全 文 ：（总 ） 广西中医药 2015年 2月第 38卷第 1期
基金项目：广西自然科学基金项目（No.2014GXNSFAA118182）；广西卫生厅中医药科技专项（No.GZZJ14-08）；广西高校中药制剂共
性技术重点实验室系统课题（NO.ZJGX201402001）
*通信作者，E-mail：318007460@qq.com
白背叶根含药血清对脂多糖诱导下
RAW264.7细胞分泌的影响
黄卓坚 王志萍 * 夏 星 雷晓翠 王非非 邓裕彦 黄 欢 刘海燕
广西中医药大学 530001 南宁市明秀东路 179号
摘 要 目的：观察不同浓度的白背叶根含药血清对脂多糖（lipopolysac-charide，LPS）诱导下 RAW264.7
细胞分泌的影响。方法：制作高、中、低浓度白背叶根含药血清，以 CCK-8法检测不同浓度白背叶根含药血清对
RAW264.7细胞活力的影响。以脂多糖刺激生长良好的 RAW264.7细胞，建立细胞炎症模型，检测白背叶根含药
血清对细胞上清液中炎症介质一氧化氮（NO）、前列腺素 E2（PGE2）、白三烯 B4（LTB4）、白细胞介素-1β（IL-1β）、
肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响。结果：不同浓度的白背叶根含药血清均对 RAW264.7细胞活力无影响；
与模型组比较，10%、5%的白背叶根含药血清可显著抑制 NO的释放（P<0.05或 P<0.01），10%白背叶根含药血
清可显著抑制 LTB4的分泌（P<0.05），2.5%白背叶根含药血清可显著抑制 IL-1β的分泌（P<0.05）；但不同浓度
的白背叶根含药血清对 PGE2、TNF-α的分泌无显著影响。结论：白背叶根的抗炎机制可能是通过抑制炎症反应
中 NO，LTB4，IL-1β的释放而实现。
关键词 白背叶根；含药血清；RAW264.7细胞；抗炎机制
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1003-0719（2015）01-0062-05
Effect of medicated serum containing the root of Mallotus apelta（Lour.）Muell. Arg. on
secretion activity in LPS-stimulated RAW264.7 cell
Huang Zhuojian Wang Zhiping* Xia Xing，et al
Guangxi university of Chinese Medicine，NO.179，Mingxiu East Road，Nanning，Guangxi 530001，China
Abstract Objective: To observe effect of medicated serum containing the root of Mallotus apelta（Lour.）Muell. Arg.
at different concentration on secretion activity in LPS-stimulated RAW264.7 cell. Methods: The medicated serum
containing the root of Mallotus apelta （Lour.）Muell. Arg. of high，medium and low concentrations were prepared in
order to detect the effect of it on RAW264.7 cell viability by CCK-8 method. LPS was used to stimulate the well-
grown RAW264.7 cells so as to establish cell inflammation model. The effect of medicated serum containing the root
of Mallotus apelta （Lour.）Muell. Arg. on content of inflammatory mediator ［Nitric oxide （NO），prostaglandin E2
（PGE2），leukotriene B4（LTB4），interleukin -1β（IL-1β），tumor necrosis factor -α（TNF-α）］in cell supernatant
was detected in comparison with model group. Results: The medicated serum containing the root of Mallotus apelta
（Lour.）Muell. Arg. at different concentration had no effect on cell viability. Compared with model group，10% and
5% medicated serum containing the root of Mallotus apelta（Lour.）Muell. Arg could inhibit the release of NO obvi－
ously （P<0.05 or P<0.01）；2.5% medicated serum containing the root of Mallotus apelta （Lour.）Muell. Arg. could
inhibit the release the secretion of IL-1β obviously（P<0.05）. However，the medicated serum containing the root of
Mallotus apelta（Lour.）Muell. Arg. at different concentration had no obvious effect on the secretion of PGE2、TNF-α.
