全 文 ：第 4期 蓖 麻 蚕 磷 酸 酶 研 究 6 0 7
表1 蓖闹 :蚕发育期血液中游离氨基酸的成份
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蓖 麻 蚕 磷 酸 酶 研 究
利 翠英 林典宝
(生物系 )
磷酸酶普温存在于脊椎动物中 。 过去对背
椎动物特别是哺乳类磷酸酶的研究 , 广泛而深
入 。 无脊椎动物磷酸酶的研穷还较少 , 昆虫方
面虽曹作研究 , 但对酶的性质和活力变化 , ’了
解还少 。 本献脸认蓖麻蚕为材料 , 用生化方法
检杳了碱性磷酸酶 ( 以下商称 A K P ) 和 酸 性
磷酸酶 ( 以下衙称 A C P ) 在蚕体内各祖傲中的
分布和性臂以及在变态止妙 ! ,的活力变化 。 希垫
对这雨种酶的性臂和变化 , 能有比蚊清楚的 了
解 , 以便在对它更深一层的研究中 , 提供脊料
和根据 , 并为蓖麻蚕变态机制的研究 提 供 奇
料 。
0 8 6中 山 大 学 学 报 9 1 64年
实毅材料是黄白 型蓖麻 蚕 。 A K P和A C P
的侧定基木上采用K ig n ( 19 51 )方法 。 酚的硕
色反皮产物用国产科伟 51 8— T型光 电比色舒进行浏定光密度 , 以求知酶的活力 。
拭费得到如下精果 :
一 A K p 和 A C P在蓖麻蚕体内 的分布及性质
1
.
A K P和 A C P在蓖味蚕体内分布 。 用 5
龄盛食期幼虫的不同粗微进行测定 , 发现中滕
祖撤中两种酶的活性都最大 , 后赐及焉氏管次
之 ; 脂肪体 、栋腺 、 血淋巴存在有一定的 A C P ,
但未发现有 A K P的存在或不明显 。
2
. 酶制品浓度与活力关系 。 根据上面拭
肠 , 我伊,皮用 5龄盛食期幼虫的中踢祖傲作为
制备酶制品的材料 , 以各种不同稀释度 ( 用冰
冷的双重蒸馏水稀释 ) 的酶制品进行 活 力 献
肠 , 精果发现每毫升一含有 5 0毫克中腾祖撇的酶
制品酶活性效力最大 。 用这个稀释度制成的酶
制品 , A K P和 A C P都具有最好 活 力 。 低于或
高于这个浓度的醉活性效力都皎差 。
3
. 底质浓度与醉活力关系 。 以各种不同
浓度的磷酸苯二新溶液作为酶的作用底霄 , 发
现酶分解底曹的能力 , 在底质浓度为O . O6 25 x
10
~ I M至O . 1 25 x 1-0 I M处 为 岌 合活 。 低于成
高于这个浓度的底臀 , 酶分解底霄的效力都较
差 。 因此 , 在实徽时可 皮 用 0 . 1 丫 10 ’ I M 的底
霄浓度作为酶作用物的最适底霄浓度 。
4
. 援冲液 p H值与酶活力关 系 。 以 o . I N
盐酸 、 0 . IN氢氧化钠 , 0 . I M棒 檬酸— 修檬酸勤 、 0 . I M碳酸勤— 碳酸氢勤等 援 冲剂 , 稠配成各种不同 PH援冲液 ( 用国产雷磁 24型酸度
舒校正酸值 )进行献墩 , 精果发现酶的活性在酸
和碱范围内各有一个高峰 。 浚有发现有第三个
峰 。 酸范围内酶活力最高峰在 PH S . 6地方 ; 碱
范围内的酶活力最高 峰在 PH 值为 10 . 4一 10 . 8
之简。 P H值趋于 2 或高于1 的两 端 , 酶的活
力即下降接近零 ( 图 1 ) 。
5
, 作用温度与酶活 力 关 系 。 在 10 。一
6 0
O
C ( 10
O
C
、
2 1
.
3
O
C
、
30
O
C
、
38
O
C 、 5 0
O
C 、 6 0
。
( :)
的各个不同温度下进行献赚 ,发现 A K P和 A C P
在所有这些温度都能起反皮 , 但分解底臀的程
1
。
0
0
.
9
0
.
8
0
.
7
0
.
6
酶活力ǎ光密度à
0
.
5
0
.
4
0
.
3
0
.
