全 文 ：蒙药诃子汤制草乌总生物碱对乳大鼠心肌细胞的毒性作用研究
李福全1， 王朝鲁2， 李志勇3，星 星1， 图 雅1，4*
(1. 内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000;2. 中国中医科学院望京医院，北京 100102;3. 中央
民族大学中国少数民族传统医学研究院，北京 100081;4. 中国中医科学院中医药发展中心，北京 100700)
收稿日期:2011-11-08
基金项目:国家自然科学基金地区科学基金项目(30860391) ;国家自然科学基金青年基金项目(81001693)
作者简介:李福全(1985—) ，男(蒙古族) ，硕士研究生，主要从事蒙药炮制的现代研究。
* 通信作者:图雅，女，教授，研究方向:中医药研究与开发。Tel:(010)64014411-2341，E-mail:tuya126@ 126． com
摘要:目的 探讨蒙药诃子汤炮制草乌总生物碱对心肌细胞的毒性作用。方法 制备乳大鼠原代心肌细胞，胎盘蓝染色
法检测心肌细胞存活率，免疫组织化学染色法鉴定心肌细胞。制备的原代细胞培养 3 ～ 4 d，分别加入诃子汤制草乌、生
草乌总生物碱 0. 5、0. 25、0. 125、0. 062 5 mg /mL 培养 30、60 min，MTT 法检测心肌细胞存活率，比色法检测乳酸脱氢酶
(LDH)漏出率，Hoechst33528 荧光染色法检测细胞核凋亡率。结果 诃子汤制草乌总生物碱、生草乌总生物碱在与心肌
细胞共同孵育 30 min、60 min时均能降低心肌细胞活力，细胞 LDH漏出率增加，发生细胞凋亡;诃子汤制草乌总生物碱
所致的心肌细胞毒性作用弱于生草乌总生物碱。结论 经诃子汤炮制的草乌总生物碱对心肌细胞的毒性作用明显低于
生草乌总生物碱，表明采用诃子汤炮制确能降低草乌的心肌毒性。
关键词:诃子汤;草乌;总生物碱;心肌细胞;大鼠
中图分类号:R285． 5 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)05-0823-06
Toxicity of total alkaloids of Aconitum kusnezoffii Reichb processed with myroba-
lan on primary cultured myocardial cells of neonatal rats
LI Fu-quan1， WANG Chao-lu2， LI Zhi-yong3， XING Xing1， TU Ya1，4*
(1． Inner Mongolia University for the Nationalities;Tongliao 028000，China;2． Wang Jing Hospital of CACMS，Beijing 100102，China;
3． China Minority Traditional Medical Center of Minzu University of China，Beijing 100081，China;4． China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing
100700，China)
ABSTRACT:AIM To evaluate the toxicity of total alkaloids of Aconitum kusnezoffii Reichb processed with my-
robalan (TAAM)to myocardial cells in vitro. METHODS The primary myocardial cells of neonatal rats were
carried out. The cell survival rate was detected using the trypan blue staining method，and myocardial cells were i-
dentified by anti-α-sarcomeric actin and anti-fibronectin antibodies with immunochemical staining assay． When