Conclusion: The anti-inflammatory mechanism of the root of Mallotus apelta （Lour.）Muell. Arg. is likely to be
·实验研究·
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白背叶根为广西民间常用草
药，系壮药材之一，为大戟科野桐
属 植 物 白 背 木 Mallotus apelta
（Lour.）Muell. Arg.的干燥根。壮医
药理论认为，其性平，微涩、微苦，
具有通谷道、除湿毒、清热毒的作
用。可用于肝炎、脾肿大、降白呆
（带下）、肉扭（淋证）、白冻（泄泻）、
兵嘿细勒（疝气）、火眼、中耳炎、子
宫下垂、脱肛［1］。中医药理论认为，
其性平，味微苦涩，归肝、脾经。具
有清热解毒、收涩消瘀、抗肝纤维
化、降低转氨酶和缩小肝脾的作
用，用于慢性肝炎、肝脾肿大、子宫
脱垂、脱肛、白带、妊娠水肿［2-4］。本
课题组通过前期动物实验也验证
了白背叶根具有抗炎作用［5-6］。但
中药粗提物直接用于体外药理实
验，由于其成分复杂、酸碱度等原
因，有可能会造成一些假阴性和假
阳性的结果出现，如能将中药粗提
物对动物进行灌胃后，取动物的含
药血清用于体外实验，那就比较接
近于药物在人体内环境产生的药
理作用［7］。内毒素诱导的 RAW264.7
细胞模型，被广泛用于研究炎症反
应，RAW264.7 细胞在外部细菌毒
素如 LPS等刺激下，可使细胞炎症
介质和促炎细胞因子的分泌增加。
本课题观察不同浓度的白背叶根
含药血清对 LPS诱导下 RAW264.7
细胞分泌炎症介质和促炎细胞因
子的影响，进一步探讨白背叶根抗
炎作用的机制。
1 实验材料
1.1 细胞株 小鼠 RAW264.7 细
胞株（小鼠单核/巨噬细胞系）购自
南京凯基生物科技发展有限公司。
1.2 动物 昆明种小鼠，18～22 g，
雄性，由广西医科大学实验动物中
心提供，动物许可证号：SCXK2009-
0002。
1.3 试剂 胰蛋白酶-乙二胺四
乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic
Acid，EDTA） 消化液：北京 SO－
LARBIO公司产品；无酚红 RPMI
1640培养液：美国 GIBCO公司产
品；LPS：Sigma 公司产品；胎牛
血清：杭州四季青生物工程研究
所产品；青霉素-链霉素溶液、Cell
Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）及
NO检测试剂盒均购自碧云天生物
技术研究所；小鼠 PGE2酶联免疫
吸附测定法（Enzyme-Linked Im－
munosorbent Assay，ELISA）检测试
剂盒、小鼠 LTB4 ELISA检测试剂
盒、小鼠 IL-1β ELISA 检测试剂
盒、小鼠 TNF-α ELISA检测试剂
盒均购自武汉华美生物工程有限
公司。
1.4 仪器 超净工作台：苏州市
金净净化设备科技有限公司；酶标
仪：美国 EPOCH BIOTEK；CO2培
养箱：日本三洋 MLO-18ATL；低温
离心机：美国 Thermo ST16R.；超纯
水仪：默克密理博明澈-D；光学显
微镜：日本 Olympus CKX41。
1.5 药物 白背叶根采于广西南
宁市郊老虎岭，经广西中医药大学
壮医药学院韦松基教授鉴定为大
戟科野桐属植物白背木 Mallotus
apelta （Lour.）Muell. Arg. 的干燥
根。称取白背叶根粗粉适量，置于
圆底烧瓶中，按料液比 1∶8 加入
50%乙醇，用电热套加热，回流提
取 2次，每次 1 h，过滤，合并滤液，
减压浓缩至无醇味，继续浓缩至浓
度为 2 g/ml 药液［5］，喷雾干燥，得
白背叶根提取物干燥粉，干膏率为
5.82%，再分别加蒸馏水配成所需
的相应浓度。LPS溶液配制：取 LPS
