全 文 ：表 2 各组小鼠血清 IgG抗体检测结果(A值)
组别 免疫前 免疫后 30 d 感染后 45 d
A组 0.492 0.636 1.298
B组 0.528 0.496 1.016
C组 0.489 0.375 1.353
D组 0.482 0.485 1.148
3 讨论
1990年 Wolf等 [ 4]首次报道了小鼠肌内注射质粒
DNA后 ,质粒及其携带的基因可被肌细胞摄取并进行
表达。此后 ,关于核酸疫苗的研究在多个领域中迅速
开展起来。尽管核酸疫苗的提出和尝试仅有十几年时
间 ,但在血吸虫病防治领域已取得了可喜的成果[ 5, 6] 。
笔者在本研究中用已构建好的日本血吸虫脂肪酸结合
蛋白 DNA疫苗 pVIVO2-Sj14FABP联合细胞因子佐剂
pVIVO2-IL-12免疫 Balb/c小鼠 , 与 pVIVO2组相比 ,
实验组与加佐剂组的减虫率和减卵率均有明显的增
高 ,且后者又明显高于前者(P<0.05)。上述结果表
明 ,细胞因子 IL-12能够提高 pVIVO2-Sj14FABP疫苗
抗日本血吸虫感染的保护性免疫力。抗体检测结果表
明 ,各组小鼠免疫后 30 d血清 IgG抗体滴度没有明显
升高 ,推测可能有以下几种原因:①Sj14FABP分子的
免疫原性较弱;②免疫时间较短;③核酸疫苗免疫后可
能主要通过细胞免疫而非体液免疫应答发挥效应。因
此 ,有必要进一步检测小鼠血清中分别代表 Th1 , Th2
免疫应答类型的不同细胞因子及 IgG亚类水平 ,以阐
明核酸疫苗的部分免疫保护机制。本研究结果提示日
本血 吸虫脂肪酸结合蛋白 DNA疫苗 pVIVO2-
Sj14FABP能够在小鼠体内诱导部分保护性免疫力 ,而
细胞因子 IL-12能够增强血吸虫病 DNA疫苗的免疫
保护效果。
[参考文献 ]
[ 1] McManusDP.AvaccineagainstAsianschistosomiasis:the
storyunfolds[ J] .IntJParasitol, 2000, 30(3):265-271.
[ 2] Weeks-LevyC, TatemJM, DiMicheleSJ, etal.Identific-
ationandcharacterizationofanewbasesubstitutioninthe
vaccinestrainofSabin3 poliovirus[ J] .Virology, 1991, 185
(2):934-937.
[ 3] KalinaBH.DNAvaccineforparasiticinfections[ J] .Imm-
unolCellBiol, 1997, 75(3):370-375.
[ 4] WolffJA, MaloneRW, WilliamsP, etal.Directgenetra-
nsferintomousemuscleinvivo[ J] .Science, 1990, 247
(4949):1465-1468.
[ 5] 李柳哲 , 石佑恩 , 江 侃 , 等 .不同载体的日本血吸虫
DNA疫苗诱导小鼠免疫效果的观察 [ J] .华中科技大学
学报(医学版), 2003, 32(1):5-6.
[ 6] ZhuY, RenJ, HarnDA, etal.Protectiveimmunityinduced
with23 000 membraneproteinDNAvaccineofSchistosoma
japonicumChinesestrainininfectedC57BL/6 mice[ J] .J
TropMedPubHealth, 2003, 34(4):697-701.
乌金草化学成分研究＊
陈孟兰 ,阮金兰
(华中科技大学同济医学院药学院 , 武汉 430030)
[摘 要 ] 目的 提取和鉴定乌金草中活性化学成分 。方法 采用硅胶柱色谱和 SephadexLH-20凝胶柱色谱对乌
金草中化合物进行分离得到单体 ,通过理化常数和波谱分析方法鉴定其结构。结果 从乌金草中分离并鉴定 4个化合物:
马兜铃内酰胺Ⅰ、9-甲氧基马兜铃内酰胺Ⅳ、β -谷甾醇 、1-二十八烷醇。结论 4个化合物均为首次从该植物中分离得到。
[关键词 ] 乌金草 ;化学成分;提取分离 ;鉴别
[中图分类号 ] R284.2 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1004-0781(2005)04-0270-03
AStudyoftheChemicalConstituentsofWujincao
CHENMeng-lan, RUANJin-lan(SchoolofPharmacy, TongjiMedicalColege, HuazhongUniversityofScience
andTechnology, Wuhan430030, China)
ABSTRACT Objective ToextractandidentifytheactivechemicalconstituentsofWujincao. Methods Silicagel
columnchromatographyandSephadexLH-20 gelcolumnchromatographywereusedtoseparatetheactivechemicalconstituents
fromWujincao.Thestructuresofthemonomersthusobtainedwereidentifiedwithphysicochemicalandspectrumanalyses.
