全 文 ：3 讨论
通过药效学实验进行各部分提高机体免疫力作
用药理活性的比较，找到优势药效部分为水部分，这
可能是黄芪中极性较大的水部分含有各类黄芪多
糖，可提高机体免疫力，在碳粒廓清实验中，水部分
组吞噬指数最大，提高免疫力的能力最强。
对 10 批黄芪药材水部分进行了 HPLC 分析，对
提取方法、流动相及洗脱梯度、检测波长等色谱条件
进行了优化，构建了黄芪药材该提取部分 HPLC 指
纹图谱，并标定了腺苷指纹峰的结构。
用灰关联度的分析方法研究指纹图谱和药效之
间的关系，表明指纹图谱中各个峰所代表的化学成
分与提高机体免疫力作用具有一定关联(关联度 ＞
0. 60) ，说明黄芪水部分的提高机体免疫力作用是
其内“化学成分群”共同作用的结果。
参 考 文 献
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收稿日期:2012-05-25
基金项目:科技部“十二五”重大新药创制(2011ZX09102-007-03) ;广东省科技厅科技计划项目(2010B030700044，2011A030100013) ;2010
年广东省教育厅高层次人才资助项目;广州市科技局科技计划项目(12A062131631)
作者简介:范华倩(1987-) ，女，在读硕士研究生，主要从事中药及复方药理和毒理研究;Tel:13533260726，E-mail:qianfanhua@ 126. com。
* 通讯作者:唐春萍，Tel:13660762438，E-mail:tchp66@ 163. com。
香鳞毛蕨不同提取液体外抗真菌作用研究
范华倩，沈志滨，陈艳芬，吴洁莹，杨超燕，梁万年，唐春萍*
(广东药学院中药学院，广东 广州 510006)
摘要 目的:对香鳞毛蕨不同提取液进行体外抗真菌试验，筛选其有效部位。方法:采用回流提取方法，用不
同极性的溶剂对香鳞毛蕨进行提取，分为水、95%乙醇、石油醚和乙醚四种提取液，并测定其总间苯三酚的含量;通
过纸片琼脂扩散法和试管内药基法研究不同提取液对临床常见的 4 种皮肤癣菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀
菌浓度(MFC) ，评价其体外抑菌效果。结果:香鳞毛蕨不同提取液的总间苯三酚含量依次为:95%乙醇提取液 ＞水
提取液 ＞乙醚提取液 ＞石油醚提取液;香鳞毛蕨不同提取液对所选菌种都具有一定的抗真菌作用，其体外抗真菌
强度为:95%乙醇提取液 ＞水提取液 ＞乙醚提取液 ＞石油醚提取液。结论:香鳞毛蕨 95%乙醇提取液的总间苯三
酚含量最高，体外抑菌活性最强，提示香鳞毛蕨抗真菌的有效部位为 95%乙醇部位。
关键词 香鳞毛蕨;含量测定;体外抗真菌作用
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)12-1981-05
Study on Antifungal Susceptibility of Different Extract of Dryopteris fragrans
FAN Hua-qian，SHEN Zhi-bin，CHEN Yan-fen，WU Jie-ying，YANG Chao-yan，LIANG Wan-nian，TANG Chun-ping
(Department of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China)
Abstract Objective:To examine the antifungal effect of different extract of Dryopteris fragrans(L.)Schott. in vitro，and screen the
effective fraction from those extracts. Methods:Separated the Dryopteris fragrans extract and got four parts by refluxing extraction，and
determined the contents of total phloroglucinol. Disc agar diffusion method and solid agar dilution method were used to determine inhib-
itory effect. Minimum inhibitory concentration (MIC)and minimal fungicidal concentration (MFC)of different parts of Dryopteris fra-
grans extract against four strains of common clinical dermatophytes were investigated. Results:The data showed that the contents se-
quence of total phloroglucinol was in the following order:95% -ethanol extract ＞ water extract ＞ diethyl ether extract ＞ petroleum ether
extract，and the antimicrobial activities against the four dermatophytes were as following order:95% -ethanol extract ＞ water extract ＞ di-
·1891·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 12 期 2012 年 12 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.12.032
ethyl ether extract ＞ petroleum ether extract. Conclusion:The contents of total phloroglucinol in 95% -ethanol extract of Dryopteris fra-
grans is the highest，and the antifungal activity against dermatophytes in vitro is the strongest. The effective fraction of Dryopteris fra-
grans is the 95% -ethanol extract.
