全 文 ：粉萆薢中皂甙元含量测定方法的研究
费洪荣1 , 　朱　玮2 , 　张　檀1
(1.西北农林科技大学 林学院 , 陕西 杨陵 712100;2.西北农林科技大学 生命科学学院 , 陕西 杨陵 712100)
摘　要:对粉萆薢皂甙元的含量测定方法进行了研究 ,确定了紫外-可见分光度法测定薯蓣皂
甙元的最佳显色剂 、稳定时间和最大吸收波长;紫外-可见分光光度法测定粉萆薢粗皂甙中薯
蓣皂甙元的含量及薄层层析检验结果表明 ,用 2 mol/L的盐酸水解 2 h ,效果较好;紫外-可见
分光光度法用于测定粉萆薢中薯蓣皂甙元含量 ,专属性及稳定性好 ,用该法测得 3批粉萆薢药
材薯蓣皂甙元含量为 1.23%～ 1.61%。
关键词:薄层层析;含量测定;紫外-可见分光光度
中国分类号:Q943.31　　文献标识码:A　　文章编号:1001-7461(2003)03-0076-03
Studies on the Method of Determining Diosgenin Content in Dioscorea collettii
FEI Hong-rong1 , 　ZHUWei2 , 　ZHANG Tan1
(1.College of Forestry , NW Sci-Tech Univ of Agr and For., Yangling , Shaanxi 712100, China;2.College of Life Sciences
NW Sci-Tech Univ of Agr.and For., Yangling , Shaanxi 712100 , China)
Abstract:Methods of determining diosgenin content in Dioscorea collettii were proped into in the paper.The best chro-
mogenic agent , steady time and the largest absorbent wavelength were selected.When hydrolyzed by 2 mol/L hydrochlo-
ric acid , the diosgenin content was the highest , which was tested by spectrophotometry and thin-layer chromatography;
When spectrophotometry method was used good monoproperty and high stability could be got.The diosgenin content in
three batches of medicinal meterials , determined in this method , was 1.23%～ 1.61%.
Key words:thin-layer chromatography;content determination;spectrophotometry
　　粉萆薢为薯蓣科植物粉背薯蓣(Dioscorea collet-
tii var.hypolauca(Palibin))的干燥根茎 ,具有利湿祛
浊 、祛风除痹之功效 ,是一种重要的中药材[ 1] 。据报
道[ 2] ,粉萆薢中主要成分为甾体皂甙 ,因其薯蓣皂甙
元含量高 ,在某些地区将粉萆薢作为薯蓣皂甙元的
来源之一。中国药典仅对其药材鉴别作了描述 ,并
未提供含量测定方法 。因此 ,本文对粉萆薢薯蓣皂
甙元含量测定方法作了研究 ,旨在为该药材开发利
用提供依据。
1　材料
1.1　仪器
UV 2102-紫外可见分光光度计 、FR-980型生
物图象分析系统 。
1.2　试样
粉萆薢饮片(厚 2 ～ 4 mm)购自西安同仁堂大
药 房 , 产 地 浙 江 (批 号:20011023 20011025
20011027)。
1.3　试剂
薯蓣皂甙元对照品(中国药品生物制品检定
所),高氯酸(天津化学试剂厂 分析纯),其它试剂亦
均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　粗皂甙的制备
称取试样饮片 10 g ,加入 100 mL 70 %乙醇于
85℃恒温水浴中回流 2次(2 h/次),减压过滤 ,合并
提取液并浓缩至约20 mL ,用20 mL水饱和的正丁醇
