全 文 ：* 中央级科研院所科技基础性工作专项资金项目资助
收稿日期：2004-07-01 改回日期：2004-08-19
应用RAPD技术区别芒果抗炭疽病品种的研究*
张 欣
（中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 儋州 571737）
摘 要 应用RAPD技术在分子水平上对10个芒果品种的遗传变异程度研究分析结果表明，10个芒果品种被聚为
3个RAPD组，RAPD组与品种对炭疽病的抗性有明显相关性。表明RAPD技术在筛选抗病品种时可作为辅助手段
之一。
关键词 芒果 炭疽病 抗性 RAPD技术
TheutilizationofRAPDtechniqueforthedifferentiationofLangoanthracnoseresistancecultivars.ZHANGXin（Insti-
tuteofEnvironmentandPlantProtection，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalScience，Danzhou571737，China），
CJEA，2005，13（4）：20~21
Abstract Thedegreeofgeneticvariationof10Mangiferaindicacultivarswasmeasuredatthemolecularlevelbyrandom
amplifiedpolymorphicDNA（RAPD）.Theresultsshowthat10Mangiferaindicacultivarsareclusteredinto3RAPD
groupswhichismarkedlycorrelatedwiththeresistanceofmangotoanthracnose，revealingthattheRAPDtechniquecanbe
usedasanaidinscreeningthediseaseresistancecultivars.
Keywords Mangiferaindica，Anthracnose，Resistance，RAPDtechnique
（ReceivedJuly1，2004；revisedAug.19，2004）
芒果炭疽病（Coletotrichumgloeosporioides）为严重的真菌病害，目前主要用化学方法防治，但成本高、效益低
且污染果实和环境，而采用抗病品种防治该病可有效解决上述问题。目前对抗炭疽病芒果品种的筛选主要有
大田筛选法、室内筛选法和综合筛选法，但这些方法费时费力［1］。近年已探索出一些高效简便、快速的生物技
术方法进行抗病品种筛选，如同工酶电泳酶活性方法、用近等基因系法和分离群体分组分析法获得抗病基因连
锁的RAPD标记等，此外RAPD技术能区别不同品种（系）及其耐盐性和抗虫性等［2~4］。应用分子生物学技术
对芒果种质多样性的研究已见诸报道［5，6，8，9］，而利用RAPD技术区别芒果抗炭疽病品种的研究尚少见报道。
本研究应用RAPD技术区别10个芒果品种对炭疽病的抗性，为筛选芒果抗病品种提供辅助手段。
1 试验材料与方法
试验在海南省儋州市华南热带农业大学园艺学院教学基地采集10个芒果品种嫩叶，其编号、名称及抗
病性1为“海顿”，中抗；2为“枋红”，中抗；3为“陵水大芒”，中抗；4为“马切苏”，中抗；5为“粤西一号”，中感；
6为“吕宋”，中感；7为“秋芒”，中感；8为“黄玉”，高感；9为“小青皮”，高感；10为“泰国生食芒”，高感。
按CTAB法提取基因组DNA［7］，采用分光光度法检测DNA浓度。RAPD反应体系总体积为25μL，其
中美国Operon公司生产8μmol／L引物2μL，10*PCR缓冲液2.5μL，25mmol／LMgCl2 .5μL，广州华美公司
产5U／μLTaq酶0.4μL，上海Sangon公司产2.5mmol／LdNTPs2μL，10ng／μLDNA2μL，水13.6μL。PCR
反应循环条件为94࠷变性4min；94࠷变性1min，35࠷退火1min，72࠷延伸2min，38个循环；72࠷延伸
10min。采用TgradientPCR仪进行扩增。PCR产物在15g／kg琼脂糖凝胶中电泳，Marker为GeneRuler
100bpDNA，采用UVI凝胶成像系统记录电泳结果。电泳图谱中各条谱带（DNA片段）均为1个分子标记，
代表1个引物结合位点，根据各位点有无谱带进行统计，有带记为1，无带记为0，以此为依据计算品种间相
似系数，其公式为：
SD E
2nxy
nx+ny
（1）
式中，SD为相似系数，nxy为2品种间分子量相同的扩增DNA片段总数，nx、ny分别为品种x和品种y的扩
第13卷第4期 中 国 生 态 农 业 学 报 Vol.13 No.4
2005年10月 ChineseJournalofEco-Agriculture Oct.，2005
增DNA片段总数。利用UPGMA软件进行聚类分析，并构建系统树状图。
2 结果与分析
图1 引物OPF-08的RAPD图谱
Fig.1 RAPDpatternwithprimerOPF-08
2.1 RAPD扩增结果
选用Operon公司生产的E、F、P3组计60个随机引物，对供试品
种的基因组DNA进行扩增，根据扩增结果筛选出OPE-02、OPE-04、
OPE-10、OPF-08、OPF-16、OPP-06、OPP-14和OPP-208个扩增清楚
的随机引物，各引物扩增出不同的DNA带谱。用8个随机引物对10
个芒果品种进行RAPD扩增（见图1），共扩增出76条DNA带，分子
量大小为0.2~2kb，其中多态带50条，条带多态率为65.8%，表明10
个芒果品种间具有丰富的遗传多样性，有利于应用RAPD技术分析研
究其遗传分化。
图2 10个芒果品种聚类图
Fig.2 Clusteranalysisoftheten
Mangiferaindicacultivars
2.2 芒果品种对炭疽病的抗性与其RAPD组间相关性
由图2可知，以相似系数0.72划分，10个芒果品种聚类为MI1、
MI2和MI33个RAPD组，其中 MI1组包含1、2、3、4号芒果品种，
MI2组包含5、6、7号芒果品种，MI3组包含8、9、10号芒果品种。将
供试芒果品种3个抗病等级与其RAPD聚类组作对照分析，RAPD聚
类组与抗病等级间有极明显相关性，如中抗1、2、3、4号芒果品种在
RAPDMI1组，中感5、6、7号芒果品种在RAPDMI2组，高感8、9、
10号芒果品种在RAPDMI3组。
3 小 结
采用RAPD技术可区别芒果品种对炭疽病的抗病程度，筛选抗病
品种时可将已知与未知抗病程度的芒果品种一起进行RAPD分析，根
据聚类分析结果判断未知品种抗病程度，该技术在筛选抗病品种时可
作为辅助手段之一。
参 考 文 献
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