全 文 ：　　收稿日期:2008-09-10
　　基金项目:吉林省教育厅科技计划项目(200660)
　　作者简介:刘洪霞(1983-),女 ,汉族 , 吉林辽源人 ,长春工业大学硕士研究生 ,主要从事功能食品与生物技术方向研究 , E-mail:
2819472962@qq.com .＊联系人:邱芳萍(1955-),女 ,汉族 ,吉林长春人 ,长春工业大学教授 ,理学博士 ,主要从事功能
食品与生物技术方向研究 , E-mail:qfp@126.com.
第 30 卷 第 2期　　　　　　　　　　　长春 工 业 大学 学 报(自然科学版)　　　　 　　　　　　Vo l.30 No.2
2009 年 04月　　 　Journal of Changchun Unive rsity o f Techono lo gy(Natural Science Edition)　 　　 Apr.2009
粪鬼伞多糖的提纯与定性研究
刘洪霞 , 　田文莹 , 　王志兵 , 　邱芳萍＊
(长春工业大学 化学与生命科学学院 , 吉林 长春　130012)
摘　要:采用水提醇沉法提取粪鬼伞粗多糖(CPS), 并对其提纯与鉴定。CPS 经酶法结合
Sevag 法脱除蛋白 ,上 DEA E-cellulose-52 柱和 Sepharose-6B 凝胶柱层析 ,分离纯化得多糖
CPS-Ⅰ a。经紫外光谱扫描 , Sephadex G-100 凝胶柱层析和红外光谱分析 , 结果显示 ,多糖
CPS-Ⅰ a具有葡萄糖醛酸的特征吸收峰 , α-D吡喃糖苷键连接 ,是一种酸性多糖。
关键词:粪鬼伞多糖;纯化;定性
中图分类号:Q539.7　　文献标识码:A　　文章编号:1674-1374(2009)01-0126-04
Purificat ion of polysaccharides from Coprinus sterqulinus Fr.
LIU Hong-xia , 　TIAN Wen-ying , 　WANG Zhi-bing , 　QIU Fang-ping＊
(School of C hemical & Li fe S cien ce , Changch un University of Technology , Changchun 130012 , China)
Abstract:With w ater-ethyl alcohol ex traction method , crude Coprinus sterqulinus Fr.Po lysaccharide
(CPS)i s obtained and then purified.CPS is united wi th Sevag to remove the proteins , upper
DEAE-52 column and Sepha ro se-6B gel to g et the component CPS-Ⅰ a.Sephadex G-100 is scanned
wi th UV spect ra and then analy zed w ith IR spect ra , and the results indicate that CPS-Ⅰ a , as an acid
po ly saccharide , has an abso rption peak fo r g lucuronidase and α-D g lycosidic bond.
Key words:Coprinus ste rqulinus Fr.Po ly saccharide;purif icat ion;ex t raction.
0　引　言
　　粪鬼伞多糖(简称 CPS)是从深层发酵的菌
丝体中提取的具有多种药理作用的多糖类物质 ,
是良好的生物效应调节剂。研究报道[ 1] , CPS 对
细菌有较强的抑菌活性 ,对小鼠肝癌细胞有抑瘤
作用 ,并可延长荷瘤小鼠生命 。
　　采用自制粪鬼伞菌丝体 ,对其多糖进行提纯
和定性研究 ,并应用紫外-可见吸收光谱和红外光
谱对其多糖成分进行定性研究 。
1　实验材料与方法
1.1　实验材料
1.1.1　实验样品
　　粪鬼伞菌丝体实验由长春工业大学功能食品
与生物技术研究所筛选保存的菌种 ,经深层发酵
DOI :10.15923/j.cnki.cn22-1382/t.2009.02.001
培养得菌丝体[ 2] 。
1.1.2　主要仪器
　　GG47-FTS7000红外光谱仪 ,北京卓立汉光
仪器有限公司;
　　UV1102紫外光谱分光光度计 ,上海天美科
学仪器有限公司;