cells were cultured for 3 － 4 d，0. 5 mg /mL，0. 25 mg /mL，0. 125 mg /mL and 0. 062 5 mg /mL of total alkaloids of
TAAM，total alkaloids of Aconitum kusnezoffii Reichb(TAA)were incubated with myocardial cells，respectively．
After the cells were cultured with TAAM or TAA for 30，60 min，the cell viability was assayed with MTT，and the
release rate of lactate dehydrogenase (LDH)was assayed with biochemical method． The apoptosis rate was ob-
served with Hoechst33528． RESULTS TAAM and TAA could decrease the cell viability，and increase the re-
lease rate of LDH in 30，60 min，and also lead to apoptosis． But the toxicity of TAAM to myocardial cells was less
than that of TAA ． CONCLUSION Myrobalan can decrease the toxicity to myocardial cells．
KEY WORDS:myrobalan;Aconitum kusnezoffii Reichb;total alkaloids;myocardial cells;rat
草乌(蒙药名“泵阿”)为毛莨科北乌头 Aconi-
tum kusnezoffii Reichb. 的干燥块根。据《无误蒙药
鉴》记载，草乌是“泵阿”的一种［1］，味辛，性温，效
轻，有大毒，功效有杀“黏”(菌) ，燥“协日乌素”
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(湿) ，止痛等，蒙医药用治心“赫依”(气)、“陶赖”
(似风湿)、“赫如虎”(似类风湿)、脖颈僵直、结喉、
痛风、游痛等症［2］。草乌在蒙医药中的应用有着悠
久的历史，草乌经诃子汤、酸奶、童尿等炮制后研成
细粉，与其他蒙药配伍后制成水丸或散剂供临床使
用，其中诃子汤炮制是蒙药草乌炮制的主要方法，也
是特色方法［3-4］。本研究将在细胞水平观察诃子汤
制草乌总生物碱对原代培养心肌细胞的毒性损伤作
用，并与生草乌总生物碱的毒性作用相比较，以期深
入解析蒙药诃子汤制草乌的科学意义。
1 材料
1. 1 动物与药品 出生 3 d 内的 SD 乳鼠，雌雄不
拘，北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可
证号:SCXK(京)2002-0003。生草乌，诃子购自河北
省安国中药材市场，经中国中医科学院中医药发展
中心图雅教授鉴定，生草乌为毛茛科植物北乌头 Ac-
onitum kusnezoffii Reichb. 的干燥块根，诃子为使君
子科植物诃子 Terminalia chebula Retz. 的干燥成熟
果实。
取草乌药材量 1 /2 的诃子加 10 倍量水煎煮 1
h，过滤，用滤液浸泡生草乌 48 h捞出草乌置于方盘
中60 ℃烘干。取制草乌用适量氨水碱化后，用乙醚
超声提取，滤过，药渣同法重复再提取 1 次，合并乙
醚溶液，作为制草乌乙醚冷浸液。减压蒸出乙醚，得
制草乌总生物碱提取物。生草乌总生物碱的提取方
法同制草乌。
1. 2 试剂与仪器 二甲基亚砜(DMSO，批号:
BCBB9519，美国 Amresco 公司) ;DMEM/F12培养基
(批号:086K83521，美国 sigma 公司) ;胰蛋白酶、胶
原酶 II型(CoII)、四噻唑蓝(MTT) (美国 Amresco公
司)、胎盼蓝(美国 sigma 公司) ;5-溴-2-脱氧尿核苷
(BrdU) (Roche公司) ，均由北京拜尔迪生物公司分
