全 文 ：收稿日期:2011 － 06 － 14;修回日期:2011 － 07 － 02
作者简介:阳中和(1982 －) ，男，湖南衡阳人，硕士研究生。研究方向:生物活性成分提取与分离。
* 通讯作者:国兴明，教授，硕士生导师。研究方向:天然产物化学。E － mail:gordenguo123@ 163． com
犁头草化学成分研究初报
阳中和1，国兴明2*
(1．贵州大学 生命科学院，贵州 贵阳 550025;2．贵州大学 明德学院，贵州 贵阳 550004)
摘 要:采用柱层析的方法对犁头草的乙醇提取物进行分离提纯，并结合现代波谱技术对分离得到的化合物进行
分析鉴定。结果表明:从犁头草的乙醇提取物中分离得到 9 种化合物:β －谷甾醇(β － sitosterol)、木犀草素(Lute-
olin)、芹菜素(Apigenin)、6，7 － 二羟基香豆素(Esculetin)、7 － 羟基香豆素(7 － Hydroxycoumarin)、齐墩果酸
(Oleanic acid)、咖啡酸(Caffeic acid)、槲皮素(Quercetin)和秦皮甲素(Esculin) ，且 9 种化合物均为首次从该植物
中分离得到。
关键词:犁头草;化学成分;分离纯化
中图分类号:R284. 1;Q949. 759. 2 文献标识码:A 文章编号:1008 － 0457(2011)04 － 374 － 03
Preliminary Study on chemical constituents of Viola japonica Langsd
YANG Zhong-he1，GUO Xing-ming2* (1． Institue of life Science，Guizhou University，Guiyang Ghizhou
550025，China;2． Mingde College，Guizhou University，Guiyang Guizhou 550024，China)
Abstract:The extract of Viola japonica Langsd was isolated and purified by means of silica gel column chro-
matography and identified by spectroscopic experiments． Nine compounds including β-sitosterol，Oleanolicac-
id，7-Hydroxycoumarin;Luteolin，Apigenin，Esculetin，Caffeic acid Quercetin and Esculin were obtained，
which were first found in Viola japonica Langsd．
Key words:Viola japonica Langsl;chemical constituent;isolation and purification
犁头草(Viola japonica Langsd)是堇菜科(Violaceae)堇菜属(Viola)多年生草本植物，又名犁嘴草、如意
草、玉意草、耳钩草，可全草入药［1］，我国东北、华北、东南、西北等地均有分布。《中药志》记载:犁头草性
苦、辛、寒，入心、肝经，为清热解毒、治疮黄肿毒之主药，还有清肠止泻之功效。临床上常用于疮黄肿毒、目
赤肿痛、肠黄作泻、湿热黄疽等症。民间广泛用于治疗跌打损伤、疗疮肿毒、痈疽发背、毒蛇咬伤等［2］。目
前，对于犁头草的化学成分研究报道极少，尤其是对该植物的活性化合物的提取、分离尚未见报道。本研
究首次从犁头草中分离鉴定得到 9 种化合物，其结果可为犁头草的开发应用提供一定的理论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试材料 犁头草(Viola japonica Langsd)全草，采自于湖南省衡阳县，经贵州大学生命科学学院
熊源新教授鉴定为堇菜科堇菜属犁头草。将其晒干、粉碎备用。
1． 1． 2 仪器与试剂 旋转蒸发仪(瑞士 BUCHI公司，型号 R －200) ;显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限
山 地农业生物学报 30(4):374 ～ 376，2011
Journal of Mountain Agriculture and Biology
DOI:10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2011.04.010
