组质子
分别与 δ108.5和 δ120.5碳原子相连 ,而该2组
碳信号在 DEPT 谱中表现应该为 2组次甲基碳信
号 ,故断定1H NMR低场区 2组质子信号应该为
化学等同的 2组 —CH —CH —片断 ,根据其碳氢
化学位移值推测为一吡咯环。结合ESI M S中给
出 m/ z :202[ M +Na] +、180[ M +H] + ,进一步推
断1H NMR低场区 2 组质子为吡咯环的质子。
在HMBC谱中 , δ5.01(H 3)与 δ120.5(C 2′, 5′)
存在远程相关 ,说明吡咯环以 N 原子连接在γ内
酯环的 3位上 ,结合以上的推导可知化合物 Ⅰ的
平面结构如图 1。化合物Ⅰ的 3 、4 、5位取代基空
间取向可通过 NOESY谱确定 ,NOESY谱显示出
化合物 Ⅰ中 4位甲基质子(δ1.01)与 3位次甲基
质子(δ5.01)和 5位次甲基(δ4.28)都有空间相
关 ,并且 3 位次甲基质子(δ5.01)与 5 位次甲基
(δ4.28)有空间相关 ,这些说明呋喃环上的 3个
取代基空间互为反式 。综合以上并与文献[ 4]中
的谱学数据对照基本一致 , 故鉴定该化合物为
(3α,4β , 5α)4 ,5 二氢 3 (1 吡咯基)4 , 5 二甲
基 2(3H)呋喃酮(Ⅰ),为一新天然产物 ,结构见
图 1。根据 HMBC 谱 、HMQC 谱和1H 1H COSY
谱归属化合物 Ⅰ的1H NMR和13C NMR数据见
表 1。
Fig.1　The structure , key HMBC and NOESY of compound Ⅰ
Table 1　The NMR data of compoundⅠ(DMSO d6δ)
No. δH δC δ1H-1H COSY δHMBC DEPT
2 173.0 C
3 5.01(d , J =12.0 Hz , 1H) 64.3 2.44(H 4) 45.1(C 4), 120.5(C 2′or 5′), 173.0(C 2) CH
4 2.44(m , 1H) 45.1 5.01(H 3), 4.28(H 5) 12.9(C 6), 18.0(C 7), 64.3(C 3), 79.2(C 5) CH
5 4.28(m , 1H) 79.2 1.42(H 7) 12.9(C 6) CH
6 1.01(d , J =6.5 Hz , 3H) 12.9 2.44(H 4) 45.1(C 4), 64.3(C 3), 79.2(C 5) CH3
7 1.42(d , J =6.1 Hz , 3H) 18.0 4.28(H 5) 45.12(C 4), 79.2(C 5) CH3
2′, 5′ 6.82(t , J=2.0 Hz , 2H) 120.5 6.07(H 3′, 4′) 120.5(C 2′, 5′) CH
3′, 4′ 6.07(t , J=2.0 Hz , 2H) 108.52 6.82(H 2′, 5′) 108.52(C 3′, 4′), 120.54(C 2′, 5′) CH
　　化合物Ⅱ:无色针晶 ,mp 158 、159 ℃。三氯化铁
铁氰化钾反应阳性 ,表明存在酚羟基;溴酚蓝反应阳
性 , 表 明 有 羧 基 存在。 1H NMR(300 MHz ,
DMSO d6)中给出羧基质子为 δ13.78(1H , s ,
COOH),酚羟基质子为 δ11.42(1H , s ,OH 2)。质子
δ7.80(1H , dd , J =1.6 ,7.8 Hz , H 6)、7.52(1H , m ,
H 4)和 δ6.94(2H ,m ,H 3 or H 5),其数据与文献
[ 5]中水杨酸的谱学数据对照基本一致 ,并与对照品
共薄层 ,Rf值一致 ,故鉴定该化合物为邻羟基苯甲
酸 ,即水杨酸(salicylic acid),结构见图2。
Fig.2　The structure of compound Ⅱ Ⅵ
　　化合物Ⅲ:白色针晶 ,mp 210 ～ 212 ℃。三氯 化铁 铁氰化钾反应阳性 ,表明存在酚羟基 ,溴酚
423第 6 期 刘　茁等:广金钱草的化学成分　　　
蓝反 应 阳性 , 表 明 有 羧基 存 在 。 1H NMR
(300 MHz , DMSO d 6)中给出羧基质子为 δ
12.44(1H , s ,COOH),酚羟基质子为 δ9.87(1H ,
s ,OH 3),并给出 1个甲氧基质子 δ3.81(3H , s ,
OCH3 3)。信号 δ7.45(1H , br.d , J =8.8 Hz ,
H 6)和 δ6.85(1H ,d , J =8.8 Hz ,H 5)的存在 ,
同时给出 δ7.44(1H , br.s ,H 2),其数据与文献
[ 6]中香草酸的谱学数据对照基本一致 ,并与对照
品共薄层 , Rf值一致 ,故鉴定该化合物为3 甲氧
基 4 羟基苯甲酸 ,即香草酸(vanillic acid),结构
见图 2。
化合物Ⅳ:淡黄色针晶 , mp 173 、174 ℃。三
氯化铁 铁氰化钾反应阳性 ,表明存在酚羟基;溴
酚蓝反应阳性 , 表明有羧基存在 。 1H NMR
(300 MHz , DMSO d 6)中给出羧基质子为 δ
12.15(1H , s , —COOH), 酚羟基质子为 δ9.57
(1H , s , 4 OH),并给出 1个甲氧基质子 δ3.81
(3H , s , 3 OCH3)。δ7.49(1H , d , J =15.9 Hz ,
H 8)和 6.37(1H ,d , J =15.9 Hz ,H 7)为反式双
键的质子信号。信号 δ6.78(1H ,d , J =8.1 Hz ,
H 5)和 δ7.08(1H , br.d , J =8.2 Hz ,H 6)以及
δ7.29(1H , br.s ,H 2)提示有 ABX偶合系统存
在 ,其数据与文献[ 7 ,8]中阿魏酸的谱学数据对照
基本一致 ,并与对照品共薄层 , Rf值一致 ,故鉴定
该化合物为3 甲氧基 4 羟基 桂皮酸 ,即阿魏酸
(ferulic acid),结构见图 2。 13C NMR(75 MHz ,
DMSO d 6) δ:55.8(—OCH3)、125.9(C 1)、
111.2(C 2)、149.2(C 3)、144.7(C 4)、115.7
(C 5)、123.0(C 6)、148.0(C 7)、115.6(C 8)、
168.2(—COOH)。
化合物Ⅴ:无色油状 。三氯化铁 铁氰化钾反
应阳性 ,表明存在酚羟基 。1H NMR(300 MHz ,
DMSO d 6)中给出酚羟基质子为 δ8.96(1H , s ,
1 OH), 2组甲氧基质子 δ3.90(s , 3 OCH3)和 δ
3.64(s ,4 OCH3),并给出 1组 δ6.73(1H ,d , J =
8.6 Hz , H 5)、6.40(1H , d , J =2.7 Hz , H 2)、
6.25(1H ,dd , J =2.7 , 8.6 Hz ,H 6)的 ABX偶合