装;胎牛血清(批号:090801，杭州四季青生物工程
材料有限公司) ;小鼠抗大鼠 α 横纹肌激动蛋白多
克隆抗体(α-Sarcomeric actin，批号:20101100)、兔
抗大鼠纤维连接蛋白多克隆抗体(Fibronectin，批
号:20101100)、即用型 SABC 免疫组织化学试剂盒
(批号:20100900，武汉博士德生物工程有限公司) ;
乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒(批号:20110610，南京建
成生物工程研究所) ;细胞凋亡-Hoechst染色试剂盒
(碧云天生物技术研究所) ;无水乙醇、甲醇、丙酮、
二甲苯、NaHCO3、NaCl、KCl、Na2HPO4 · 12H2O、
KH2PO4 等均为分析纯，北京化工厂。
SW-CJ-IF型超净工作台(苏州苏洁净化设备有
限公司) ;HERA cell150 型 CO2 恒温培养箱(德国
Heraeus公司) ;BPC-250F 型生化培养箱(上海一恒
科技有限公司) ;CKX41SF 型倒置相差显微镜与
BX51TF型正置荧光生物显微镜(日本 OLYMPUS株
式会社) ;Centrifuge5804R型大容量冷冻离心机(德
国 Eppendorf公司) ;XP205 型精密分析天平［梅特
勒-托利多仪器(上海)有限公司］;Benchmark plus
荧光吸收光酶标仪(BIO-RAD公司)。
2 实验方法
2. 1 心肌细胞的制备与培养 按文献［5］方法，无
菌条件下取出乳鼠心脏，在预冷 D-Hank’s 液中清
洗 3 ～ 4 次。将心肌组织剪为 1 mm3 大小，加入 3 ～
4 倍体积量的消化酶(终质量分数 0. 04%的胰酶和
终质量分数 0. 04%的 CoII混合液) ，置于37 ℃培养
箱内 10 ～ 20 min，每隔 5 min取出振摇 1 次，反复至
消化完全。除第 1 次外，收集各次消化后的上清液，
加入等体积含 10%胎牛血清的 DMEM/F12终止消
化，于4 ℃，1 000 r /min离心 10 min，收集所有细胞，
加入含 10%胎牛血清的 DMEM/F12培养液，吹打成
单细胞悬液，经 200 目尼龙网过滤去除未消化的组
织块。接种于培养瓶中，置于培养箱内，差速贴壁分
离非心肌细胞，90 min /次，共 2 次，所得未贴壁细胞
是心肌细胞，胎盼蓝染色计算细胞获得率。细胞接
种于培养板或培养瓶内，培养液中加入终浓度为
0. 1 mmol /L BrdU 抑制成纤维细胞增殖，添加 100
U /mL青霉素、100 U /mL 链霉素预防细菌污染，
37 ℃、5% CO2、91%相对湿度培养箱中培养，约每
36 ～ 48 h换一次培养液，培养 3 ～ 4 d后使用。
2. 2 心肌细胞的鉴定 将心肌细胞按 1 × 105 个 /
孔接种于 48 孔培养板内，培养 4 d后弃培养液，PBS
反复冲洗 2 ～ 3 次，－ 20 ℃的甲醇和丙酮液(1∶ 1)固
定心肌细胞，4 ℃过夜。次日，弃掉固定液，PBS 反
复冲洗 2 ～ 3 次，在 2 组细胞上分别滴加小鼠抗 α-
Sarcomeric actin多克隆抗体和兔抗 Fibronectin 多克
隆抗体，室温孵育 2 h 后再分别滴加生物素标记羊
抗小鼠 IgG和生物素标记羊抗兔 IgG，室温孵育 20
min，按试剂盒说明书继续加入 SABC 复合物，DAB
显色，蒸馏水终止显色反应。苏木素复染，脱水、透
明，封片，镜下观察。
2. 3 分组与给药 随机分为空白对照组、DMSO 对
照组、诃子制草乌总生物碱 0. 5、0. 25、0. 125、
0. 062 5 mg /mL组，生草乌总生物碱 0. 5、0. 25、
0. 125、0. 062 5 mg /mL组，8 孔 /组。空白对照组给
予无血清 DMEM/F12、DMSO 组给予相应配药比例
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的 DMSO 及 DMEM/F12培养液(DMSO ＜ 0. 8%) ，其
余各组分别给予相应浓度的制草乌总生物碱和生草
乌总生物碱。
2. 4 诃子制草乌与生草乌总生物碱对心肌细胞存