　　TDZ5-WS 离心机 ,湖南赛特湘仪离心机仪
器有限公司;
　　FD-1C冷冻干燥机 ,北京德天佑科技发展有
限公司。
1.1.3　主要试剂
　　木瓜蛋白酶 ,Sigma;
　　Sepharose-6B , Sephadex G-100 , DEAE-52 ,
均为鼎国公司产品;
　　其余药品均为分析纯 。
1.2　实验方法
1.2.1　多糖测定
　　总糖含量采用苯酚-硫酸法测定 ,还原糖含量
采用 3 , 5-二硝基水杨酸法测定 。
1.2.2　粗多糖的提取
　　粪鬼伞菌丝体通过细胞破碎 ,水浴提取 ,乙醇
沉淀 ,酶法结合 Sevag 法脱蛋白 ,冷冻干燥得多糖
粗品 。
1.2.3　多糖的分离纯化[ 3-5]
1.2.3.1　DEAE-cellulose-52离子交换柱层析
　　0 ～ 1.0 mol/ L NaCl溶液梯度洗脱 ,流速为
1 mL/min ,每5 min收集 1管 ,苯酚-硫酸法检测。
1.2.3.2　Sepharose-6B凝胶柱层析
　　蒸馏水洗脱 ,流速为 0.5 mL/min ,每 5 min
收集 1管 ,苯酚-硫酸法检测 。
1.2.4　CPS 的纯度鉴定[ 6]
1.2.4.1　紫外光谱扫描
　　取 CPS-Ⅰ a多糖 ,在 200 ～ 400 nm 波段进行
光谱扫描 。
1.2.4.2　Sephadex G-100凝胶柱层析
　　将 CPS-Ⅰ a 多糖组分经 Sephadex G-100柱
层析 ,蒸馏水洗脱 ,流速为 0.5 mL/min ,每 5 min
收集 1管 ,苯酚-硫酸法检测 。
1.2.5　CPS-Ⅰa 的理化性质分析
　　苯酚-硫酸反应 , 蒽铜-硫酸反应 , 硫酸-咔唑
反应 , Folin-酚反应 , 茚三铜反应 , 碘-碘化钾反
应。
1.2.6　红外光谱分析[ 7]
　　取 CPS-Ⅰ a 多糖 3.0 ～ 5.0 mg ,加入适量
KBr 晶 体 , 压片 机压 片 , 红外 光谱 400 ～
4 000 cm-1扫描 。
2　实验结果与分析
2.1　多糖测定
　　苯酚-硫酸法测定总糖含量 ,以葡萄糖为标品
制作标准曲线得回归方程:
A =11.89C +0.070 9 R =0.999 2
　　3 , 5-二硝基水杨酸法测定还原糖含量 ,以葡
萄糖为标品制作标准曲线得回归方程:
A =12.73C -0.078 6 R =0.999 2
2.2　粗多糖的分离纯化
　　CPS DEA E-cellulose-52柱层析如图 1所示 。
图 1　CPS DEAE-cellulo se-52柱层析图
　　由图中可以看出 , 粗多糖 CPS 经 DEA E-
cellulose-52柱分离得到两个多糖组分(CPS-Ⅰ ,
CPS-Ⅱ)。经计算 ,其中 CPS-Ⅰ为 50 mg ,得率为
68.5%。
　　将 CPS-Ⅰ进一步用 Sepharose-6B 纯化 ,可
得到 3个洗脱峰 ,如图 2所示 。
图 2　CPS-Ⅰ Sepha rose-6B 柱层析图
　　从图中可以看出 ,收集峰得到 3 个多糖组分
127第 2 期　　　　　　　　　　 　　　刘洪霞 , 等:粪鬼伞多糖的提纯与定性研究
(CPS-Ⅰ a ,CPS-Ⅰb ,CPS-Ⅰ c),经透析 、浓缩 、醇
沉 、洗涤 、冻干 ,其中 CPS-Ⅰa 为 29.2 mg ,得率为
54.8%。
2.3　CPS-Ⅰa的纯度鉴定
2.3.1　紫外光谱分析
　　CPS-Ⅰ a 200 ～ 400 nm 紫外光谱如图 3 所
示。
图 3　CPS-Ⅰ a 200 ～ 400 nm 紫外光谱图
　　从图中可以看出 ,在波长 260 nm 和 280 nm
附近 ,均没有明显的核酸(260 nm)和蛋白质
(280 nm)等吸收峰 ,在波长 200 nm 附近 ,有明显
的多糖特征吸收峰。表明多糖 CPS-Ⅰ a 中基本
不存在核酸和蛋白质等杂类物质。
2.3.2　Sephadex G-100凝胶柱层析
　　多糖 CPS-Ⅰ a 经 Sephadex G-100柱层析后
的洗脱液用苯酚-硫酸法测定 ,如图 4所示。
图 4　CPS-Ⅰ a Seophadex G-100 柱层析图
　　结果表明 ,多糖 CPS-Ⅰa 的洗脱峰为单一对
称峰 ,说明该样品纯度较高。
2.4　CPS-Ⅰa的理化性质分析
　　对 CPS-Ⅰ a进行理化性质的基本分析 ,结果
见表 1。
表 1　CPS-Ⅰ a的理化性质
反应类型 CPS-Ⅰ a
物理性状 白色固体
溶解实验 溶于水 , 不溶于乙醇 、丙酮等有机溶剂
苯酚-硫酸反应 阳性 ,含有多糖
蒽铜-硫酸反应 阳性 ,含有多糖
