全 文 ：西北林学院学报 ２０１１，２６（６）：１１９～１２３
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ＤＰＰＨ·法评价杜仲叶提取物的抗氧化活性
　收稿日期：２０１０－１０－２１　修回日期：２０１１－０３－０１
　基金项目：中日合作课题（Ｋ３３２０２０９０８）；陕西省日元贷款项目（Ｋ３３２０２００２３）
　作者简介：苑子夜，女，在读硕士研究生，主要研究方向为植物资源化学与生物活性物质。
＊通讯作者：苏印泉，男，教授，主要从事植物资源利用研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｙｑ００９＠１２６．ｃｏｍ。
苑子夜１，苏印泉１＊，张　强１，朱铭强１，中泽庆久２，堤雅史２
（１．西北农林科技大学 林学院，陕西 杨陵７１２１００；２．大阪大学，日本 大阪府５６５－０８７１）
摘　要：采用超声波法提取杜仲叶抗氧化物质，用ＤＰＰＨ·法评价其抗氧化活性。采用不同极性溶
剂对最佳提取条件下的提取物进行萃取，测定不同极性萃取物中的总多酚和总黄酮含量及ＤＰＰＨ
·清除率。结果表明：超声波法的最佳提取工艺为：６０％乙醇，料液比１∶１５，提取温度６０℃，提取
时间３０ｍｉｎ，此工艺条件下ＤＰＰＨ·清除率为９１．０１％。杜仲叶抗氧化活性物质主要存在于其弱
极性的乙酸乙酯部分，该部分１００μｇ·ｍＬ
－１质量浓度样液的ＤＰＰＨ·清除率达９２．２８％，强于相
同质量浓度的ＢＨＴ，与相同质量浓度的Ｖｃ无显著差异。相关分析表明，杜仲叶抗氧化活性的主
要物质基础为总多酚和总黄酮。
关键词：杜仲叶；抗氧化活性；提取工艺；ＤＰＰＨ·；总多酚；总黄酮
中图分类号：Ｓ７８９．４　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００１－７４６１（２０１１）０６－０１１９－０５
Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｌｅａｆ　Ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｂｙ　ＤＰＰＨ· Ａｓｓａｙ
ＹＵＡＮ　Ｚｉ－ｙｅ１，ＳＵ　Ｙｉｎ－ｑｕａｎ１，ＺＨＡＮＧ　Ｑｉａｎｇ１，ＺＨＵ　Ｍｉｎｇ－ｑｉａｎｇ１，
ＮＡＫＡＺＡＷＡ　Ｙｏｓｈｉｈｉｓａ２，ＴＳＵＴＳＵＭＩ　Ｍａｓａｆｕｍｉ　２
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｏｓａｋａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｏｓａｋａ　Ｐｒｅｆｅｃｔｕｒｅ　５６５－０８７１，Ｊａｐａｎ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｌｅａｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ－ａｓｓｉｓｔｅｄ
ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ　ｂｙ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ＤＰＰＨ·．Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ
ｆｒｏｍ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ
ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ　ＤＰＰＨ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒ－
ｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ－ａｓｓｉｓｔｅｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌ－
ｌｏｗｓ：ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　６０％，ｓｏｌｉｄ　ｔｏ　ｌｉｑｕｉｄ　ｒａｔｉｏ　１∶１５，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　６０℃ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｔｉｍｅ　３０
ｍｉｎ．Ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅｓｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｒａｔｅ　ｔｏ　ＤＰＰＨ· ｗｅｒｅ　９１．０１％．Ｔｈｅ　ｂｉｏａｃｔｉｖｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｏｆ
Ｅ．ｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｌｅａｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｍａｉｎｌｙ　ａｔｔｒｉｂｕｔｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ＤＰ－
ＰＨ　ｒａｄｉｃａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｔｈｙｌ　ａｃｅｔａｔｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　１００μｇ·ｍＬ
－１　ｗａｓ
９２．２８％，ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　ＢＨＴ（ｐ＜０．０５）ａｎｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　Ｖｃ．
Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｍａｉｎｌｙ　ｒｅｓｕｌｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｈｉｇｈ
ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｓ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｌｅａｖｅｓ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ；ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；ＤＰＰＨ·；ｔｏｔａｌ　ｐｈｅ－
ｎｏｌｓ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
　　杜仲（Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ）的干燥树皮是中国
传统的名贵滋补药材，具补肝肾、强筋骨、降血压、抗
衰老等功效。近代研究证明，杜仲“叶皮同效”，杜仲
叶作为中药于２００５年被写入《中华人民共和国药
典》［１］。近年来，国内外对杜仲的抗氧化活性研究表
明，杜仲叶水提物对Ｄ－半乳糖所致的衰老小鼠的抗
氧化性损伤有保护作用［２］；杜仲叶提取物对食用油
脂具有一定的抗氧化能力［３］；通过测定杜仲不同部
位水提物的清除自由基能力、总还原力、Ｆｅ２＋螯合
能力和对亚油酸氧化的抑制率，表明杜仲叶提取物