Key words Dryopteris fragrans(L.)Schott.;Quantitative determination;Antifungal effect in vitro
香鳞毛蕨 Dryopteris fragrans(L. )Schott. 是鳞毛
蕨科鳞毛蕨属植物，植物略具香味，故称香鳞毛蕨。
广泛分布于我国东北、华北各省，俄罗斯、日本、朝鲜
以至欧洲、北美亦都有分布〔1〕。民间验方利用香鳞
毛蕨已有几十年的历史，证实香鳞毛蕨对老年性皮
肤瘙痒、各种皮肤病的治疗效果显著〔2〕。研究发
现，香鳞毛蕨具有显著的抗皮肤癣菌作用〔3，4〕。
为进一步明确香鳞毛蕨化学成分与药效之间的
相关性，本文通过化学分离方法，用不同极性的溶剂
对香鳞毛蕨进行回流提取，分为水、95%乙醇、石油
醚和乙醚 4 种提取液，并进行含量测定，应用纸片琼
脂扩散法和试管内药基法，对其不同提取液进行体
外抗真菌活性比较，初步筛选香鳞毛蕨抗真菌的有
效部位，为其生产工艺及临床应用提供实验依
据。
1 材料与仪器
1. 1 菌株 红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)、须
癣毛癣菌(T. mentagrophytes)、犬小孢子菌(Microspo-
rum canis)、絮状表皮癣菌(Epidermophyton flocco-
sum) ，均购自中国医学科学院皮肤病研究所(南京)。
1. 2 药物与试剂 香鳞毛蕨采自黑龙江省五大连
池，由哈尔滨商业大学药学院张德连教授鉴定为鳞毛
蕨属植物香鳞毛蕨 Dryopteris fragrans(L.)Schott.;蛋
白胨(OXOID) ;葡萄糖(广州化学试剂厂) ;琼脂(MB-
CHEM) ;达 克 宁 (西 安 杨 森 制 药 有 限 公 司，
110610075) ;绵马酚 BB对照品由本院实验室自制。
1. 3 主要仪器 UV-2450 紫外可见分光光度仪，
天津实验仪器厂;电热恒温培养箱，上海一恒科学仪
器有限公司;超净工作台，苏净集团安泰公司;电热
手提式压力蒸汽灭菌器，上海博讯实业有限公司医
疗设备厂;XSP-10C生物显微镜，上海永享光学仪器
制造有限公司。
2 方法
2. 1 香鳞毛蕨不同提取液的制备 取香鳞毛蕨全
粉 100 g各 4 份，分别加入水、95%乙醇、乙醚、石油
醚各 1 000 mL，回流提取 2 次，每次 2 h。过滤，补足
失重至 2 000 mL，备用。
2. 2 香鳞毛蕨不同提取液的总间苯三酚含量测定
2. 2. 1 标准曲线:精密称取绵马酚 BB 对照品
0. 0038 g 于 25 mL 量瓶中，加 95%乙醇溶解，稀释
至刻度，摇匀。从中分别精密吸取 1、2、3、4、5、6 mL
于 25 mL容量瓶中，精密加入 0. 1%固蓝 B 盐溶液
0. 5 mL，用 95%乙醇稀释并定容至刻度，摇匀，室温
放置 1 h后测定。以光密度 D(λ)为纵坐标，绵马酚
BB对照品的含量 C(mg /mL)为横坐标作图，进行线
性回归。
2. 2. 2 不同提取液的总间苯三酚含量测定:分别
量取香鳞毛蕨不同提取液 1 mL 至 100 mL 容量瓶，
加入固蓝 B 盐溶液 0. 5 mL，定容，浓度为含生药
0. 0005 g /mL，测定紫外光密度值，代入上述标准曲
线求得香鳞毛蕨中总间苯三酚的含量。
2. 3 香鳞毛蕨不同提取液的抗真菌作用
2. 3. 1 香鳞毛蕨不同提取液样品的制备:分别取
香鳞毛蕨不同提取液减压回收至流浸膏状。4 种浸
膏分别用 95%乙醇溶解定容至 50 mL，即得。制得
提取液样品，各提取液均含生药 2 g /mL。阴性对照
液为 95%乙醇溶媒。
2. 3. 2 沙氏琼脂培养基(SDA)的配制:称取蛋白
胨 10 g、葡萄糖 20 g、琼脂 18 g，加入蒸馏水 1 000