Results 4activechemicalconstituentswereseparatedfromWujincaoandtheirstructuresidentifiednamedAristololactamⅠ , 9-
methoxyaristololactamⅣ, β-sitosteroland1-octacosanol. Conclusion 4 activechemicalcompoundswereisolatedfromthis
genusforthefirsttime.
KEYWORDS Wujincao;Chemicalconstituent;Extractionandisolation;Identification
(Note:WujincaoisatraditionalChinesemedicine, itbelongstoAsarumcaulescensMaxim.)
·270· HeraldofMedicineVol.24No.4 April2005
乌金草为马兜铃科植物双叶细辛 Asarum
caulescensMaxim.的全草 , 分布于湖北 、陕西 、甘肃等
省 ,具有行气镇痛的功效。鄂西北民间用于治疗胃痛 、
腹痛 、胸胁疼痛等 。有关该植物的研究笔者未见报道。
为了探讨乌金草的药效物质基础 ,笔者对乌金草全草
进行化学成分研究。
1 仪器与试剂
1.1 仪器 显微熔点测定仪 (北京泰克仪器厂);
ZAB-HF-3型质谱分析仪(英国 VG公司);IR-460型红
外光谱仪(日本岛津 , KBr压片);Brucker-400核磁共振
仪(1HNMR400MHz, 13 CNMR150MHz, Brucker公司);
756MC型紫外分光光度仪(上海精密科学仪器公司)。
1.2 试剂 硅胶 (青岛海洋化工厂), Kieselgel60G
(E.Merk公司),硅胶 GF254薄层层析预制板(海洋化
工厂生产),所用试剂均为分析纯 。乌金草采自湖北
省五峰土家族民族自治县 ,由湖北省五峰县药品检验
所周祖海副主任药师鉴定为马兜铃科双叶细辛属植物
乌金草(Asarumcaulescens)。
2 提取分离
乌金草全草 5 kg切段粉碎成粗粉 ,用甲醇渗漉 ,
收集药材 10倍量体积的渗漉液 ,减压浓缩得总提取
物 。总提物用硅藻土拌样 ,干燥 ,上柱 ,依次用石油醚 、
醋酸乙酯 、甲醇洗脱 ,分别回收溶剂得石油醚部位 、醋
酸乙酯部位及甲醇部位。醋酸乙酯部位经反复硅胶柱
层析 ,以氯仿-甲醇梯度洗脱 ,根据薄层色谱(TLC)合
并相同组分 ,经 SephadexLH-20凝胶柱层析进一步纯
化得化合物 Ⅰ(12.7mg)和 Ⅱ (14.0 mg)。石油醚部
位经硅胶柱层析 ,以石油醚-丙酮梯度洗脱 ,得化合物
Ⅲ(250.0mg)和 化合物Ⅳ(200.0mg)。对化合物 Ⅰ 、
Ⅱ 、Ⅲ和Ⅳ进行熔点 、质谱 、红外光谱 、磁共振 、紫外光
谱 、TLC分析。
3 结构鉴定
3.1 化合物 Ⅰ 黄色片状结晶 , 溶于丙酮 、甲醇。
TLC检测紫外灯下为蓝色荧光。分子式 C17 H11NO4。
EI-MSm/z(%):293(M+, 92), 278(100), 263(56),
250(36)。1 H-NMR(DMSO-d6 )δ10.76, 7.66, 6.48,
8.15, 7.51, 7.22 , 4.00, 7.36。其中 δ10.76(1H, s)为
[收稿日期 ] 2004-07-23 [修回日期 ] 2004-09-28
[基金项目 ] ＊湖北省科技攻关项目(基金编号:2002-
AA301C07)
[作者简介 ] 陈孟兰(1972 -), 女 , 湖北武汉人 , 在读硕
士 , 主要从事天然药物活性物质研究。
[通讯作者 ] 阮金兰 , 男 , 教授 , 博士生导师 , 电话:027 -
83691961, E-mail:5952jinlan@hotmail.com。
-CONH-上 H原子 , δ6.48(2H, s)为 -OCH2O-,
δ7.66, 8.15, 7.51, 7.22, 7.36分别为菲环上 2, 5, 6, 7,
9位 -H, δ4.00(3H, s)为 8位 C上所连 -OCH3的 H
信号 。13 C-NMR(DMSO-d6 )δ168.1 , 155.3, 148.9,
147.2, 134.6, 125.8 , 124.9, 124.8, 124.0, 119.3,
118.8, 111.0, 108.3 , 105.8, 103.3, 97.9, 55.9, 通过