有显著的抗氧化活性［４］；采用总抗氧化能力（ＴＡＣ）
为活性跟踪指标，确定了超声波提取杜仲叶抗氧化
活性物质的最佳提取工艺，并筛选出对杜仲叶抗氧
化活性物质吸附性能最好的大孔吸附树脂［５］；杜仲
叶提取物能够抑制生物大分子的氧化损伤，如抑制
Ｆｅｎｔｏｎ反应导致的脱氧核糖和ＤＮＡ损伤［６］，能够
抑制Ｃｕ２＋诱导的人血清低密度脂蛋白氧化修饰［７］。
ＤＰＰＨ·清除率检测法是一种简单、快速、灵敏
的抗氧化检测手段，在天然植物提取物体外抗氧化
能力检测和抗氧化片段筛选中被广泛应用［８－９］。为
了更好的开发、利用杜仲资源，采用ＤＰＰＨ·法测定
抗氧化活性［１０］，研究超声波提取杜仲叶抗氧化成分
的最佳提取工艺，并对提取物的抗氧化活性成分进
行分析，以期为杜仲资源在食品、药品和保健品领域
的应用提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　材料与仪器
１．１．１　材料　杜仲叶采自西北农林科技大学林学
院苗圃。鲜叶自然阴干，于８０℃烘至恒重，粉碎备
用。
１．１．２　试剂　ＤＰＰＨ（１，１－二苯基苦基苯肼）购自
Ｓｉｇｍａ公司，无水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、ＢＨＴ（２，
６－二叔丁基－４－甲基苯酚）、Ｖｃ为国产分析纯。
１．１．３　仪器　主要有ＲＥ－５２Ａ型旋转蒸发仪（上海
分析仪器厂）、ＫＨ５２００Ｂ型超声波清洗器（昆山禾创
超声仪器有限公司）、７２２光栅分光光度计（上海分
析仪器厂）、ＡＢ２０４－Ｓ电子天平（ＭＥＴＴＬＥＲ　ＴＯＬＥ－
ＤＯ）。
１．２　方法
１．２．１　杜仲叶提取物制备　称取干燥杜仲叶粉末
１０ｇ，按照提取工艺研究中的不同参数，在４０ｋＨｚ
超声波清洗器中提取。过滤后，滤液合并减压浓缩
得浸膏，再于５０℃真空干燥箱中烘干，得纯粉。
１．２．２　超声提取工艺正交试验　以单因素试验结
果为参考，选择乙醇浓度（Ａ）、料液比（Ｂ）、温度
（Ｃ）、时间（Ｄ）４个因素，设计四因素三水平（Ｌ９
（３４））的正交试验。
１．２．３　抗氧化性能测定　抗氧化活性以清除ＤＰ－
ＰＨ自由基能力大小表示。采用严敏等［１１］的方法，
将杜仲叶提取物配制成浓度为１００μｇ·ｍＬ
－１的溶
液，２ｍＬ样品溶液与２ｍＬ质量浓度为６６μｇ·
ｍＬ－１的ＤＰＰＨ·乙醇溶液混匀，反应２０ｍｉｎ后，于
５１７ｎｍ下比色，以Ａ０ 做参比调零。按公式（１）计算
各样品对ＤＰＰＨ·的清除率（Ｉ）。
Ｉ＝［１－（Ａｉ－Ａｊ）／Ａ０］×１００％ （１）
式中：Ａ０ 为未加样的 ＤＰＰＨ·（２ｍＬＤＰＰＨ·＋２
ｍＬ样品溶剂）的吸光度，Ａｉ为样品与ＤＰＰＨ·反应
后的吸光度，Ａｊ 为样品的空白（２ｍＬ无水乙醇＋２
ｍＬ样品）的吸光度。
１．２．４　不同极性杜仲叶提取物的制备　采用
ＪＩＡＮＧ等［１２］的方法，略加修改。称取１００ｇ杜仲叶
粉末，以超声波提取，正交实验获得的最佳工艺提取
２次，提取液合并浓缩至粘稠状，留一部分原液做对
照，之后加入蒸馏水调稀后分别用乙酸乙酯和正丁
醇依次萃取，最后剩余水相部分。４个不同样品分
别减压浓缩、真空干燥获得原液、乙酸乙酯相、正丁
醇相和水相提取物样品，分别测定总黄酮、总多酚含
量及ＤＰＰＨ·清除率。
１．２．５　总黄酮与总多酚测定　（１）总黄酮含量的测
定。采用翟梅枝等［１３］的方法，略有修改。称取芦丁
２０ｍｇ（１２０℃烘至恒重），置于１００ｍＬ容量瓶中，加
６０％的乙醇定容至刻度，摇匀，取２５ｍＬ用蒸馏水
稀释至５０ｍＬ（０．１ｍｇ·ｍＬ－１），取０、１．０、２．０、
３．０、４．０、５．０ｍＬ分别置于１０ｍＬ具塞试管中，先
加质量分数为５％的亚硝酸钠溶液０．３ｍＬ，摇匀，
放置６ｍｉｎ，再加入质量分数为１０％的硝酸铝溶液
０．３ｍＬ，摇匀，放置６ｍｉｎ；再加入１ｍｏｌ·Ｌ－１
ＮａＯＨ溶液４．０ｍＬ，分别用６０％的乙醇稀释至刻
度，摇匀，放置１５ｍｉｎ，于５１０ｎｍ波长处测定吸光