粉末 1 mg，溶解在 10 ml生理盐水
中，制成质量浓度为 100 mg/L的
LPS溶液。临用时用培养液稀释至
相应浓度。
2 方 法
2.1 细胞培养与传代 将小鼠
RAW264.7 巨噬细胞加入到含
10%胎牛血清、100 U/ml青霉素和
0.1 mg/ml链霉素的 RMPI 1640培
养基中，于 5% CO2、37 ℃培养箱中
培养。待细胞生长至 70%～80%融
合，用 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM
EDTA消化液消化后 1∶4传代［8］。
2.2 含药血清的制备 将昆明种
小鼠随机分为空白对照组、白背叶
根组、地塞米松组 3组，每组 20
只。空白对照组以等体积生理盐水
同法灌胃；白背叶根组每次灌胃剂
量为 4.66 g（药粉重）/kg，灌胃体积
为 20 ml/kg，相当于临床成人等效
剂量 13 倍（按体重换算）；地塞米
松组每次灌胃剂量为 2.33 mg/kg，
灌胃体积为 20 ml/kg。各组小鼠每
日均灌胃 3次，每次间隔 4 h，连续
给药 3 d，末次灌胃后 1 h拔眼球
采血，采血前禁食 12 h［9］。所采血
液静置 2 h 后以 3 000 r/min 离心
15 min，分离的血清经 56 ℃恒温
灭活 30 min，0.22 μm滤膜过滤除
菌，-70 ℃冰箱保存备用。
2.3 CCK-8法检测不同浓度白背
叶根含药血清对 RAW264.7 细胞
活力的影响 取对数增长期的细
胞，在 96孔细胞培养板中每孔加
入浓度为 2×105 个/ml 细胞悬液
100 μl，常规培养 24 h 后，分为 7
组：胎牛血清组，空白对照组，LPS
achieved by inhibiting the release of NO、LTB4、IL-1β in the inflammatory reaction.
Key words the root of Mallotus apelta （Lour.）Muell. Arg.；medicated serum；RAW264.7 cell；anti-inflammatory
mechanism
·63·63
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模型组，10%、5%、2.5%白背叶根
含药血清组，地塞米松含药血清
组。胎牛血清组：加入含胎牛血清
的培养基 100 μl，胎牛血清终浓度
为 10%。空白对照组：加入含空白
对照组小鼠血清的培养基 100 μl，
小鼠血清终浓度为 10%。LPS模型
组：加入含空白对照组小鼠血清
（终浓度为 10%）及 LPS（终浓度为
5 μg/ml）的培养基 100 μl。10%白
背叶根含药血清组：加入含白背叶
根含药血清的培养基 100 μl，白背
叶根含药血清终浓度为 10%。5%
白背叶根含药血清组：加入含白背
叶根含药血清的培养基 100 μl，其
中含终浓度为 5%的白背叶根含药
血清及终浓度为 5%的空白对照组
小鼠血清。2.5%白背叶根含药血清
组：加入含白背叶根含药血清的培
养基 100 μl，其中含终浓度为
2.5%的白背叶根含药血清及终浓
度为 7.5%的空白对照组小鼠血
清。地塞米松含药血清组：加入含地
塞米松含药血清的培养基 100 μl，
地塞米松含药血清的终浓度为
10%。每组均设 6个复孔，继续培
养 24 h后，倾去培养基，并用新培
养基洗涤细胞 2次，然后每孔加入
含 10%胎牛血清的培养基 200 μl
和 10 μl的 CCK-8溶液，设溶剂对
照孔（加入 10%胎牛血清的培养基
200 μl 和 10 μl 的 CCK-8 溶液，
无细胞），放置培养箱孵育 1.5 h，
用酶标仪于 450 nm 处测定吸光
度。细胞活力 A（%）=（空白对照
组或用药组吸光度值-溶剂孔吸光
度值）/ （胎牛血清组吸光度值-溶
剂孔吸光度值）×100 %；细胞活力