萃取 3次 ,合并萃取液 ,减压浓缩至浸膏状 ,最后真
空干燥得粗皂甙。
西北林学院学报　2003 , 18(3):76 ～ 78
Journal of Northwest Forestry University
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
繱收稿日期:2002-08-23
作者简介:费洪荣(1977-),女 ,山东日照市人 ,硕士 ,从事于植物化学方面的研究工作。
2.2　对照溶液制备
精密称取薯蓣皂甙元对照品 1 mg ,用氯仿溶解
并定容至 10 mL ,备用。
2.3　显色剂的选择
根据文献报道[ 4 ,5] ,本实验分别用 90 %硫酸 、
醋酐-浓硫酸 、香草醛-冰醋酸和高氯酸作为显色
剂 ,以对照溶液为样品 ,依照乔春峰等的方法[ 5] ,用
紫外-可见分光光度法测定薯蓣皂甙元的含量。结
果表明 ,用 90 %硫酸显色 ,干扰大 ,且不稳定;醋酐
-浓硫酸显色后扫描无吸收峰;香草醛-冰醋酸显
色 ,试剂易挥发 ,稳定性差;而用高氯酸显色稳定时
间约 1 h ,显色效果好 。因而 ,本实验选用高氯酸作
为显色剂 。
2.4　最大吸收波长的确定
按乔春峰等的方法[ 5] ,精密吸取对照品溶液 1
mL于具塞试管中 ,水浴挥干氯仿 ,各加入 10 mL 高
氯酸于70℃水浴 15 min ,流水冷却 ,30 min后以高氯
酸为空白 ,在 200 ～ 600 nm 波长范围扫描(图 1)。
图 1　高氯酸显色后的对照品在 200 ～ 600 nm
波长范围扫描曲线
Fig.1　Scaning curve between 200～ 600 nm of control
developed by perchloric acid
从图 1可以看出 ,以高氯酸作为显色剂 ,用紫外
-可见分光光度法测定薯蓣皂甙元的最大吸收波长
为406 nm 。
2.5　显色时间对吸光值的影响
精密吸取 1 mL对照品氯仿溶液 2份 ,按 2.4中
所述方法显色 ,于不同显色时间分别测其吸光度 ,重
复3次 ,取平均值(表 1)。
表 1　样品显色的稳定性
Table 1　Stability of sample developed by perchloric acid
时间
/min 10 20 30 40 50 60 70 80
样 1 0.350 0.349 0.352 0.350 0.347 0.345 0.338 0.331
样 2 0.348 0.351 0.348 0.348 0.347 0.346 0.341 0.335
均值 0.349 0.350 0.350 0.349 0.347 0.346 0.340 0.333
由以上结果可知 ,样品显色后在 1 h 之内稳定
性良好 。
2.6　标准曲线绘制
精密吸取对照液 0.3 、0.5 、0.7 、0.9 、1.0 mL 于
具塞试管中 ,挥干氯仿 ,照 2.4中所述的方法显色 ,
显色 30 min后 ,于 406 nm波长下测定 。结果表明 ,
吸光度与浓度呈良好的线性关系 。线性回归方程 y
=1.480 8 x+0.01(R=0.999 8)
2.7　粗皂甙水解条件的选择
精密称取粗皂甙 0.102 6 、0.101 1 、0.101 5 、
0.101 0 g ,分别用 1 、1.5 、2 、2.5 mol/L的盐酸水解 2
h ,水解后用氯仿萃取 3次 ,合并萃取液并定容到 50
mL的容量瓶中 。
分别吸取 1 mL 上述水解液于 2只具塞试管中
挥干氯仿 ,加入 10 mL高氯酸 ,按 2.6中所述的方法
测定吸光度 ,每个待测液重复测定3次 ,每种水解液
取 2份待测液吸光度的平均值(表 2)。
表 2　不同水解条件下粗皂甙中薯蓣皂甙元的含量
Table 2　Diosgenin content under diff erent hydrolysis condition
盐酸的浓度/mol·L-1 1 1.5 2 2.5
皂甙元的含量/ % 5.02 8.92 15.71 15.80
分别量取上述 4种不同浓度的盐酸水解液各
20 mL于 80℃水浴均浓缩至 5 mL ,另取薯蓣皂甙元
对照品 1 mg溶解于 1 mL氯仿中。用定量毛细管分
别吸取上述浓缩液及对照液各 0.05 mL分别点于同
一硅胶G板(10 cm×20 cm)上 ,用展开剂 Ⅰ氯仿∶丙
酮(90∶10)和展开剂Ⅱ苯∶乙酸乙酯∶石油醚(4∶1∶1)