活率的影响 将心肌细胞按 3 × 105cell /mL 接种于
96 孔板上，150 μL /孔。培养第 3 天用于实验。给
药前 12 h更换无血清培养基，给予含不同质量浓度
制草乌与生草乌总生物碱的培养液，分别孵育 30、
60、120 min。弃培养液，PBS 洗涤 2 ～ 3 次，每孔加
入 150 μL的 DMEM/F12与 20 μL MTT 液，在37 ℃、
5%CO2 饱和湿度环境中继续孵育 4 h。吸弃培养液
后，每孔加入 150 μL DMSO，低速振荡 10 min，使结
晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪 λ = 510 nm 处测
量各孔的吸光值。
2. 5 诃子制草乌与生草乌总生物碱对心肌细胞
LDH漏出率的影响 将心肌细胞按 3 × 105cell /mL
接种于 96 孔板，150 μL /孔。培养第 3 天用于实验。
给药前 12 h更换无血清培养液，给予含不同质量浓
度制草乌与生草乌总生物碱的培养液，分别孵育
30、60 min。作用结束后，吸取培养液，－ 20 ℃保
存。PBS 洗涤 2 ～ 3 次，每孔再加入 150 μL 的
DMEM/F12液，将培养板置于 － 80 ℃冷冻 4 h。取出
化冻后吸取冻融液。分别吸取等体积(200 μL)的
培养液和冻融液，按试剂盒说明书测定其乳酸脱氢
酶活性，计算 LDH漏出率。公式如下:
漏出率 = 培养液 LDH活性
培养液 LDH活性 +冻融液 LDH活性
× 100%
2. 6 诃子制草乌与生草乌总生物碱对心肌细胞凋
亡的影响 常规细胞涂片，固定，Hoechst33258 染色
后封片。荧光显微镜下，正常细胞核弥散均匀荧光，
凋亡细胞表现为浓染致密的颗粒块状荧光，计数视
野下细胞核，计算凋亡核百分率。凋亡核百分率 =
凋亡细胞核数 /细胞总数 × 100%。
2. 7 统计方法 实验数据以 x ± s 表示，SAS for
Windows 8. 1 软件进行单因素方差分析。
3 结果
3. 1 心肌细胞镜下观察与细胞获得率 在倒置显
微镜下，刚接种心肌细胞尚未贴壁，呈圆形、悬浮于
培养液中。培养 36 ～ 48 h 后，心肌细胞全部贴壁生
长，细胞核凸出明显，贴壁后细胞为梭形、菱形或多
角形，伸出伪足，形成不规则的星形并形成放射状排
列的细胞簇，可出现自发节律性搏动［6］。心肌细胞
平均存活率≥89%。
3. 2 心肌细胞的鉴定 经免疫化学染色法分析，心
肌细胞经 α-Sarcomeric actin 多克隆抗体染色阳性，
Fibronectin多克隆抗体染色阴性，见图 1。上述结果
表明，所制备的心肌细胞质量满意，可用于后续
实验。
1. 抗 α-Sarcomeric actin 2. 抗 Fibronectin抗体
免疫染色，阳性 免疫染色，阴性
图 1 原代培养的心肌细胞鉴定 (免疫组织化学
法，×20)
Fig． 1 Identification of normal cultured cardiac
cells (IHC，×20)
3. 3 诃子制草乌与生草乌总生物碱对心肌细胞存
活率的影响 结果见表 1、表 2。与空白对照组、
DMSO组比较，诃子制草乌总生物碱、生草乌总生物
碱在与心肌细胞共同孵育 30、60、120 min 时均能降
低心肌细胞活力(P ＜ 0. 01) ，抑制其存活率，剂量越
大，其抑制效果越明显，呈一定的量 －毒关系;相同
剂量的诃子制草乌总生物碱或生草乌总生物碱随着
共同孵育时间的延长，心肌细胞活力及存活率的降
低作用越明显，呈一定的时 －毒关系。
在相同的孵育时间内，比较诃子制草乌总生物
碱与生草乌总生物碱对心肌细胞活力及存活率的影
响，结果发现，在给药 30 min 时，0. 5 mg /mL的生草
乌总生物碱降低心肌细胞活力的作用明显大于同剂
量的诃子制草乌总生物碱(P ＜ 0. 01) ，其他剂量的
降低作用不明显;在给药 60 min 时，0. 5、0. 25、
0. 125、0. 062 5 mg /mL的生草乌总生物碱降低心
肌细胞活力的作用均明显强于同剂量诃子制草乌
总生物碱(P ＜ 0. 01) ;在给药 120 min 时，0. 25、
0. 125 mg /mL的生草乌总生物碱降低心肌细胞活
力的作用强于同剂量的诃子制草乌总生物碱(P ＜