B（%）=（用药组吸光度值-溶剂孔
吸光度值）/（空白对照组吸光度
值-溶剂孔吸光度值）×100 %。
2.4 不同浓度白背叶根含药血清对
RAW264.7 细胞分泌 NO，LTB4，
IL-1β，PGE2，TNF-α的影响 取对
数增长期的细胞，在 96孔细胞培养
板中每孔加入浓度为 2×105个/ml
细胞悬液 100 μl，常规培养 24 h
后，分为 6组：空白对照组，LPS模
型组，10%、5%、2.5%白背叶根含
药血清+LPS组，地塞米松含药血清+
LPS组。空白对照组：加入含空白
对照组小鼠血清的培养基 100 μl，
小鼠血清终浓度为 10%；LPS模型
组：加入含空白对照组小鼠血清
（终浓度为 10%）及 LPS（终浓度为
5 μg/ml）的培养基 100 μl；10%白
背叶根含药血清+LPS组：加入含
白背叶根含药血清（终浓度为
10%）及 LPS（终浓度为 5 μg/ml）的
培养基 100 μl；5%白背叶根含药
血清+LPS组：加入含白背叶根含药
血清及 LPS的培养基 100 μl，其中
含终浓度为 5%的白背叶根含药血
清及终浓度为 5%的空白对照组小
鼠血清，LPS的终浓度为 5 μg/ml；
2.5%白背叶根含药血清+LPS 组：
加入含白背叶根含药血清及 LPS
的培养基 100 μl，其中含终浓度为
2.5%的白背叶根含药血清及终浓
度为 7.5%的空白对照组小鼠血
清，LPS的终浓度为 5 μg/ml；地塞
米松含药血清+LPS组：加入含地
塞米松含药血清及 LPS 的培养基
100 μl，地塞米松含药血清终浓度
为 10%、LPS的终浓度为 5 μg/ml。每
组均设 6个复孔，继续培养 24 h后
吸取孔内液体，于 2～8℃ 1 000 r/min
离心 10 min，取上清液用于检测。细
胞上清液中 NO的检测采用 Griess
法，LTB4，IL -1β，PGE2，TNF -α 的
检测采用 ELISA法，具体操作见试
剂盒说明书。
3 结 果
3.1 不同浓度白背叶根含药血清
对 RAW264.7细胞活力的影响 结
果见表 1。
表 1结果显示，空白对照组、
LPS 模型组、不同浓度的白背叶
根含药血清（10%、5%、2.5%）组、
地塞米松含药血清组作用于
RAW264.7细胞株 24 h后，吸光度
均大于胎牛血清组，表明小鼠血清
表 1 不同浓度白背叶根含药血清对 RAW264.7细胞活力的影响 （x±s，n=6）
组 别 血清含量 吸光度 细胞活力 A（%） 细胞活力 B（%）
胎牛血清组 10%胎牛血清 0.62±0.07 — —
空白对照组 10%空白对照组小鼠血清 0.70±0.07 120 —
LPS模型组 10%空白对照组小鼠血清 0.79±0.05① 142 119
10%白背叶根含药血清组 10%白背叶根含药血清 0.70±0.09 118 98
5%白背叶根含药血清组
5%白背叶根含药血清+5%空白
对照组小鼠血清
0.78±0.11 140 117
2.5%白背叶根含药血清组
2.5%白背叶根含药血清+7.5%
空白对照组小鼠血清
0.85±0.10① 155 129
地塞米松含药血清组 10%地塞米松含药血清 0.71±0.07 122 101
注：与胎牛血清组比较，①P<0.05
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表 2 不同浓度白背叶根含药血清对 RAW264.7细胞分泌 NO，LTB4，IL-1β，PGE2，TNF-α的影响 （x±s，n=6）
组 别 血清含量 NO（mmol/L） LTB4（pg/ml） IL-1β（pg/ml） PGE2（pg/ml） TNF-α（pg/ml）
空白对照组 10%空白对照组小鼠血清 5.33±0.30 18.52±11.12 6.27± 4.02 1.63±0.14 28.67±4.53