mL，摇匀加热煮沸溶解，趁热用 1 mol /L的盐酸溶液
调节 pH 值至 5. 4，分装，121 ℃高压灭菌 20 min，
4 ℃保存，备用。
2. 3. 3 菌悬液的制备:将受试的 4 种皮肤癣菌从
冷藏中取出，培养 10 ～ 14 d 活化。选取已转种活化
的皮肤癣菌受试菌，置于组织研磨器中，再以无菌操
作法加入 0. 85%无菌生理盐水，不断研磨均匀，用
血细胞计数板计数，将菌悬液浓度调节为 1. 0 × 106
～ 6. 0 × 106 CFU /mL。
2. 3. 4 纸片琼脂扩散法抑菌试验〔5〕:用打孔器打
出 6 mm的小圆滤纸片，经压力蒸汽灭菌处理后，置
120 ℃烤 2 h，保存备用。实验时取无菌并干燥的滤
纸片放入小烧杯中，分别向小烧杯中加入适量的药
液，浸泡 10 min，然后将滤纸片平放于清洁的无菌平
皿内，置温箱(37 ℃)中烘干 1 h 或置室温下自然干
燥 24 h后备用。用无菌棉拭子分别蘸取已制备好
的菌液，在管壁内将多余菌液旋转挤去后，均匀涂布
于平板表面，涂布 3 次，每次旋转平板 60 度，最后沿
着平板内缘涂抹一周，盖上皿盖，在室温下干燥 10
min后，用无菌眼科镊子将经过提取物浸润的药敏
片均匀间隔贴于琼脂培养基表面，并轻压纸片，使其
·2891· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 12 期 2012 年 12 月
与培养基接触良好。然后置平板于 28 ℃温箱孵育
7 ～ 14 d 后观察结果，用游标卡尺测量抑菌圈的直
径(mm)大小。
2. 3. 5 试管内药基法抑菌试验〔6，7〕:将香鳞毛蕨
提取液用 95%乙醇溶媒稀释成 9 个浓度梯度，终浓
度分别为含生药 2、1、0. 5、0. 25、0. 125、0. 0625、
0. 03125、0. 015625、0. 0078125 g /mL。取 95%乙醇
和空白琼脂作对照管。将沙氏培养基分装试管，每
支试管 2. 7 mL，在 121 ℃、0. 15 MPa条件下灭菌 20
min。当灭菌培养基冷却至 40 ～ 50 ℃时，以无菌条
件下将香鳞毛蕨提取液和对照液 0. 3 mL，按浓度由
低到高依次加入培养基稀释 10 倍，混匀制成斜面。
每管终体积为 3 mL。将已制备的菌液 100 μL 接种
到含药沙氏斜面培养基和对照管培养基的表面，28
℃孵育 7 ～ 10 d后判读结果。以最低药物浓度无培
养物生长的药基管为 MIC终点。在培养过程中由 2
人在自然光线下通过肉眼判读。结果判定的前提为
阴性对照管培养基清晰，没有杂菌生长，阳性对照管
菌落生长良好，将每管生长情况与对照管作比较，以
最低药物浓度无培养物生长的药基管为 MIC 终点，
该药物浓度即为该药液对该种菌的 MIC值。
2. 3. 6 杀菌试验〔6，7〕:将已制备的并已于 121 ℃、
0. 15 MPa条件下灭菌 20 min 的沙氏液基 3 mL，在
无菌条件下分别倒入试管内药基法抑菌试验无培养
物生长的含药物培养基试管中，用接种环轻刮取培
养基表面，充分振荡后倒入无菌试管中。将冲洗接
种红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌和絮状表皮
癣菌 4 种皮肤癣菌药物培养基的沙氏液基置于 28
℃孵育 7 ～ 10 d 后判读结果。在培养过程中由 2 人
在自然光线下通过肉眼判读。结果判定的前提为阴
性对照管培养基清晰，没有杂菌生长，阳性对照管菌
落生长良好，将每管生长情况与对照管作比较，以最
低药物浓度无培养物生长的液基管为 MFC终点，该
药物浓度即为该药液对该种菌的 MFC值。
3 结果
3. 1 总间苯三酚的标准曲线 以光密度 D(λ)为
纵坐标(y) ，绵马酚 BB对照品的含量(mg /mL)为横