2
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
P H
图 1 . 援冲液 PH植与醋活力关系
第 4 期 蓖 麻 蚕 磷 酸 酶 研 究 6 0 9
度各不同。 一般靓 , 温度较高的 ( 30 ’ C以上至
6 0 0 C ) 分解底臀的速度极快 ; 温度较低的条件
下 , 酶对底熨的分解 flJ 蛟援 J漫 。 在10 “ C条件下
虽有反皮 ,但速度极慢 。在30a C以上 至 60 “ C 的
温度条件下 , 反应别只需在 5 一 30 分踵内便达
干衡 。
对于制酶材料及酶制品对热 的 稳 定性方
面 , 我 rI, 也曹做过一些献敌 。 发现新麟的 五龄
盛食期幼虫中踢祖撇 ,在冰冻条件下 (存放于电
冰箱内制冰小室 ) , 担过冷藏 3 个 月或更长一
些时阴 , 再取出制齐酶制品侧定活力 , 发现仍
能保持新解正常数仿。 至于制成的侮毫升含有
50 毫克中腾祖撤的酶制品 , 耙过献麟 , 存放于
冰箱内 0 。一 5 O C处 , 粹过一个星 期再进行测
定 ,酶活 力未发现有明显改变 。 父在2 8a 一 30q C
的室温条 flr 下释过献敌 , 酶制品放置 6 小时 ,
活力也不受影响 。 如果放 置于5护一 6 o0 C温箱
酶
活 1 . 2力
八 1 . 1光
密 1 . 0度
~ 0
.
9
0
.
8
0
.
7
内捉过 6 小时 。 助酶全部失去活力 。
6
. 作用时简与酶活力关系 。 采 用37 “ C温
度作为保温 , 耙过献脸 , 发现 A K p与 A C P对房
霄的水解速度与时简关系有所不 同。 A K I)水解
底臂的速度 , 在最初 1 5分箱内成喊撇关系 , 以
后 flTJ 逐渐减慢 , 至 60 分蹄反应达到 书衡 ; A以 ,
的反应 lnJ 蛟为援慢 , 在最社 60 分锁内 , 反应速
度基木上仍是厦换关系 , 田分掩以后 , 反应宁
见减慢 , 需至 3 小时以后 , 作用十达平衡 。
二 、 斌酸酶在蓖麻蚕变态过程中
活性变化
从 4龄眠蚕开始至只洲匕为成虫的各 个时期 ,
霄进行中踢 祖 撤 A K P和 A C P活性变化的初步
测定 ,粘果如图2所示 。从图 2可清楚地看出 , 蓖
麻蚕中滕祖袱的 A K r 和 A C P活性 , 在蓖麻蚕变
态各期中的变化是不同的 。 在幼虫眠明及化蛹
后至羽化的各时期 , A K P的活力郡极度降低 。而
眠起 、 铜食到盛食期 A K P
tIJ 表现出急速直钱 _ E升 ,
至盛食期达到最高峰 , 以
后又随着幼虫的老熟 、 于以
0
。
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2
、 、 、 、 _ 产一
L 一 L Z L s L一 L S L 6 P I P Z P s P今 A
图2 . 磷酸酶在蓖麻蚕变态过程中的活性。
— A K P - -一 A C PlL , 四龄眠蚕 ; L , , 五龄起蚕 ; L a , 五龄盛食期 ; L 4 , 熟蚕 ;
L s
, 熟蚕极 2 4小时 : L 。 , 监化蛹 ; P I .化蛹当时 ; P : , 化蛹后 6 0
小时 ; P a , 化蛹后 13 0小时 ; P ; , 化蛹后2 80小时 ; A , 成虫 。
蛹以至化蛹而急速下降 。
蛹期至习盯匕的 A K P 活 性
都表现山与眠期相似的极
低位。 从这单可明显的看
出 ,似乎 A K I ,的活力变化
跟蓖麻蚕消化件的功能和
活动有着密切关联 。 根据
B
o u r n e
( 1日5 3 )报导 , 认为
有升多根据靓明葡萄抓必
需磷酸化才能被吸收 , 而
磷酸酶的活动与这个过程
有关 ; 这是高等动物的一
姆 }青况 。 但蓖麻蚕消化道
祖撇 的 A K P 活动 , 是否
也与糖类的消化和吸收 有
关 , 是一个仇得进一步探
打的尚 怕 。 至 于 A以 ,的
活力变化 , 显然就浚有同
A K P 一样眼消化瞥 的 功
能和活动存在明显关系 。