0. 01)。
3. 4 诃子制草乌与生草乌总生物碱对心肌细胞
LDH漏出率的影响 结果见表 3。与细胞共同孵育
30、60 min时，制草乌总生物碱与生草乌总生物碱均
能导致细胞 LDH漏出率增加，且随着总生物碱质量
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表 1 诃子制草乌与生草乌总生物碱对心肌细胞活力的影响(OD值)
Tab． 1 Effect of TAAM and TAA on cardiac cell activity (OD value)
分组 剂量 /(mg·mL －1) 动物数 /只 30 min 60 min 120 min
空白对照组 / 8 0. 072 4 ± 0. 004 8 0. 096 8 ± 0. 014 1 0. 090 4 ± 0. 010 4
DMSO组 / 8 0. 076 3 ± 0. 009 5 0. 093 1 ± 0. 013 1 0. 073 8 ± 0. 004 8
制草乌总生物碱 0. 5 8 0. 018 8 ± 0. 005 5* 0. 011 8 ± 0. 004 2* 0. 003 8 ± 0. 002 8*
0. 25 8 0. 025 0 ± 0. 003 5* 0. 019 3 ± 0. 005 2* 0. 003 9 ± 0. 003 0*
0. 125 8 0. 040 6 ± 0. 008 3* 0. 054 4 ± 0. 010 6* 0. 028 4 ± 0. 011 2*
0. 062 5 8 0. 046 5 ± 0. 005 3* 0. 064 4 ± 0. 007 7* 0. 046 3 ± 0. 005 4*
生草乌总生物碱 0. 5 8 0. 015 4 ± 0. 002 1＊▲ 0. 002 6 ± 0. 001 1＊▲ 0. 002 9 ± 0. 002 1*
0. 25 8 0. 024 9 ± 0. 003 7* 0. 007 9 ± 0. 005 4＊▲ 0. 001 0 ± 0. 001 2＊▲
0. 125 8 0. 038 0 ± 0. 006 5* 0. 031 6 ± 0. 011 1＊▲ 0. 008 8 ± 0. 007 3＊▲
0. 062 5 8 0. 051 5 ± 0. 008 9* 0. 048 4 ± 0. 006 6＊▲ 0. 035 5 ± 0. 004 6*
注:与 DMSO组比较，* P ＜ 0. 01，数据均取平方后方差齐，进行方差分析。生草乌总生物碱与制草乌总生物碱比较，▲P ＜ 0. 01。
表 2 诃子制草乌与生草乌总生物碱对心肌细胞存活率的
影响 /%
Tab． 2 Effect of TAAM and TAA on cardiac cell viabili-
ty /%
分组 剂量(mg·mL －1)动物数 /只 30 min 60 min 120 min
空白对照组 / 8 － － －
DMSO组 / 8 － － －
制草乌组 0. 5 8 75. 36 87. 83 94. 85
总生物碱组 0. 25 8 67. 23 79. 27 94. 72
0. 125 8 46. 79 41. 57 61. 52
0. 062 5 8 39. 06 30. 83 37. 26
生草乌组 0. 5 8 79. 82 97. 21 96. 07
总生物碱组 0. 25 8 67. 37 91. 51 98. 64
0. 125 8 50. 20 66. 06 88. 08
0. 062 5 8 32. 50 48. 01 51. 90
浓度的增高而作用增强，表明制草乌总生物碱、生草
乌总生物碱对心肌细胞有一定的毒性损伤。与空白
对照组、DMSO组比较，在与细胞孵育 60 min 时，制
草乌总生物碱 0. 5 mg /mL、生草乌总生物碱 0. 5、
0. 25、0. 12、0. 06 mg /mL可明显导致细胞 LDH 漏出
率增加(P ＜ 0. 01)。制草乌总生物碱对心肌细胞
LDH漏出率的影响呈一定的量 －毒关系，在作用 30
min时，制草乌总生物碱 0. 12、0. 06 mg /mL 对心肌
细胞 LDH漏出率的影响明显低于制草乌 0. 5 mg /
mL(P ＜ 0. 01) ;但生草乌总生物碱对心肌细胞 LDH