DEPT谱可知 δ55.9为 -OCH3 , 125.8, 118.8, 108.3,
105.8, 97.9分别为菲环上 5个 -CH, 103.3为 3, 4位
-OCH2O-上 C信号 , 168.1为 -CONH-的 C信号 ,
其余为季碳的信号。综上分析确定化合物 Ⅰ的结构为
马兜铃内酰胺 Ⅰ (aristololactamⅠ )。该化合物首次从
乌金草提取 ,以上数据与文献 [ 1, 2]基本一致 。
3.2 化合物 Ⅱ 土黄色细针状结晶 ,溶于甲醇 。TLC
检测紫外灯下为亮黄绿色荧光斑点 。分子式C19H15 -
NO6。EI-MSm/z(%):353(M+, 100), 338(32), 323,
310, 295 , 280, 252 , 224。1 H-NMR(DMSO-d6 )δ10.68,
7.60, 6.46, 7.82, 7.16 , 3.94, 3.87 , 3.84,其中 δ10.68
为 -CONH-上 H原子 , 7.60, 7.82, 7.16分别为菲环
上 2, 5, 7位 -H, 6.46(2H, s)为菲环 3, 4 位
-OCH2O-, 3.94, 3.87, 3.84 分 别为 菲环 6 位
-OCH3 , 8位 -OCH3 , 9位 -OCH3的 H信号。13C-NMR
(DMSO-d6 ) δ168.0, 151.6, 149.1, 148.7, 146.7,
141.8, 133.7, 124.9 , 123.1, 120.6, 119.4, 110.9,
105.0, 104.0, 103.4, 98.0, 61.4, 60.8, 55.8, 通过
DEPT谱并结合 HSQC及 H-HCOSY可知 61.4, 60.8,
55.8分别为菲环上 6, 8, 9位 -OCH3取代基的 C信
号 , 105.0, 104.0 , 98.0分别为菲环上 3个 -CH, 103.4
为菲环上 3, 4位 -OCH2O-, 168.0为 -CONH-的 C
信号 ,其余为季碳的信号。综合上述数据分析确定化
合物 Ⅱ 为 9-甲 氧 基 马 兜 铃 内 酰 胺 Ⅳ (9-
methoxyaristolactamⅣ )。该化合物首次从乌金草提
取 ,并与文献 [ 3, 4]报道基本一致 。
3.3 化合物 Ⅲ 白色针晶 , mp:137 ～ 138℃(MeOH),
分子式 C29H50O。 Liebermann-burchard反应阳性 ,提示
其为不饱和甾醇类化合物。 EI-MSm/z:414[ M+ ] ,
396, 330, 329, 273, 255, 138, 120(RDA开裂)为典型的
甾醇类裂解模式 。其与 β -谷甾醇对照品共熔点 、共
TLC,证明为同一化合物。鉴定化合物Ⅲ(β-sitosterol)
为 β -谷甾醇 ,该化合物首次从乌金草提取 。
3.4 化合物Ⅳ 白色粉末 ,溶于石油醚 、氯仿等有机
溶剂中 。mp81 ～ 83℃。分子式 C28H58O。EI-MSm/z:
392(M+ , 18), 364, 350, 336, 322, 308, 279, 265, 237,
209, 181, 167, 153, 139, 125, 111, 97, 83, 69。1 H-NMR
·271·医药导报 2005年 4月第 24卷第 4期
(CDCl3):δ0.89(3H, t), 1.25, 1.56(4H, 多重峰),
3.64(2H, t)根据积分曲线高度之比位移值 1.25处有
48个 H原子 , 为 24个 CH2的叠加峰 , 3.64 处为
-CH2O-的 H信号 。综上分析确定该化合物Ⅳ的结
构为 1-二十八烷醇(1-octacosanol)。该化合物首次从
乌金草提取 。
[参考文献 ]
[ 1] 丛浦珠 , 李笋玉 .天然有机质谱学 [ M] .北京:中国医
药科技出版社 , 2003.385-387.
[ 2] 彭国平 , 楼凤昌 , 赵守训 .管花马兜铃化学成分的研究
[ J] .药学学报 , 1995, 30(7):521-525.
[ 3] PriestapHA.Sevenaristilolactamsfromaristolochiaargen-
tina[ J] .Photochemistry, 1985, 24(4):849-852.
[ 4] PeterJH.Aristolochicacidsandaristolactamsfromaristolo-
chiaauricularia[ J] .Photochemistry, 1990, 30 (1):
253-254 .
