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野生与栽培蓝靛果果实提取物的体外抗氧化活性



全 文 :Vol. 31 No.3
Sep. 2013
第 31卷 第 3期
2013年 9月
经 济 林 研 究
Nonwood Forest Research
收稿日期:2013-02-01
基金项目:黑龙江省中医药管理局科技项目 (ZHY12-W041),黑龙江省自然科学基金项目(C201102);佳木斯大学科技项目 (S2011-055)。
作者简介:刘德江(1980—),男,黑龙江克东人。实验师,硕士,主要从事寒地植物资源、生态、栽培及其提取物的应用研究。
Tel:13846181872,E-mail:Liudejiang2004@163.com。
通讯作者:赵永勋(1955—),男,黑龙江佳木斯人。教授,硕士研究生导师,主要从事生物化学与分子生物学的研究。
E-mail:zhaoyongxun887@163.com。
蓝靛果 Lonicera edulis Turcz.是忍冬科忍冬属
植物,为落叶小灌木。我国蓝靛果主要分布在东北、
华北和西北地区,以东北的大、小兴安岭和长白
山地区的野生资源贮量最为丰富,但掠夺式采摘
使其资源破坏严重,而人工规模化栽培的产量几
乎为零 [1-3]。有关研究结果表明,蓝靛果果实中含
有大量的活性物质,此类活性物质具有抗病毒、
抗癌和改善肝脏解毒功能等功用 [4-5],具有较高的
营养及药用双重价值 [6],是开发天然抗氧化剂的
良好资源 [7]。多年来,国内外现有关于蓝靛果的
研究内容主要集中在野生蓝靛果抗氧化性质的研
究方面,而有关栽培蓝靛果的抗氧化性质的研究
在国内外尚无报道。因此,文中测定并统计了以
不同产地野生与栽培蓝靛果果实提取物制备的样
液对 DPPH• 、•OH及 O2¯•自由基的清除率,比较
分析了二者抗氧化活性的大小及差异性,以期为
野生蓝靛果资源的有效保护及蓝靛果人工规模化
的栽培提供参考依据。
野生与栽培蓝靛果果实提取物的体外抗氧化活性
刘德江,申 健,田立娟,程广东,赵永勋
(佳木斯大学 生命科学学院,黑龙江 佳木斯 15400 7)
摘 要:为了了解野生与栽培蓝靛果果实提取物的 体外抗氧化活性,测定了以黑龙江省不同产地野生与栽培蓝
靛果果实提取物制备的不同质量浓度样液对 DPPH• 、•OH及 O2¯•自由基的清除率,并利用 DPS3.01软件对测
定结果进行了方差分析。结果表明:不同产地野生与栽培蓝靛果果实提取样液对 DPPH• 、•OH及 O2¯•自由基均
有较强的清除作用,且其清除率随着样液质量浓度的加大而提高,但当 P< 0.01时,野生与栽培蓝靛果果实提
取样液对 DPPH• 、•OH及 O2¯•的清除能力之间均无差异。
关键词:蓝靛果;野生与栽培果实;抗氧化活性;比较分析;黑龙江省
中图分类号:S663.9 文献标志码:A 文章编号:1003—8981(2013)03—0103—04
Antioxidant activity in vitro of extracts from wild and
cultivated Lonicera edulis
LIU De-jiang, SHEN Jian, TIAN Li-juan, CHENG Guang-dong, ZHAO Yong-xun
(Life Science College, Jiamusi University, Jiamusi 154007, Heilongjiang, China)
Abstract: In order to know the antioxidant activity in vitro of extracts from wild and cultivated Lonicera edulis, wild
and cultivated L. edulis fruits from different regions in Heilongjiang Province were extracted, scavenging activities of
different mass concentrations of sample liquids to DPPH •, • OH and O2¯ were measured, and the determination results
were analyzed by DPS3.01 software. The results show that the extracts from wild and cultivated L. edulis fruits had
stronger scavenging effect on DPPH •, • OH and O2¯•. And with increasing mass concentration of sample liquids, scavenging
rate is improved. But scavenging abilities of extracts from wild and cultivated L. edulis fruits to DPPH •, • OH and O2¯
have
no differences as P< 0.01.