公司，型号 X －4) ;1H － NMR，13 C － NMR(德国 BRUKER 公司，型号 DMX － 600) ;EI － MS(美国 HP 公司，
型号 HP －5988A) ;柱层析硅胶 G，200 ～ 300 目及薄层层析硅胶 GF254(青岛海洋化工) ;其余所用试剂均
为分析纯。
1． 2 方法
1． 2． 1 犁头草化学成分提取 将 6． 5 kg 犁头草全草粉用 95%乙醇浸泡，置于常温下 3 d，浸出液过滤，减
压浓缩。80%乙醇提取 2 次，每次浸泡 2 ～ 3 d，滤液减压浓缩，浓缩物合并在一起。残渣再用 75%乙醇浸
泡，反复多次提取至浸出液颜色变浅，浸泡的时间为 3 d /次，滤液减压浓缩，浓缩物与 95%的乙醇浸提液浓
缩物合并在一起，残渣弃之，将浸提液浓缩物置于电热真空干燥箱(50℃)干燥得干浸膏 426 g。
1． 2． 2 粗提物萃取分部 干浸膏用水分散后依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液浓缩后
分别得到石油醚部分 (63 g)、氯仿部分(52 g)、乙酸乙酯部分(61 g)、正丁醇部分(46 g)和水部分(224 g)。
1． 2． 3 氯仿部分分离 氯仿部分分离采用硅胶柱层析，干法装柱(10 cm × 120 cm，200 ～ 300 目)。上样
方式:将 52 g氯仿层萃取物与等量硅胶(100 ～ 200 目)拌匀，置于电热恒温鼓风干燥箱(50℃)烘干，然后研
细，加在填充好的柱顶端，压平实。然后采用石油醚∶乙酸乙酯1∶ 0、30∶ 1、20∶ 1、10∶ 1、5∶ 1、1∶ 1、1∶ 2进行梯
度洗脱;洗脱体积分别为 2 000、1500、1500、1500、1500、1500、1500 mL，每 300 mL为一流分，合并相同流分
进行进一步分离。精分部分采用硅胶柱层析(5 cm ×80 cm，200 ～ 300 目，干法装柱) ，5∶ 1、5∶ 2、5∶ 3、5∶ 4
石油醚∶乙酸乙酯梯度洗脱，洗脱体积分别为 600、400、400、400 mL，每 80 mL为一流分。
1． 2． 4 乙酸乙酯部分分离 乙酸乙酯部分分离采用硅胶柱层析，干法装柱(10 cm × 120 cm，200 ～ 300
目)。上样方式:同氯仿部分。接着采用氯仿∶甲醇50∶ 1、30∶ 1、20∶ 1、10∶ 1、5∶ 1、3∶ 1、1∶ 1进行梯度洗脱;洗
脱体积 2 100、1800、1800、1800、1800、1800、1800 mL，每 300 mL为一流分，合并相同流分进行进一步分离。
精分部分硅胶柱层析(5 cm ×80 cm，200 ～ 300 目，干法装柱) ，9∶ 1、8∶ 1、7∶ 1、6∶ 1氯仿∶甲醇梯度洗脱，洗脱
体积分别为 800、480、480、480、480 mL，每 80 mL为一流分。
1． 2． 5 化合物鉴定 氯仿层及乙酸乙酯层分离得到的化合物，采用 1H － NMR，13 C － NMR，EI － MS 检测
化合物的波谱数据 (波普数据由沈阳药科大学分析中心测出) ;检测物质的熔点及 Rf 值并与标准物质的
熔点及 Rf值比对，结合数据分析及文献检索对化合物进行鉴定。
2 结果与分析
2． 1 化合物Ⅰ
无色针状结晶(丙酮) ，易溶于丙酮、甲醇，氯仿，乙酸等，可溶于碱性水溶液，mp134 ～ 136℃，在紫外
365 nm 具有强烈蓝色荧光，EI － MSm /s: ［M +］，134，105，97，91，84，77，66，57，46，43;1H － NMR，13 C －
NMR与文献(龚运准，1986)中伞形花内酯基本一致。综合以上所有的分析数据，可鉴定该化合物为 7 －羟
基香豆素(7 － Hydroxycoumarin)。
2． 2 化合物Ⅱ
淡黄色针晶，mp271 ～ 274℃，溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯;微溶于水，紫外 365 nm 下蓝色荧光，
FeCL3 反应呈阳性，异羟酸铁反应呈紫红色(为内酯结构的特征反应)。
1H － NMR，13C － NMR与文献［3］报
道基本一致，故可鉴定该化合物为 6，7 －二羟基香豆素(Esculetin)。
2． 3 化合物Ⅲ
白色粉末，TLC紫外 365 nm 呈蓝色荧光，mp206 ～ 208℃。EI － MS:180(M +，100)163，152，145，136，
123，117，107，89，77，63;1H － NMR，13C － NMR数据和文献［4］报道咖啡酸的数据基本一致，故鉴定该化合