漏出率的影响无明显量 －毒关系。与同剂量的制草
乌总生物碱组比较，作用 60 min 时，0. 25、0. 12、
0. 06 mg /mL生草乌总生物碱对心肌细胞 LDH漏出
率的影响明显增大(P ＜ 0. 01)。
表 3 诃子制草乌与生草乌总生物碱对心肌细胞 LDH漏出率的影响 /%
Tab． 3 Effect of TAAM and TAA on the release rate of LDH of cardiac cells /%
分组 剂量 /(mg·mL －1) 动物数 /只
LDH漏出率 /%
30 min 60 min
空白对照组 / 4 26． 27 ± 15． 45 16． 19 ± 10． 73
DMSO组 / 4 29． 06 ± 11． 21 14． 07 ± 6． 32
制草乌组 0． 5 8 42． 24 ± 17． 70 45． 41 ± 14． 88＊＊
总生物碱组 0． 25 8 40． 29 ± 23． 86 30． 53 ± 16． 48
0． 125 7 15． 35 ± 8． 67Δ 17． 11 ± 10． 34
0． 062 5 7 24． 49 ± 17． 71Δ 22． 19 ± 15． 01
生草乌组 0． 5 7 46． 78 ± 8． 77 44． 44 ± 28． 74＊＊
总生物碱组 0． 25 7 39． 18 ± 17． 01 59． 46 ± 30． 75＊＊ΔΔ
0． 125 8 29． 94 ± 10． 05 82． 47 ± 3． 90＊＊ΔΔ
0． 062 5 7 34． 05 ± 14． 39 47． 69 ± 13． 26＊＊ΔΔ
注:与 DMSO组比较，＊＊P ＜ 0. 01;与制草乌总生物碱 0. 5 mg /mL剂量组相比，ΔP ＜ 0. 05;与制草乌总生物碱同剂量组相比，ΔΔP ＜ 0. 01。
3. 5 Hoechst33258 染色荧光显微镜观察 Ho-
echst33258 染色中，正常心肌细胞核呈弥散均匀蓝
色荧光，经制草乌总生物碱、生草乌总生物碱损伤后
的心肌细胞，细胞多出现浓染致密的颗粒块状荧光，
即出现许多凋亡细胞。分别计数制草乌总生物碱
0. 125 mg /mL、0. 25 mg /mL 与生草乌总生物碱
0. 125、0. 25 mg /mL 连续作用心肌细胞 30、60 min
时细胞核凋亡数，计算核凋亡率。结果显示，由制草
乌与生草乌总生物碱导致的心肌细胞凋亡在 30 min
时核凋亡率最高，而作用 60 min 时，核凋亡率下降;
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经诃子汤炮制的制草乌总生物碱对心肌细胞凋亡损
伤弱于生草乌总生物碱，见图 2、图 3。
图 3 制草乌与生草乌总生物碱对心肌细胞凋亡的影响 (×10)
Fig． 3 Effect of TAAM and TAA on the apoptosis rate of cardiac cells (×10)
图 2 心肌细胞凋亡核率(%)
Fig． 2 Apoptosis rate of cardiac cells (%)
4 讨 论
本研究制备的乳鼠心肌细胞获得率接近 90%，
心肌细胞培养 48 h 后开始贴壁，镜下呈梭形、菱形
或多角形，伸出伪足，形成呈放射状排列的细胞簇，
并有自发性搏动。培养 3 d后，心肌细胞抗 α-Sarco-
meric actin免疫染色阳性，抗 Fibronectin 染色阴性，
表明所制备的心肌细胞未受成纤维细胞污染，可用
于后续实验。
诃子在蒙医药、藏医药中被称为“众药之王”。
诃子在解草乌毒性方面，传统认为方法有三:①炮制
草乌时使用诃子解毒;②使用草乌配方时加入诃子;
③发生草乌中毒时用以诃子为君药的组方解毒救
治［7］。已有研究报道认为，诃子与草乌配伍，诃子
通过与草乌生物碱特异性结合，使草乌生物碱在体
内缓慢释放和消除，缓解草乌毒性［8］。诃子能解草
乌中毒的机制是诃子对心脏的直接保护作用，防止
膜上类脂质双分子层排列紊乱，恢复细胞 Ca2 + -ATP
酶活性［9］，进而对抗乌头碱对心脏的毒性［10］。
本研究从诃子汤炮制草乌减毒方面，进一步探
讨蒙药诃子解草乌毒的机制。研究发现，诃子汤制
草乌及生草乌总生物碱均能损伤原代培养的心肌细