Key words: Lonicera edulis; wild and cultivated fruits; antioxidant activity; comparative analysis; Heilongjiang Province
DOI:10.14067/j.cnki.1003-8981.2013.03.021
104 第 3期刘德江,等:野生与栽培蓝靛果果实提取物的体外抗氧化活性
1 材料与方法
1.1 材 料
野生蓝靛果果实 2010年 6~ 7月分别采摘于
黑龙江省的伊春、勃利和吉林省的汪清;栽培蓝
靛果果实 2010年 5~ 6月采摘于 4年生的栽培蓝
靛果树,这些栽培树都是采用 2007年通过采枝扦
插繁殖得到的伊春、勃利和汪清的苗木而种植的。
将采摘后的果实除杂后放入-20 ℃的冰箱中冻藏。
1.2 方 法
1.2.1 蓝靛果提取物样品的制备
根据刘德江等人采用的方法 [8-9]制备蓝靛果提
取物样品,提取方法为超声波法,超声波作用时
间为 19 min,超声波作用功率为 229 W,料液比
为 1∶ 19,提取级数为 1 级。选用 HPD-200A大孔
树脂进行粗提物纯化,最佳纯化条件为:上样液的
质量浓度为 50 mg/mL,洗脱流速为 2.0 mL/min,洗
脱液浓度为 70%(v/v)。将提取物减压浓缩后进行
真空冷冻干燥处理以备用。
1.2.2 DPPH•自由基的清除
采用杨玲等人的方法 [10-12]将蓝靛果提取物用
蒸馏水制成样液,其质量浓度分别设为 0.5、1.0、
1.5、2.0、2.5 mg/mL,并配制 DPPH 2×l0-4 mol/
L的 60%乙醇溶液。分别取不同质量浓度提取物
样液各 2.0 mL,加入 DPPH的 60%乙醇溶液 2.0
mL,摇匀后放置 30 min,以蒸馏水为空白对照,
在 517 nm处测定其吸光度(A0)。然后,分别取
不同质量浓度提取物样液各 2.0 mL,与 2.0 mL乙
醇溶液混合后,在 517 nm处测定其吸光度(Ax)。
最后,测定 DPPH乙醇溶液 2.0 mL与蒸馏水 2.0
mL混合后的 517 nm处的吸光度(Ac)。样液对
自由基的清除能力以 K来表示。重复 3次。清除
率(K)的计算公式如下:
K= [1- ( A0- Ax)/Ac]×100%。
1.2.3 •OH自由基的清除
依据杨玲等人的方法 [13],在具塞试管中依
次加入 2.0×10-4 mol/L 的甲基紫溶液 1.0 mL、
1.0×10-3 mol/L 的 Fe2+ 溶 液 1.0 mL、0.12% 的
H2O2溶液 1.0 mL,以 Tris-HCl缓冲液将 pH值调
至 4.5后,用蒸馏水精确稀释到 10 mL,摇匀放置
30 min后,用分光光度计在 578 nm处测定吸光度
(Ai),以甲基紫和 Tris -HCl缓冲溶液作为空白溶
液,测定其吸光度(A),两者均以水为参比。测
定样品时在上述体系中预先加入 1.0 mL的样液,
采用上述方法测定样品的吸光度(As),以同体积
的样液、Tris-HCl和水溶液作参比,重复 3次。清
除率(S)的计算公式为:
S(%)= (As- Ai)/(A- Ai)×100%。
1.2.4 O2¯•自由基的清除
参照郭雪峰的方法 [14-15]测定样液对超氧自由基
的清除能力。反应体系中依次加入 50 mmol/L的 Tris-
HCl溶液 5.7 mL、样液 0.2 mL、6 mmol/L的邻苯三酚
溶液 0.1 mL,将混合物反应 4 min,滴入 2滴HCl以
终止反应,在 320 nm波长下测定吸光度(A1);用
等体积的蒸馏水代替邻苯三酚,测定其吸光度(A2);
再用等体积的蒸馏水代替样品溶液,测定其吸光度
(A3)。重复 3次。清除率(S)的计算公式为:
S(%)= [1- (A1- A2)/A3]×100%。
2 结果与分析
2.1 DPPH•自由基的清除结果
不同产地野生与栽培蓝靛果果实提取物不同
质量浓度的样液对 DPPH·的清除作用分别如图
1A、B、C所示。由图 1A、B、C可知,不同产地
野生与栽培蓝靛果果实提取物不同质量浓度样液对
DPPH·都具有很强的清除能力,且其对 DPPH·的
清除能力随着蓝靛果样液质量浓度的增加而呈现
出更强的变化趋势。在图 1的 A与 B中,不同产
地野生蓝靛果果实样液对 DPPH·的清除能力均高
于栽培果样液。由图 1A可知,当样液质量浓度分
别为 0.5、2.0 mg/mL且 P< 0.05时,野生与栽培
蓝靛果果实样液对 DPPH·的清除能力之间存在差
异;由图 1B可知,当样液质量浓度分别为 2.0、
2.5 mg/mL且 P< 0.05时,野生与栽培蓝靛果果
实样液对 DPPH·的清除能力之间亦有差异;由图
1C可知,当样液的质量浓度分别为 0.5、2.0 mg/mL