系统 ,薄层 Emerson反应提示羟基对位有取代基 ,
而其数据与文献[ 9]中 3 ,4 二甲氧基苯酚的谱学
数据对照基本一致 ,故鉴定该化合物为 3 , 4 二甲
氧基苯酚(3 ,4 dimethoxyphenol),结构见图 2。
化合物Ⅵ :无色结晶 ,mp 191 ～ 193 ℃。溴酚
蓝反 应 阳 性 , 表 明 有 羧 基存 在 。 1H NMR
(300 MHz , DMSO d 6)中只有活泼氢质子 δ
13.99(brs , —COOH),结合 13C NMR(75 MHz ,
DMSO d 6)中只在 δ161.0 处有信号 ,其数据与
文献[ 10 、11]中乙二酸的谱学数据对照基本一致 ,
并与对照品共熔点不下降 ,故鉴定该化合物为乙
二酸(oxalic acid),结构见图 2 。
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Establishment of drug content determination method in
chitosan microspheres
LI Ke-xin , CHEN Da-wei , ZHAO Xiu-li , LUO Yi-fan , WANG Dan-lei
(School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceut ical Universi ty , Shenyang 　110016 , China)
Abstract:Objective To establish determination method of 5-Fu encapsulation efficiency(EE)in chitosan
microspheres(MS)by HPLC.Methods The C18 column(15 cm ×4.6 mm , 5 μm)was used.The mobile
phase consisted of methanol-water(V∶V=10∶90)mixture , the detection w as set at 266 nm.The ultrason-
ic-immersing-grinding method w as adopted to determine the drug EE.The EE of the same batch MS also
ectected w ith other tw o methods;methanol-immersing and nit ric acid-clearing up respectively.Results The
mean recovery was 103.64%,RSD was 1.60%(n=5).The linear range w as good in 2.0-20.0 mg·L-1.
The mean encapsulation ef ficiency w as 42.21%.But the EE detected by methanol-immersing w as lower
than the t rue value , the reason w as that only the drug on the surface of MS could dissolved.The EE deter-
mined by nit ric acid-clearing up w as higher than the t rue value , the reason was that some adjuvant had ab-
sorption at 266 nm.Conclusions The new ly established method is suitable and accurate ,which could be de-
veloped as the determination method for the drug EE of the chitosan microspheres.
Key words:5-fluorouracil;chitosan microspheres;encapsulation efficiency;RP HPLC
(上接第 424页)
Chemical studies on the constituents of Desmodium
styracifolium(Osb.)Merr.
LIU Zhuo , DONG Yan , WANG Ning , WANG Nan , WANG Jin-hui , LI Xian
(School of Tradi tional Chinese Materia Medica , Shenyang Pharmaceutical University , S henyang 　
110016 , China)
Abstract:Objective To study the chemical constituents of Desmodium styraci fol ium(Osb.)Merr.Methods
Separation process w as carried out by the chromatographic methods , such as silica gel , macropo rous resin ,
and so on., identification w as performed by spectral analysis and phy sico-chemical constants.Results Six
compounds w ere isolated from Desmodium styraci folium(Osb.)Merr.(Leguminosae)and identified as:
(3α,4β , 5α)-4 , 5-dihydro-4 , 5-dimethyl-3-(1-pyrroly l)-furan-2(3H)-one(Ⅰ), salicylic acid(Ⅱ), vanillic
acid(Ⅲ), ferulic acid(Ⅳ), 3 ,4-dimethoxyphenol(Ⅴ)and oxalic acid(Ⅵ).Conclusions Six compounds are
obtained from this plant for the fi rst t ime , compound Ⅰ is identified as a novel natural product.
Key words:Desmodium styraci folium(Osb.)Merr.;Leguminosae;chemical consti tuents
437第 6 期 李可欣等:RP HPLC 法测定壳聚糖微球中5 氟尿嘧啶的包封率