胞，表现出一定的细胞毒性。在与心肌细胞共同孵
育 30、60 min 时，制草乌与生草乌总生物碱能抑制
心肌细胞存活率，致细胞膜 LDH 漏出率增加，并出
现心肌细胞凋亡。比较诃子汤制草乌与生草乌总生
物碱对心肌细胞的毒性反应，结果显示，经诃子汤炮
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
May 2012
Vol． 34 No． 5
［制 剂］
拉马宁碱的大鼠在体肠吸收机制研究
王 丹1，2， 魏玉辉1， 张 帆1，2， 李育卿1，2， 武新安1*
(1. 兰州大学第一医院药剂科，甘肃 兰州 730000;2. 兰州大学药学院，甘肃 兰州 730000)
收稿日期:2011-10-31
作者简介:王 丹(1984—) ，女，硕士，研究方向:体内药物分析。Tel:15002641551，E-mail:wangdan8474@ yahoo． com． cn
* 通信作者:武新安(1962—) ，男，教授，博士生导师，研究方向:药物分析。Tel:(0931)8616392，E-mail:xinanwu6511@ 163． com
摘要:目的 研究拉马宁碱大鼠在体肠吸收机制。方法 采用大鼠在体单向肠灌流吸收实验模型，应用重量法校正灌流
液体积，通过反相高效液相色谱法测定灌流液中药物浓度，并考察吸收部位、药物质量浓度、P-糖蛋白(P-gp)抑制剂及有
机阳离子转运蛋白(OCTs)抑制剂对药物吸收的影响。结果 拉马宁碱在整肠段均有吸收，吸收速率常数(Ka)和表观吸
收系数(Papp)分别按照回肠、结肠、空肠、十二指肠的顺序下降;2 ～ 20 μg /mL 的药物质量浓度对 Ka 和 Papp无显著影响
(P ＞ 0. 05) ;含 P-gp抑制剂组与不含 P-gp抑制剂组相比，Ka 和 Papp无显著性差异(P ＞ 0. 05) ;含 OCTs 抑制剂组与不含
OCTs抑制剂组相比，Ka和 Papp也无显著性差异(P ＞ 0. 05)。结论 拉马宁碱为全肠段吸收，吸收机制为被动扩散，且 P-
gp及 OCTs对药物的小肠吸收基本无影响。
关键词:拉马宁碱;在体单向肠灌流;肠吸收
中图分类号:R966 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2012)05-0828-04
Intestinal absorption of lehmannine in rat
WANG Dan1，2， WEI Yu-hui1， ZHANG Fan1，2， LI Yu-qing1，2， WU Xin-an1*
(1. Department of Pharmacy，The First Hospital of Lanzhou University，Lanzhou 730000，China;2. College of Pharmaceutical Science，Lanzhou Universi-
ty，Lanzhou 730000，China
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(上接第 827 页)
制过的草乌总生物碱，其对心肌细胞的损伤程度低
于生草乌总生物碱，表现为细胞存活率较生草乌总
生物碱高，细胞膜 LDH漏出率降低，凋亡细胞较少，
表明采用诃子汤炮制草乌确实具有减轻草乌毒性反
应的作用。
综合本研究前期研究成果，可推断蒙药草乌采
用诃子汤炮制减毒的机制可能是:①诃子汤炮制草
乌，在水中浸泡使剧毒性生物碱部分水解而毒性降
低，诃子中大量鞣质与草乌生物碱生成难溶性盐，在
体内减缓吸收而降低草乌毒性［11］;②经诃子汤炮制
的草乌生物碱种类基本无改变，电喷雾质谱检测显
示经诃子汤炮制的草乌双酯型生物碱峰相对强度下
降，脂类生物碱峰相对强度增大［12］，说明诃子对草
乌具有明显的减毒作用;③诃子汤炮制后的草乌总
生物碱减缓对心肌细胞膜的损伤，减轻细胞核凋亡
而降低心肌细胞毒性反应。
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2012 年 5 月
第 34 卷 第 5 期
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