坐标(x)作图，进行线性回归，得回归方程:y =
16. 189x + 0. 0953，R2 = 0. 9995。见图 1。
图 1 香鳞毛蕨中总间苯三酚含量测定标准曲线
3. 2 香鳞毛蕨不同提取液总间苯三酚的含量测定
通过紫外分光光度法对香鳞毛蕨不同提取液总间
苯三酚的含量进行测定。结果如表 1 所示，香鳞毛
蕨中 95%乙醇提取液的总间苯三酚含量最高。
表 1 香鳞毛蕨不同提取液的总间苯三酚含量
提取药液
香鳞毛蕨
水提
取液组
香鳞毛蕨
95%乙醇
提取液组
香鳞毛蕨
乙醚提取
液组
香鳞毛蕨
石油醚提
取液组
光密度 0. 506 0. 722 0. 397 0. 224
总间苯三酚含量
(mg /g) 0. 254 0. 387 0. 186 0. 079
3. 3 香鳞毛蕨各提取液抑菌活性的测定 采用纸
片琼脂扩散法对香鳞毛蕨的不同提取液进行了体外
抑菌活性的初步研究，抑菌试验以红色毛癣菌、须癣
毛癣菌、犬小孢子菌和絮状表皮癣菌为代表菌。抑
菌结果见图 2 和表 2。结果表明:香鳞毛蕨不同提
取液对所选菌种都具有一定的抑制作用，形成抑菌
圈直径范围为 7. 08 ～ 19. 8 mm，其中 95%乙醇提取
液的抑菌作用最明显。
图 2 香鳞毛蕨不同提取液对红色毛癣菌和犬小孢子菌的抑菌圈结果
1. 达克宁阳性对照组 2. 阴性对照组 3. 香鳞毛蕨水提取液组 4. 香鳞毛蕨 95%乙醇提取液组 5. 香鳞毛蕨石油醚提取
液组 6. 香鳞毛蕨乙醚提取液组
·3891·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 12 期 2012 年 12 月
表 2 香鳞毛蕨不同提取液的抑菌圈直径范围(mm)
组别
菌种
红色
毛癣菌
须癣
毛癣菌
犬小
孢子菌
絮状表
皮癣菌
阴性对照组 － － － －
达克宁阳性对照组(μg /mL) 22. 4 15. 6 19. 5 24. 2
香鳞毛蕨水提取液组 8. 96 － 8. 84 8. 22
香鳞毛蕨 95%乙醇提取液组 19. 8 14. 8 18. 2 19. 6
香鳞毛蕨乙醚提取液组 7. 82 － 7. 16 7. 65
香鳞毛蕨石油醚提取液组 7. 75 － 7. 08 7. 27
注:“ －”表示无抑制作用。
3. 4 各提取液的最低抑菌浓度( MIC) 的测定 采
用试管内药基法测定香鳞毛蕨不同提取液的最低抑
菌浓度。结果如表 3 所示，不同提取液，以及不同菌
种对同一提取液呈现不同的敏感，MIC 范围为
0. 125 ～ 1 g /mL。尤其 95%乙醇提取液对皮肤癣菌
有明显的抑菌作用，对红色毛癣菌和絮状表皮癣菌
的 MIC为 0. 125 g /mL。这与纸片琼脂扩散法测试
结果一致。
表 3 香鳞毛蕨不同提取液的最低
抑菌浓度MIC(生药 g /mL)
组别
菌种
红色
毛癣菌
须癣
毛癣菌
犬小
孢子菌
絮状表
皮癣菌
香鳞毛蕨水提取液组 0. 5 0. 25 0. 5 0. 25
香鳞毛蕨 95%乙醇提取液组 0. 125 0. 25 0. 25 0. 125
香鳞毛蕨乙醚提取液组 1 0. 5 0. 5 0. 5
香鳞毛蕨石油醚提取液组 1 1 0. 5 0. 5
达克宁阳性对照组(μg /mL) 0. 25 0. 5 0. 25 0. 125
注:各试验组阳性对照均有菌生长，阴性对照均无菌生长
3. 5 各提取液的最低杀菌浓度( MFC) 的测定 结
果如表 4 所示，香鳞毛蕨 95%乙醇提取液的杀菌活
性最强，对红色毛癣菌的 MFC 为 0. 125 g /mL，对须
癣毛癣菌、犬小孢子菌和絮状表皮癣菌的 MFC 均为
0. 25 g /mL，而水提取液杀菌作用较弱，MFC 最低是
0. 5 g /mL，乙醚和石油醚提取液更弱，MFC最低是 1
g /mL。由此可见，香鳞毛蕨主要杀菌活性成分集中