度。将样品配成质量浓度１ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，取
１ｍＬ按标准曲线制备中的操作步骤进行测定，根据
芦丁标准曲线方程（Ａ＝１０．５５１Ｃ－０．００２，Ｒ２＝
０．９９９　９）计算总黄酮含量，其中，Ａ 为吸光度，Ｃ为
芦丁等价物浓度（ｍｇ·ｍＬ－１），总黄酮含量以 ｍｇ·
ｇ－１［１４］表示。
（２）总多酚含量的测定。采用傅燕玲等［１５］的
方法，略有修改。称取２０．０ｍｇ没食子酸，用蒸馏
水定容于１００ｍＬ的容量瓶中，备用。取８只试管，
分别加入０、０．０５、０．１、０．２、０．４、０．６、０．８、１．０ｍＬ
没食子酸标准溶液于２５ｍＬ比色管中，加蒸馏水至
１ｍＬ，再加入１．０ｍＬ０．５ｍｏｌ·Ｌ－１　Ｆｏｌｉｎ－酚试剂，
混匀，暗处放置５ｍｉｎ，加入２ｍＬ２０％Ｎａ２ＣＯ３ 溶
液，用蒸馏水定容至２５ｍＬ，充分混合后，室温放置
１ｈ，于７６０ｎｍ波长处测定吸光值。将样品配成质
量浓度１ｍｇ·ｍＬ－１的溶液，取１ｍＬ按标准曲线制
０２１ 西北林学院学报 ２６卷　
备中的操作步骤进行测定，根据标准曲线线性方程
（Ａ＝０．０９８　９Ｃ＋０．０３２　２，Ｒ２＝０．９９５　８），计算总多
酚含量，其中，Ａ为吸光度，Ｃ为没食子酸等价物浓
度（μｇ·ｍＬ
－１）。
１．２．６　数据处理与分析　所有试验均重复３次，用
ＳＰＳＳ１６．０软件对数据进行处理与分析。
２　结果与分析
２．１　单因素试验结果
为优化杜仲抗氧化物质超声波法提取工艺，首
先以单因素法研究了乙醇浓度、提取温度、料液比、
提取时间和提取次数对杜仲提取物清除ＤＰＰＨ·能
力的影响（图１）。
研究结果表明，实验条件为６０℃、料液比１∶１０、
提取１次、时间６０ｍｉｎ时，乙醇浓度在０～８０％范围
内，杜仲叶提取物对ＤＰＰＨ·清除率随乙醇浓度的增
大变化不大，４０％时清除率最高，当提取溶剂为无水
乙醇时清除率最低（图１ａ）。其原因可能是抗氧化物
质极性与４０％乙醇极性相似，溶解度最大。另一方
面由于乙醇浓度过高，一些醇溶性杂质、色素、脂溶性
强的成分溶出量增加，与抗氧化物质竞争和乙醇结
合［１６］，导致抗氧化物质提取率降低。因此选定２０％、
４０％和６０％乙醇体积分数进行正交试验。
当实验条件为６０％乙醇、料液比１∶１０、提取
６０ｍｉｎ、提取次数为１次时，提取温度在低于７０℃
时，随温度的升高，提取物对ＤＰＰＨ·清除率逐渐增
加，超过７０℃时开始降低（图１ｂ）。主要是由于随着
温度的升高，传质效率逐渐升高，但温度过高，热敏
性成分易被破坏，杂质的溶出量增大。故提取温度
选定６０、７０、８０℃进行正交试验。
当实验条件为提取温度６０℃、６０％乙醇、料液
比１∶１０、提取次数为１次时，在提取时间１０～４０
ｍｉｎ范围内，随着提取时间的增加，提取物对ＤＰＰＨ
·清除率逐渐增大，４０ｍｉｎ达到最大，继续延长时
间，清除率反而下降（图１ｃ）。由于超声时间太长，
超声波的空化机械效应使植物组织中大量细胞破
裂，溶液中杂质增多，粘度增大，而这些杂质不但会
影响有效成分的溶出，增大传质阻力，还会对溶出的
有效成分有一定的吸附作用［１７］。故选定３０、４０、５０
ｍｉｎ做正交试验。
在实验条件为６０℃、６０％乙醇、提取６０ｍｉｎ、提
取次数为１次时，随着料液比的增加，提取物对ＤＰ－
ＰＨ·清除率逐渐增加（图１ｄ），说明料液稀释度增
加，有利于抗氧化物质的溶出。但料液比由１∶２０
增加到１∶３０时，清除率增加不明显。综合考虑浸
提效果、溶剂用量和浓缩负荷等方面［１８］，选定
１∶１５、１∶２０、１∶２５进行正交试验。
图１　杜仲叶抗氧化活性物质提取单因素试验结果
Ｆｉｇ．１　Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ
ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｆｒｏｍＥ．ｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｌｅａｖｅｓ
提取次数的单因素试验结果（图１ｅ）表明，实验
条件为提取温度６０℃，提取时间６０ｍｉｎ，６０％乙醇，
料液比１∶１０，提取１次，提取物对ＤＰＰＨ·清除率
最高，可能随着提取次数的增多杂质增多，导致抗氧
化物质的浓度降低。但提取１次活性物质提取不完
全（提取率为２８．６５％），提取２、３、４次的提取率变
化不大，分别为３７．４６％、３９．３６％、４０．１５％，考虑到
资源的合理利用，实验选定提取次数为２次。
２．２　正交试验结果
由表１和表２可知，因素Ａ、Ｂ、Ｃ均有显著意义
１２１第６期 苑子夜 等　ＤＰＰＨ·法评价杜仲叶提取物的抗氧化活性
（ｐ＜０．０５），且影响次序依次为Ａ＞Ｂ＞Ｃ，最佳水平
为Ａ３Ｂ１Ｃ１，因素Ｄ无显著意义，从节约能源考虑，
以３０ｍｉｎ为宜。综上所述，杜仲叶抗氧化活性物质
提取的最佳工艺为Ａ３Ｂ１Ｃ１Ｄ１，即乙醇浓度６０％，料
液比１∶１５，提取温度６０℃，提取时间３０ｍｉｎ，按照
最佳提取工艺进行３次平行验证试验，最后测定的
结果为（９１．０１±０．４２）％。
表１　杜仲叶抗氧化活性物质提取正交试验结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ　ｏｆ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｆｒｏｍＥ．ｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｌｅａｖｅｓ
试验号
乙醇浓度
（Ａ）／％
料液比
（Ｂ）／（ｇ·ｍＬ－１）
温度
（Ｃ）／℃
时间
（Ｄ）／ｍｉｎ
ＤＰＰＨ·清除率／％
Ｘ１　 Ｘ２　 Ｘ３
１　 １　 １　 １　 １　 ８９．４６　 ８８．７４　 ８８．２５
２　 １　 ２　 ２　 ２　 ８６．８７　 ８７．２１　 ８６．９７
３　 １　 ３　 ３　 ３　 ８４．６９　 ８２．５３　 ８３．２０
４　 ２　 １　 ２　 ３　 ８８．１８　 ８７．５９　 ８７．２６
５　 ２　 ２　 ３　 １　 ８７．１４　 ８５．６０　 ８６．３８
６　 ２　 ３　 １　 ２　 ８４．２１　 ８６．７３　 ８５．３１
７　 ３　 １　 ３　 ２　 ８９．１０　 ９０．５４　 ８８．７２
８　 ３　 ２　 １　 ３　 ９１．７５　 ８９．７０　 ９１．２４
９　 ３　 ３　 ２　 １　 ８８．３３　 ８７．９２　 ８８．２６
ｋ１　 ８８．４３６　 ８８．６４９　 ８８．３７７　 ８７．７８７
ｋ２　 ８８．４８９　 ８８．０９６　 ８７．６２１　 ８７．２９６
ｋ３　 ８９．５０７　 ８５．６８７　 ８６．４３３　 ８７．３４９
表２　方差分析①
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｅｓｔｓ　ｏｆ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｕｂｊｅｃｔｓ　ｅｆｆｅｃｔｓ
方差
来源
离均差
平方和
自由度 均方差 Ｆ　 Ｐ
Ａ　 ５５．６２５　 ２　 ２７．８１２　 ４０．７７７　 ０．０００
Ｂ　 ４４．６５１　 ２　 ２２．３２６　 ３２．７３２　 ０．０００
Ｃ　 １７．２７５　 ２　 ８．６３７　 １２．６６４　 ０．０００
Ｄ　 １．３０７　 ２　 ０．６５４　 ０．９５８　 ０．４０２
误差 １２．２７７　 １８　 ０．６８２
　①Ｒ２＝０．９０６。
２．３　杜仲叶各极性部位总黄酮和总多酚含量
由表３可以看出，乙酸乙酯部位的总黄酮和总
多酚质量分数最高，显著高于原液、正丁醇相和水相
（ｐ＜０．０５），表明杜仲叶提取物所含的黄酮类化合
物和多酚类化合物主要以弱极性化合物为主。因