硫酸-咔唑反应 阳性 ,含有醛糖基
茚三铜反应 阴性 ,不含蛋白质
Folin-酚反应 阴性 ,不含蛋白质
碘-碘化钾反应 阴性 ,非淀粉类物质
2.5　红外光谱分析
　　多糖 CPS-Ⅰ a的红外光谱扫描图谱如图5所
示。
图 5　CPS-Ⅰ a在 400 ～ 4 000 cm -1处红外光谱扫描
128 长 春 工 业 大 学 学 报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　第 30 卷
　　对其结果分析 ,见表 2。
表 2　CPS-Ⅰ a的红外光谱分析
波数/cm -1 特征分析
3 400 强宽峰是 O-H 的伸缩振动
2 930 C-H 的伸缩振动 ,糖类的特征吸收峰
1 647 C=O 非对称伸缩振动峰 ,多糖中含有糖醛酸
1 369 磺酸酯的 S=O 伸缩振动
1 024 O-H 的伸缩振动 , 糖类的特征吸收峰
920 吡喃环振动
858 α-D吡喃环葡萄糖特征吸收峰
890 无吸收 ,说明不具有 β 型糖苷键
　　因此得知 ,CPS-Ⅰa 为含有葡萄糖醛酸的α-D
吡喃葡聚糖 ,是一种酸性多糖 。
3　结　论
　　从粪鬼伞液体发酵菌丝体中提取的粗多糖
(CPS)依次经过 DEAE-cellulo se-52 纤维素柱和
Sepharo se-6B柱的分离 、纯化 ,得到主要多糖组分
之一(CPS-Ⅰ a),应用紫外光谱仪 、红外光谱仪对
纯化后的多糖进行纯度和定性研究 。分析结果表
明 ,多糖 CPS-Ⅰ a 是纯度较高的单一组分 ,红外
光谱显示 CPS-Ⅰ a含有α-D吡喃糖苷键和葡萄糖
醛酸 ,说明 CPS-Ⅰa 是一种酸性多糖 。有报道指
出[ 8] ,酸性多糖的药理活性与糖醛酸的含量有关。
　　实验研究表明[ 1] ,得知 CPS-Ⅰ a 对细菌有较
强的抑菌活性 ,对小鼠肝癌细胞有抑瘤作用 ,并可
延长荷瘤小鼠生命。本研究对多糖 CPS-Ⅰ a 仅
做了初步分析 ,为下一步探讨其药理功效提供了
基础资料。但要清楚解析 CPS-Ⅰ a的结构 ,尚待
进一步研究和探讨。
参考文献:
[ 1] 　王　磊 , 邱芳萍.粪鬼伞提取液抗菌活性的研究[ J] .
食品与生物技术学报 , 2008 , 12(5):38-40.
[ 2] 　邱芳萍 ,张　菁 ,解耸林.粪鬼伞深层发酵培养的研
究[ J] .长春工业大学学报:自然科学版 , 2006 , 27
(3):201-203.
[ 3] 　Alicia Prieto , Juan Antonio Leal , Marí a Inmaculada
Gimé nez-Abián , et al.Iso la tion and structural de-
termination o f a unique po ly saccharide containing
manno furano se from the cell wa ll o f the fungus Ac-
ro spermum compressumpoly saccha ride from So la-
num ly ratum Thumb [ J] .Glycoconj J., 2007 , 24:
421-428.
[ 4] 　Daniele Qua ratino , Federico Federici , Maurizio Pe-
tr uccio li , et al.P roduction , purification and pa rtial
characterization o f a novel laccase f rom the w hite-ro t
fungus panus tig rinus[ J] .Antonie van Leeuwen-
hoek , 2007 , 91:57-69.
[ 5] 　杨　开.姬松茸多糖的提取 、纯化和结构分析[ D] :
[ 硕士学位论文] .杭州:浙江工业大学生物与环境
工程学院 , 2003.
[ 6] 　黄　飞 , 梁智群.对山楂叶粗品多糖的分级纯化及
纯度测定研究[ J] .广西轻工业 , 2007 , 2(2):32-34.
[ 7] 　霍光华.波谱在多糖结构分析上的应用[ J] .生命的
化学 , 2002 , 22(2):194-196.
[ 8] 　金春雁.桑叶酸性蛋白多糖(APFM)的分离纯化及
其结构与部分理化性质的研究[ J] .食品科学 , 2007 ,
28(6):43-47.
129第 2 期　　　　　　　　　　 　　　刘洪霞 , 等:粪鬼伞多糖的提纯与定性研究