在 95%乙醇提取液，这与表 3 中结果相符。
表 4 香鳞毛蕨不同提取液的最低
杀菌浓度MFC(生药 g /mL)
组别
菌种
红色
毛癣菌
须癣
毛癣菌
犬小
孢子菌
絮状表
皮癣菌
香鳞毛蕨水提取液组 1 0. 5 0. 5 0. 5
香鳞毛蕨 95%乙醇提取液组 0. 125 0. 25 0. 25 0. 25
香鳞毛蕨乙醚提取液组 ＞ 2 1 1 1
香鳞毛蕨石油醚提取液组 ＞ 2 ＞ 2 1 1
达克宁阳性对照组(μg /mL) 0. 25 0. 5 0. 25 0. 125
4 讨论
香鳞毛蕨是一种重要的药用植物，由于其对皮
肤病具有很好的疗效，逐渐地被人们重视。香鳞毛
蕨的化学成分主要有间苯三酚类、黄酮类以及萜类
等〔8-10〕，具有抗炎〔11〕、镇痛〔12〕和抗肿瘤及免疫调
节〔13〕等多种药理作用，具有极大的开发潜力和应用
前景。
间苯三酚类是鳞毛蕨属植物的主要特征化学成
分，也是产生药理活性的主要成分。大量实验表明
该属植物的抗微生物活性与间苯三酚的含量高存在
密切相关〔14〕。本实验对香鳞毛蕨用不同极性的溶
剂进行提取，将其主要化学组分分成 4 个部分，以总
间苯三酚含量为指标，对香鳞毛蕨的不同提取液进
行测定，结果表明总间苯三酚含量依次为:95%乙醇
提取液 ＞水提取液 ＞乙醚提取液 ＞石油醚提取液。
本试验采用纸片琼脂扩散法和试管内药基法，
选用红色毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌和絮状表
皮癣菌为代表菌，从定性和定量两个角度对香鳞毛
蕨不同提取液的抑菌活性进行了研究。从纸片琼脂
扩散法的结果发现，95%乙醇提取液的抑菌效果最
明显;从试管内药基法测定结果也表明 95%乙醇提
取液的抑菌浓度和杀菌浓度均最低，其 MIC 值和
MFC值均为 0. 125 g /mL。体外药敏试验抑菌效果
强度为:95%乙醇提取液 ＞水提取液 ＞乙醚提取液
＞石油醚提取液。这与总间苯三酚含量测定的结果
相一致，故笔者推测 95%乙醇部位是香鳞毛蕨抗真
菌作用的有效部位。
本试验将中药化学提取分离和含量测定与药理
试验密切结合，方法快捷、简捷，结果可靠，对香鳞毛
蕨不同提取液进行了抗真菌活性研究，证实了 95%
乙醇提取液具有较好的抗真菌作用，为深入研究香
鳞毛蕨醇部位的抗菌活性提供了实验依据，同时也
为香鳞毛蕨的开发利用提供了一定的理论依据。
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收稿时间:2012-05-15
基金项目:河南省科技攻关计划项目(082102310031)
作者简介:方伟进(1987-) ，男，在读硕士研究生，主要从事心血管药理研究;Tel:13928917205，E-mail:fangweijin03@ 126. com。
* 通讯作者:李艳，Tel:13526987576，E-mail:lyhkdly@ 163. com。
山茱萸果核醇提物对大鼠肾性高血压
及心肌肥厚的影响
方伟进1，冯建芳1，路西明1，吕茂平2，曹珊珊1，李瑞芳1，李 艳1* ，李晓明3
(1. 河南科技大学药理学与分子生物学重点实验室，河南 洛阳 471003;2. 国家知识产权局专利审查协作
中心，北京 100083;3. 河南科技大学化工与制药学院，河南 洛阳 471003)
摘要 目的:观察山茱萸果核甲醇提取物对大鼠肾性高血压及其所致心肌肥厚的作用及机制。方法:建立大
鼠肾性高血压(2K2C)模型。将动物分为假手术组、模型组及山茱萸果核醇提物高、低剂量组，每组 10 只。术后 4
w进行药物处理，给药 4 w后测各组大鼠血压及左室体质量指数(LVM /BM)、心肌形态学变化;Western blot检测心
肌组织中 NAD(P)H氧化酶亚基 P47phox、Nox4 的表达情况。结果:模型组大鼠血压及 LVM /BM 显著高于假手术