LPS模型组 10%空白对照组小鼠血清 6.71±0.69② 198.34±98.57② 50.90±17.60① 4.51±0.28② 85.03±4.86②
10%白背叶根含药
血清+LPS组
10%白背叶根含药血清 5.38±0.33④ 96.09± 8.20②③ 35.95±18.08 4.37±0.09② 83.33±8.88②
5%白背叶根含药
血清+LPS组
5%白背叶根含药血清+5%
空白对照组小鼠血清
5.76±0.67③ 114.50±50.08② 48.34±36.95 4.44±0.12② 84.89±3.36②
2.5%白背叶根含
药血清+LPS组
2.5%白背叶根含药血清+
7.5%空白对照组小鼠血清
5.82±0.24 134.32±33.41② 20.88± 3.11①③ 4.44±0.31② 80.66±7.23②
地塞米松含药血
清+LPS组
10%地塞米松含药血清 5.60±0.15④ 45.24±15.46①④ 18.24± 7.84③ 4.22±0.08②③ 77.55±3.14②③
注：与空白对照组比较，①P<0.05，②P<0.01；与 LPS模型组比较，③P<0.05，④P<0.01
代替胎牛血清培养细胞并未引起
细胞活力降低。其中 LPS模型组、
2.5%白背叶根含药血清组与胎牛
血清组比较，有显著性差异（P<
0.05）。但与空白对照组相比，各组
吸光度无显著性差异，表明以上各
组对细胞活力的影响无显著性差
异，不同浓度的白背叶根含药血清
对细胞无毒性。
3.2 不同浓度白背叶根含药血清
对 RAW264.7细胞分泌 NO，LTB4，
IL-1β，PGE2，TNF-α的影响 结果
见表 2。
表 2结果显示：LPS模型组在
给予 5 μg/ml LPS 刺激 24 h 后，
NO水平显著增加，与空白对照组
比较具有显著性差异（P＜0.01）；
10%、5%白背叶根含药血清及地塞
米松含药血清均能显著降低 LPS
刺激引起的 NO分泌，与 LPS模型
组比较有显著性差异（P<0.05 或
P<0.01）。与空白对照组比较，LPS
模型组 LTB4含量显著增加，差异
具有显著性意义（P＜0.01）；10%白
背叶根含药血清、地塞米松含药血
清均能显著降低 LPS 刺激引起的
LTB4分泌，与 LPS模型组比较有
显著性差异（P<0.05或 P<0.01）。与
空白对照组比较，LPS 模型组中
IL-1β 含量显著增加（P<0.05）；
2.5%白背叶根含药血清、地塞米松
含药血清均能显著降低 LPS 刺激
引起的 IL-1β分泌，与 LPS模型组
比较有显著性差异（P<0.05）。LPS
模型组在给予 5 μg/ml LPS 刺激
24 h后，PGE2及 TNF-α含量均显
著增加，与空白对照组比较具有显
著性差异（P＜0.01）；与 LPS模型组
比较，地塞米松含药血清能显著降
低 LPS刺激引起的 PGE2及 TNF-α
的分泌（P<0.05）。
4 讨 论
脂多糖（LPS）即革兰氏阴性菌
内毒素，是革兰氏阴性细菌的细胞
壁组成成分，也是引发机体炎症的
重要物质。LPS作用于细胞膜受体
后，单核巨噬细胞被激活，炎症介
质合成和释放将增加。体内产生的
大量 NO具有促炎作用，表现为促
进血管扩张，增强血管通透性和细
胞毒性作用［10］。NO参与了人类多
种疾病的发生，在败血症、呼吸衰
竭、慢性病贫血、关节炎等已观察
到 NO过量产生［11］。LTB4对白细
胞有强烈的化学趋化性作用，使其
向炎症灶内集聚，由于白细胞的大
量增加，进而对组织形成破坏性的
损伤；LTB4 还可使白细胞产生超
氧化阴离子自由基，脱颗粒以及释
放溶酶体内的酶（包括溶酶体酶与
少葡糖昔酸酶等），从而损伤炎症
灶组织细胞［12］。IL-1β是最重要的
炎症细胞因子之一，它介导了炎症
的重要过程，大量产生时引起发热
和恶病质。PGE2是一种极其重要
的脂质代谢产物，在受到生理或病
理的各种刺激时可以介导因炎症
引起的痛觉、过敏；参与受抗原刺
激的肥大细胞脱颗粒的过程，这一
过程会引起细胞因子的释放并导