脑脊液高浓度铁诱导大鼠
阿尔茨海默病样行为学和病理学的特征性变化＊
李 琳 ,张志华 ,吴建梁 ,靳 峥
(山西医科大学老年医学研究所 ,太原 030001)
[摘 要 ] 目的 研究大鼠脑脊液铁离子浓度增高诱导的阿尔茨海默病(AD)样行为学 、病理学特征性变化。方法
16只 Wistar大鼠随机分为实验组和对照组 ,两组大鼠给予苯巴比妥 40 mg· kg-1 , ip, 大鼠麻醉后 , 实验组 10只大鼠给
予含三氯化铁 52 μg· μL-1的人工脑脊液 10μL, icv,对照组 6只大鼠给予等体积的人工脑脊液 , icv,第 5, 10天重复注射。
用 Marri水迷宫测定行为学改变 , 流式细胞仪检测凋亡细胞 ,免疫组织化学方法染色 Aβ免疫斑块 , 透射电镜下观察超微
结构变化。结果 实验组大鼠平均逃避潜伏时间为(34.67 ±2.82)s, 对照组为(17.79±2.04)s(P<0.01),实验组大鼠
平均逃避潜伏距离(1 122.00 ±3.34)cm, 对照组为(617.00 ±2.51)cm(P<0.01)。实验组凋亡细胞为(14.27 ±
0.40)%, 对照组为(3.20±0.19)%(P<0.01)。淡褐色的 Aβ 免疫斑块广泛散布于实验组大鼠的大脑皮质和海马区。
实验组大鼠神经元突起空泡变性 ,并伴有线粒体变性形成的致密体。结论 大脑局部铁浓度增高可引起 AD样行为学
和病理学特征性改变。
[关键词 ] 铁浓度;阿尔茨海默病;凋亡细胞
[中图分类号 ] R977.9;R965.1 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 1004-0781(2005)04-0272-04
BehavioralandPathologicalChangesCharacteristicofAlzheimer sDisease
InducedbyHighIronConcentrationintheCerebrospinalFluidinRats
LILin, ZHANGZhi-hua, WUJian-liang, JINZheng(InstituteofGeratology, ShanxiMedicalUniversity,
Taiyuan030001, China)
ABSTRACT Objective TostudythebehavioralandpathologicalchangescharacteristicofAlzhemier sdisease(AD)
inducedbyhighironconcentrationinthecerebrospinalfluidinrats. Methods 16adultWistarratswererandomlydividedinto
thetestgroup(n=10)andthecontrolgroup(n=6).Ratsofbothgroupswereanesthetizedbygivinganintraperitonealinjection
of40 mg· kg-1 ofpentobarbitaltoeachanimal.10 ratsofthetestgroupwerethengiveneachaninjectionof10 μLofartificial
cerebrospinalfluid(CSF)containing52 μg· μL-1 offerricchlorideintothelateralventriclesofthebrain.Ratsofthecontrol
groupweregiveneachaninjectionof10 μLofartificialCSFviathesameroute.Theseinjectionswererepeatedonthefifthand
tenthdays.BehavioralchangeswereassayedwiththeMoriswatermazetest.Apoptoticcelsofthemurinecerebralcortexwere
detectedwithflowcytometry, Aβ immuneplaquesstainedwithimmunohistochemicalmethodsandultrastructuralchanges
examinedbytransmissionelectronmicroscopy. Results Theaveragetimesforratsofthetestgroupandcontrolgrouptoreach
theplatformwere(34.67±2.82 )sand(17.79±2.04)s, respectively(P<0.01).Theaveragedistancesforratsofthetest
groupandcontrolgrouptoreachtheplatformwere(1 122.00±3.24)cmand(617.00±2.51)cm, respectively(P<0.01).
Thepercentagesofapoptoticcellsfromratsofthetestgroupandcontrolgroupwere(14.27±0.40)% and(3.20±0.19)%,
respectively(P<0.01).Lightbrown-colouredAβ immuneplaqueswereseenwidelyinterspersedinthecerebralcortexand
hippocampusofratsofthetestgroup.Vacuolardegenerationofneuronalprocessesaccompaniedbydensebodiesformedasa
resultofmitochondriadegenerationwasshowninthebrainoftheratsofthetestgroup. Conclusion Behavioraland
pathologicalchangescharacteristicofADwereinducedinratsbyhighironconcentrationinthecerebrospinalfluidinrats.
KEYWORDS Ironconcentration;Alzheimer sdisease;Apoptosis
·272· HeraldofMedicineVol.24No.4 April2005