组，室内压最大上升 /下降速率显著下降;给予山茱萸果核醇提物后，各组大鼠血压及 LVM /BM显著降低，室内压最
大上升 /下降速率显著升高，心肌细胞肥大及纤维化程度显著减弱;模型大鼠 P47phox、Nox4 的蛋白表达较假手术
组显著增加，而山茱萸果核组大鼠左心室 P47phox、NOX4 蛋白表达显著下降，且呈剂量依赖性。结论:山茱萸果核
醇提物具有显著降压作用，并能显著抑制肾性高血压大鼠心肌中 NAD(P)H氧化酶亚基 P47phox和 Nox4 的表达，
这可能是山茱萸果核醇提物改善心脏功能，减缓心肌重构的基础。
关键词 肾性高血压;山茱萸果核醇提物;心肌肥厚;NAD(P)H氧化酶;P47phox;Nox4
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)12-1985-05
Effect of Cornus officinalis Fruit Core Extract on the Cardiac
Hypertrophy Induced by Two Kidney Two Clip
FANG Wei-jin1，FENG Jian-fang1，LU Xi-ming1，LV Mao-ping2，CAO Shan-shan1，LI Rui-fang1，LI Yan1，LI Xiao-ming3
(1. Laboratory of pharmacology and molecular biology，Medical College，Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003，
China;2. Patent Examination Cooperation Center of Patent Office，Beijing 100083，China;3. Chemical and pharmaceutical college，
Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003，China)
Abstract Objective:To observe the effect of Cornus officinalis fruit core extract on cardiac hypertrophy induced by two kidney two
clip(2K2C)and its mechanism. Methods:Male Sprague-Dawley rats were randomly divided into 4 groups:sham-operated group，model
group and treatment groups(300，600 mg /kg). Rats were intragastric administered medicine for 4 weeks from the fourth week after sur-
gery. Sham-operated and 2K2C rats were given vehicle for 4 weeks. Blood pressure and hemodynamic parameters were measured. Left
ventricular weight to body weight (LVM /BM)ratio was calculated. Paraffin-embedded hearts were cut into 5 μm slices，which were
·5891·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 12 期 2012 年 12 月