物为咖啡酸(Caffeic acid)。
2． 4 化合物Ⅳ
白色针状结晶(丙酮) ，易溶于氯仿、丙酮、甲醇，mp351 ～ 355℃;EI － MS 显示分子离子峰 m/z456［M
+，2］，248(100) ，203(60) ，189(30) ，147(20) ，133(50) ;1H － NMR，13 C － NMR 等波谱数据与文献(何立
文，1995)对照基本一致，故鉴定该化合物为齐墩果酸(Oleanic acid)。
573第 4 期 阳中和，等:犁头草化学成分研究初报
2． 5 化合物Ⅴ
黄色粉末(甲醇) ，mp329 ～ 331℃，盐酸 －镁粉反应呈阳性，确定其为黄酮类化合物。1H － NMR，13 C －
NMR数据与文献［5］报道基本一致，故鉴定该化合物为木犀草素(Luteolin)。
2． 6 化合物Ⅵ
白色针状结晶(石油醚 －乙酸乙酯) ，mp139 ～ 141℃，Liebermann － Burchard 反应呈阳性，表明该化合
物为甾体类化合物。EI － MS、1H － NMR，13C － NMR数据归属与文献报道基本一致，用 3 种不同展开剂进
行薄层层析检识，Rf值与 β －谷甾醇标准品一致，且混合物溶点不下降，证明两者为同一化合物，故鉴定该
化合物Ⅵ为 β －谷甾醇(β － sitosterol)。
2． 7 化合物Ⅶ
白色针晶(甲醇) ，mp205 ～ 207℃。1H － NMR，13C － NMR数据和文献［6］报道的秦皮甲素基本一致，故
鉴定该化合物Ⅶ为秦皮甲素(Esculin)。
2． 8 化合物Ⅷ
黄色针晶，mp346 ～ 348℃;盐酸 －镁粉反应呈阳性，表明其为黄酮类化合物。1H － NMR，13 C － NMR 数
据经与文献［7］比对基本一致，故鉴定该化合物Ⅷ为芹菜素(Apigenin)。
2． 9 化合物Ⅸ
黄色针状结晶(乙醚) ，mp313 ～ 315℃盐酸 －镁粉反应呈阳性，表明其为黄酮类化合物。1H － NMR，13 C
－ NMR数据与文献［8］报道的槲皮素的数据基本一致，故鉴定该化合物Ⅸ为槲皮素(Quercetin)。
3 讨 论
本研究首次从犁头草的乙醇提取物中分离得到 β －谷甾醇(β － sitosterol)、木犀草素(Luteolin)、芹菜
素(Apigenin)、6，7 －二羟基香豆素(Esculetin)、7 －羟基香豆素(7 － Hydroxycoumarin)、齐墩果酸(Oleanic
acid)、咖啡酸(Caffeic acid)、槲皮素(Quercetin)和秦皮甲素(Esculin)9 种化合物。以上香豆素类、黄酮
类、有机酸类化合物均具有较好的药理活性，其结果可为犁头草的临床应用及药理研究提供一定的参考数
据。
参 考 文 献:
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［2］徐国兵，曾万章，万徳光 . 四川省堇菜属药用植物资源与开发前景［J］. 中药材，1995，18(5) ，227 － 230．
［3］BNOG GYU KIM，YOUNGSHIM LEE，HOR － GIL HUR，et al． Production of Three O － Methhylated Esculetins with Escherichia
coli Expressing O － Methyltransferase from Poplar． Biosci． Biotech － nol［J］． Biochem，2006，70(5) :1 269 － 1 272．
［4］钟惠民，李 昉，许泳吉，等 . 野生植物灰叶堇菜的营养成分分析［J］. 植物资源与环境学报，2005，14(1) :62 － 63．
［5］ULFG． ADRIANA M B，PERC． Expression of viola cyclotides by liquid chromatography － mass spectrometry and tandem maa
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［6］LIU L M，CHEN L，WANG R H，et al． Studies on chemical constituents of Qinpi［J］． Chinese Traditional and Herbal Drugs，
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673 山地农业生物学报 2011 年