且 P< 0.05时,栽培和野生蓝靛果果实提取样液
对 DPPH·自由基的清除能力之间具有差异性。在
图 1A、B、C中,当 P< 0.01时,野生与栽培蓝
靛果果实提取样液对 DPPH·自由基的清除能力之
间均无差异。
2.2 •OH自由基的清除结果
不同产地野生与栽培蓝靛果果实提取物不同
质量浓度样液对 •OH的清除作用分别如图 2A、B、
C所示。由图 2A、B、C可知,不同产地野生与
栽培蓝靛果果实提取物不同质量浓度样液对 •OH
均有较强的清除能力,且随着蓝靛果样液质量浓
度的增加,其对 •OH的清除能力愈来愈强,当样
液的质量浓度达到 2.5 mg/mL时,栽培和野生蓝
靛果样液对 •OH的清除能力均达到 70%以上,汪
清栽培果样液的清除率最大(86.5%)。在图 2A、
B中,不同产地栽培蓝靛果样液对 •OH的清除能力
均高于野生果样液。当样液的质量浓度分别为如图
2A的 2.0、2.5 mg/mL 和如图 2B的 1.5、2.0 mg/mL
105第 31卷 经 济 林 研 究
图 1 不同产地野生与栽培蓝靛果果实提取物不同质量浓
度样液对 DPPH·的清除作用
Fig. 1 Scavenging activities to DPPH· of different mass
concentration of extracts from wild and cultivated
Lonicera edulis at different regions
图 2 不同产地野生与栽培蓝靛果果实提取物不同质量浓
度样液对 •OH的清除作用
Fig. 2 Scavenging activities to •OH of different mass
concentration extracts from wild and cultivated
Lonicera edulis at different regions
且在 P< 0.05时,野生与栽培蓝靛果样液对 •OH
的清除能力之间差异显著。在图 2C中,当样液的
质量浓度分别为 0.5、1.0 mg/mL时,栽培蓝靛果样
液对 •OH的清除能力略低于野生果样液;而当样液
的质量浓度增加到 1.5、2.0 mg/mL时,两者在 P<
0.05时具有差异。图 2A、B、C中,当 P< 0.01时,
野生与栽培蓝靛果样液对 •OH的清除能力之间均无
差异。
2.3 O2¯•自由基的清除结果
不同产地野生与栽培蓝靛果果实提取物不同
质量浓度样液对 O2¯•的清除作用分别如图 3A、B、
C所示。由图 3A、B、C可知,以不同产地的野
生与栽培蓝靛果果实提取物制备的不同质量浓度
的样液对 O2¯•自由基均有极强的清除能力,且同
等质量浓度的栽培果提取样液对 O2¯•的清除能力
均略高于野生果样液。除此之外,当样液的质量
浓度均为 0.5 mg/mL时,野生和栽培蓝靛果提取
样液的清除率均高于 60%以上;当样液的质量浓
度均为 2.5 mg/mL时,野生和栽培蓝靛果提取样
液的清除率均达到 90%,最大为 98.1%。由图 3B
106 第 3期刘德江,等:野生与栽培蓝靛果果实提取物的体外抗氧化活性
可知,当样液的质量浓度为 1.5 mg/mL且在 P<
0.05时,栽培与野生果样液的清除率之间具有显
著的差异;由图 3C可知,当样液的质量浓度分别
为 2.0、2.5 mg/mL且在 P< 0.05时,栽培与野生
果样液的清除率之间具有显著差异。在图 3A、B、
C中,当 P< 0.01时,野生与栽培蓝靛果提取样
液对 O2¯•的清除能力之间均无差异性。
质量浓度样液对 DPPH• 、•OH及 O2¯•自由基都具
有较强的清除能力,且其清除率随着提取样液的
质量浓度的增加而增加,呈量效关系。方差分析
结果表明,当 P< 0.05时,野生与栽培蓝靛果提
取样液对 DPPH• 、•OH及 O2¯•自由基的清除率,
仅表现出点状差异,却未呈现出线性关系;而当
P< 0.01时,野生与栽培蓝靛果提取样液对三种
自由基的清除率之间并无显著差异。
综上所述,不同产地的野生与栽培蓝靛果均
有较高的抗氧化活性,且野生与栽培果的抗氧化
活性之间无显著差异。
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[本文编校:伍敏涛 ]
图 3 不同产地野生与栽培蓝靛果果实提取物不同质量浓
度样液对 O2¯•的清除作用
Fig. 3 Scavenging activities to O2¯• of different mass
concentration extracts from wild and cultivated
Lonicera edulis at different regions
3 结 论
不同产地野生与栽培蓝靛果果实提取物不同