2种展开剂分开 ,挥干展开剂后喷以 10 %的硫酸乙
醇显色 ,于 105℃烘箱中烘约 10 min即呈现红色 ,取
出约1 h后 ,变为黄绿色(图 2 、3)。
图 2　粗皂甙水解液用展开剂 I展开结果
Fig.2　Result of expanding hydrolyzed coarse
saponin solution in expanding detergent 1
77第 3 期　　　　　　　　　　　　　　费洪荣等　粉萆薢中皂甙元含量测定方法的研究　　　　　　　　　　　　　　　
图 3　粗皂甙水解液用展开剂 II展开结果
Fig.2　Result of expanding hydrolyzed coarse
saponin solution in expanding detergent II
由表 2和图 2 、图 3的结果可知 , 2 mol/L 和 2.5
mol/L盐酸水解的粗皂甙薯蓣皂甙元斑点较 1 mol/L
、1.5 mol/L的盐酸水解样品效果明显 ,并且皂甙元
的含量也高 ,但是 2.5 mol/L 的盐酸水解液中含有
黑色的絮状悬浮物 ,可能是因为水解条件太剧烈 ,少
数糖碳化所致 。又因为 2 mol/L 和 2.5 mol/L 盐酸
水解液皂甙元含量测定值相差不大 ,所以我们选用
2 mol/L 的盐酸来水解粗皂甙 。
2.8　加样回收率试验
精密称取粉萆薢 5.145 0 、4.998 1 、5.046 4 、
5.013 4 、4.982 1 g(批号:20011027 含量为 1.57
%),分别加入 0.5 mL 对照溶液(0.1 mg/mL),依法
制备供试液 ,并测定吸收度 ,计算加样回收率 ,其平
均回收率为99.05 %。
2.9　三批药材薯蓣皂甙元含量测定
精密称取 3 批 药材样品 (批号:20011023
20011025 20011027)每批重复测定5次 ,每次称取10
g 药材饮片 ,按 2.1中所述的方法制备粗皂甙 ,真空
干燥后称重。称取粗提物0.1 g ,用 2mol/L盐酸 ,照
2.7中所述的方法水解并定容至 50 mL ,按2.6所述
的方法测定吸光度 ,每个待测液重复测定3次 ,取平
均值。每批样品 5次测定的平均值见表 3。
表 3　粉萆薢中薯蓣皂甙元的含量
Table 3　Diosgenin content in three batches
药材批号 20011023 20011025 20011027
含量/ % 1.61 1.23 1.57
RSD/ % 0.82 1.53 1.38
从表 3测定结果可知 ,粉萆薢中薯蓣皂甙元含
量为1.23%～ 1.61%。
3　结论
紫外-可见分光光度法测定薯蓣皂甙元的最佳
条件是:用高氯酸作为显色剂 ,稳定 30 min左右(不
超过60 min),最大吸收波长为 406 nm。
经紫外分光光度法测定粉萆薢粗皂甙水解液中
薯蓣皂甙元含量及薄层层析法检验 ,用 2 mol/L 盐
酸水解 2 h ,效果较好 。这是由于甾体皂甙水解困
难 ,需用一定强度的酸在剧烈的条件下才能水解完
全 。
紫外分光光度法测定薯蓣皂甙元含量 ,专属性
及稳定性好 ,其机理是薯蓣皂甙元 3位羟基脱水与
5位双键形成共轭体系而产生吸收。用该法测得 3
批粉萆薢药材薯蓣皂甙元含量为 1.23%～ 1.61%。
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会.《中华人民共和国药典》一部[ M] .北京:化
学工业出版社 , 2000.
[ 2] 　赵维良 ,奚镜清.浙江产薯蓣属萆薢组药材的化学成分综述
[ J] .现代应用药学 , 1988 , 5(1):38-43.
[ 3] 　赵维良 ,奚镜清.浙江省薯蓣属萆薢组药材的化学鉴定[ J] .浙
江药学 , 1986 , 3(6):10-14.
[ 4] 　陈东生 ,吕永宁 ,吕翼 ,等.菝葜总甾体皂甙元的含量测定[ J] .
中药材 , 2001 , 24(2):111-113.
[ 5] 　乔春峰 ,檀爱民 ,董辉 ,等.国产闭鞘姜属植物中薯蓣皂甙元的
含量测定[ J] .中国药科大学学报 , 2000 , 31(2):156-158.
78　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　西北林学院学报 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　18 卷