此，可以利用乙酸乙酯萃取法对杜仲叶提取物进行
初步分离纯化，萃取溶剂的用量和萃取次数有待进
一步研究。
２．４　杜仲叶不同极性部位ＤＰＰＨ·清除活性
由表３可以看出，在相同质量浓度（１００μｇ·
ｍＬ－１）下，乙酸乙酯相的清除能力最高，达到
９２．２８％，显著高于ＢＨＴ（６４．２８％）（ｐ＜０．０５），与
Ｖｃ（９５．０６％）无显著差异。由此可见，杜仲叶提取
物极强的自由基清除能力的物质基础主存在于弱极
性的乙酸乙酯相。在该质量浓度下，ＤＰＰＨ·清除
能力与总黄酮含量中度相关，ｙ＝０．０７７　６ｘ＋４１．３７，
Ｒ２＝０．７５６　１；与总多酚含量高度相关，ｙ＝０．４５８　５ｘ
＋３５．２８，Ｒ２＝０．９７６　２。相关关系的计算结果表明，
杜仲提取物强抗氧化能力主要由高含量的总黄酮和
总多酚所贡献，进一步验证了总黄酮和多酚类化合
物是植物材料起抗氧化作用的主要物质［１９］的论断。
表３　杜仲叶不同极性部分总多酚、总黄酮含量
及ＤＰＰＨ·清除率①
Ｔａｂｌｅ　３　Ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｐｈｅｎｏｌｓ　ａｎｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ａｎｄ
ＤＰＰＨ·ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｏｌａｒｉｔｉｅｓ
ｏｆ　Ｅ．ｕｌｍｏｉｄｅｓ　ｌｅａｖｅｓ
极性部位
总黄酮含量
／（ｍｇ·ｇ－１）
总多酚含量
／（ｍｇ·ｇ－１）
ＤＰＰＨ·清除率
／％
原液 ３１０．８７±１２．０１ｂ ９６．７６±７．８９ｂ ８４．１４±１．６５ｂ
乙酸乙酯相 ７２９．１６±１２．２２ａ １３０．０１±６．７５ａ ９２．２８±１．３３ａ
正丁醇相 １１８．４７±５．０５ｄ １３．９８±８．０１ｄ ４３．６１±０．５９ｄ
水相 １４２．１７±６．９５ｃ ３２．４３±７．２５ｃ ４６．３３±０．２１ｄ
ＢＨＴ　 ６４．２８±０．１８ｃ
Ｖｃ　 ９５．０６±０．００ａ
　①同一列不同字母表示各样品之间存在显著性差异（ｐ＜０．０５）。
３　结论与讨论
通过超声波提取法的正交试验，确定了杜仲叶
抗氧化物质提取的最佳工艺条件是：乙醇浓度
６０％，料液比（ｇ／ｍＬ）１∶１５，提取温度６０℃，提取时
间３０ｍｉｎ，提取２次。董大鹏［５］以体外总抗氧化能
力为指标，采用单因素试验研究了超声提取杜仲叶
抗氧化活性物质的提取条件是：乙醇浓度２０％，料
液比为１∶１８，提取４０ｍｉｎ，提取２次。造成２种提
取工艺差异的原因可能与采用的抗氧化指标不同和
是否加热有关。超声波技术提取杜仲叶抗氧化物质
工艺简单，提取温度低、时间短、效率高，是一种比较
理想的提取方法。
最佳条件下提取的杜仲叶提取物在质量浓度为
１００μｇ·ｍＬ
－１时对ＤＰＰＨ·清除率高达９１．０１％，
说明杜仲叶提取物本身就是一种非常优良的天然抗
２２１ 西北林学院学报 ２６卷　
氧化剂，可作为医药、功能性食品及饲料添加剂。
杜仲叶粗提物经乙酸乙酯、正丁醇和水萃取后，
其中的黄酮和多酚类化合物得到了重新分配，乙酸
乙酯对黄酮和多酚类化合物具有富集作用，乙酸乙
酯萃取物中的总多酚和总黄酮含量显著高于萃取前
混合物和正丁醇、水萃取物，且乙酸乙酯萃取物的抗
氧化活性比同质量浓度的ＢＨＴ强。总黄酮和总多
酚含量与ＤＰＰＨ·清除率相关关系分析表明，杜仲
叶提取物强抗氧化活性与其中含有的黄酮类和多酚
类结构化合物具有一定的相关性，与江慎华等［２０］采
用类似的方法对香椿和丁香抗氧化活性进行研究的
结论一致。以乙酸乙酯部位为研究对象，运用柱层
析等分析手段，对单体化合物纯化分离并最终阐明
其抗氧化活性的物质基础有待进一步研究。
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３２１第６期 苑子夜 等　ＤＰＰＨ·法评价杜仲叶提取物的抗氧化活性