致炎症反应的增强［13］。TNF-α是
由被激活的单核/巨噬细胞产生的
一种内源性多向性蛋白因子 ［14］，
可使粘附的中性粒细胞产生呼吸
爆发，并同时促进其他多种促炎细
胞因子的表达。
NO，PGE2，LTB4，IL-1β及TNF-α
为目前研究较多的炎症介质靶点，
本研究观察白背叶根含药血清对
以上炎症介质分泌的影响，进而研
究白背叶根的抗炎作用机制。结果
显示，10%、5%的白背叶根含药血
清能显著抑制 NO的分泌，10%的
白背叶根含药血清能显著抑制
LTB4 的分泌，2.5%的白背叶根含
药血清能显著抑制 IL-1β的分泌，
但不同含量的白背叶根含药血清
均不能抑制 PEG2及 TNF-α 的分
泌，故推测白背叶根可能是通过抑
·65·65
（总 ） 广西中医药 2015年 2月第 38卷第 1期
基金项目：广西中医药管理局资助项目（编号：GZZC1009）
*通信作者，E-mail：Kyang_11@hotmail.com
飞机草为菊科植物飞机草
Eupatorium odoratum L.的全草，又
名香泽兰，分布在我国南方大部分
地区，常见于山坡、旷野、路旁。飞
机草具有散瘀消肿、解毒、止血、消
毒等功效，主治跌打肿痛、疮疡肿
毒、稻田性皮炎、无名肿毒等［1］。
国内外学者已经对其成分 ［2-6］、药
理作用［7-9］和毒理［10］做了初步研
究，但未见免疫功能方面的报道。
本文就其对正常小鼠巨噬细胞吞
噬功能和对免疫器官脏器指数的
影响进行初步研究，报道如下。
1 实验材料
1.1 试药与试剂 飞机草于 2011
年 8月采自南宁市郊，经广西中医
药大学中药学教研室冼寒梅教授
鉴定为菊科植物飞机草 Eupatori－
um odoratum L.的地上部分；盐酸
左旋咪唑片（山西太原药业有限公
司，批号：071002）；印度墨水（北京
市西中化工厂，批号：020524）；石
油醚、乙酸乙酯均为化学纯（中国
飞机草不同提取物对正常小鼠
免疫功能的影响
颜 欣 刘一瑾 梁 智 刘 颖 杨 柯 *
广西中医药大学 530001 南宁市明秀东路 179号
摘 要 目的：研究飞机草不同提取物对正常小鼠免疫功能的影响。
方法：按照不同提取法得到飞机草 4个提取物（生榨汁、石油醚部位、乙酸
乙酯部位、水层部位），将小鼠随机分成空白对照组、阳性对照组、飞机草
不同提取物高、中、低剂量组，以碳粒廓清指数（K）、校正廓清指数（α）评
价巨噬细胞吞噬功能，以脏器指数评价对免疫器官重量的影响。结果：飞
机草生榨汁和水层部位均能显著提高正常小鼠的 K值和 α值（P<0.05或
P<0.01），石油醚部位能显著提高正常小鼠的 α值（P<0.05），乙酸乙酯部
位对 K值和 α值均无显著性影响（P>0.05）；对脏器指数的影响结果表
明，水层部位高、中剂量组能显著降低肝、脾指数（P<0.01），乙酸乙酯部位
高剂量组能显著降低脾、胸腺指数（P<0.01），石油醚部位中、低剂量组能
显著降低胸腺指数（P<0.05），而生榨汁对肝、脾和胸腺指数均无显著性影
响（P>0.05）。结论：飞机草生榨汁和水层部位能增强正常机体巨噬细胞吞
噬功能，提示飞机草提高巨噬细胞吞噬功能的有效成分可能集中在水溶
性部分；生榨汁对脏器指数无显著影响，而经加热回流提取再萃取的水层、
石油醚、乙酸乙酯部位具有不同程度降低肝、脾、胸腺脏器指数的作用。
关键词 飞机草；免疫功能；巨噬细胞；吞噬功能；脏器指数
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
文章编号：1003-0719（2015）01-0066-03
制 NO、LTB4及 IL-1β来发挥抗炎
作用。
参考文献
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（2014－09－20 收稿/编辑 陈明伟）
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