全 文 ：阿魏侧耳组织分离
吴卫东

1 ,宋锡全2 , 张贵全2
(1.黔南民族师范学院生命科学系 ,贵州都匀 558000;2.贵州师范大学生物科学技术系 ,贵州贵阳 550001)
摘　要:采用组织分离的方法 , 选取阿魏侧耳[ P leurotus eryngii(DC.)Quel.Var.]子实体四个部位(菌柄上部 、菌柄中
部 、菌柄下部和菌肉)的组织块 ,接种在 PDA 培养基 、稻草培养基 、甜荞培养基 、苦荞培养基上进行恒温培养。 结果表明:
菌肉组织做分离试验效果显著;在 PDA培养基中菌丝生长最佳 , 明显超过其它分离部位组织和其它三种培养基。
关键词:阿魏侧耳;组织分离;培养基;培养;菌丝生长
中图分类号:Q93-331　　　文献标识码:B　　　　文章编号:1005-6769(2003)06-0061-0
Organisation Separation of Pleurotus Eryngii
WU Wei-dong1 ,SONG Xi-quan2 ,ZHANG Gui-quan2
(1.Life and Science Department ,Qiannan Normal College of Nationalities ,Duyun 558000 ,Guizhou , China;
2.Biologg and Science Technologg Department ,Normal University ,Guiyang 550001 ,China)
Abstract:Uses the organisation separat ion method , choosing the organisation of fou r places(the fungus handle top , fungus handle cent ral
section , fungus handle low er part and fungus meat)of subentity on Pleu rotus Eryugii t o attach to PDA cultu re medium , rice straw cul ture medi-
um , beet buckw heat cultu re mediums , bit ter buckw heat cultu re mediums to cultivate wi th constant tem peratu re.The result of the t rial show s
that:Separation trial ef fcct is done in the fungus meat organisat ion and is notable;The hyphues grow opt imumly in PDA culture medium , and
clearly surpasses the other separat ion place organisations and the other three kinds of culture medium s.
Key words:Pleurotus eryngii;Organizing separat ing;The culture medium;Cult ivating;Ahypha grow s.
0　前言
　　阿魏侧耳别名阿魏蘑菇 ,阿魏蘑 。属担子菌亚门 ,层菌纲 ,伞菌目 ,侧耳科。长于新疆荒漠区阿魏
沙滩药用植物阿魏上而得名。其子实体单生或丛生 ,肉肥嫩 ,味甘甜 ,口感好 ,入药有消积杀虫的作用 ,
对腹部肿大 ,腹部肿块 ,脘腹冷痛等均有疗效;市场售价很高 。是我国珍稀食用菌之一 ,目前正在推广栽
培[ 1] 。都匀市场已有分布 ,但产地多限于新疆地区 ,这在贵州省省内食用菌栽培领域里形成了空缺。
历史上如南荪北移驯化成功的经验可知[ 2] ,贵州地区阿魏侧耳引种栽培指日可待。而前提必须是获得
阿魏侧耳的纯菌种。目前获得纯菌种的方法有三种:孢子分离 、基质分离和组织分离[ 3] 。孢子分离操
作复杂 ,难度大 ,基质分离容易导致污染 。基于简便易行 ,效果好的特点 ,故选用组织分离的方法。组织
分离方法是利用菌体活组织 ,在适宜的培养基和生长条件下 ,由子实体发育阶段回复到菌丝生长阶段 ,
变成没有组织化的菌丝体 ,是获得菌种最简便的一种方法。[ 1]
1　材料和方法
1.1材料来源:
阿魏侧耳子实体(购于都匀市育英巷菜市场)
1.2 培养基配方:[ 3]
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　黔南民族师范学院学报 2003 年第 6 期
收稿日期:2003-09-03
　作者简介:吴卫东(1958-),男 , 广东翁源县人 ,黔南民族师范学院生命科学系高级讲师 ,研究方向:微生物。
A.PDA培养基:马铃薯 200g ,葡萄糖 20g ,琼脂 20g ,水 1000ml , pH自然。
B.稻草培养基:稻草 50g ,葡萄糖 20g ,琼脂 20g ,碳酸钙 1g ,硫酸镁 0.5g ,硫酸氢钾 1.5g ,水 1000ml。
C.甜荞培养基:甜荞 100g ,葡萄糖 20g ,琼脂 20g ,水 1000ml。
D.苦荞培养基:苦荞 100g ,葡萄糖 20g ,琼脂 20g ,水 1000ml。
1.3 试验方法
1.3.1培养基配制过程:
以PDA 培养基为例:用天平称取挖去芽眼的去皮马铃薯薄片 200g ,放入铝锅中 ,加水 200ml ,加热
煮沸 25到 30分钟 ,四层纱布过滤取其滤液。改为小火加热 ,加入琼脂 ,玻棒搅拌至全部溶解 ,已防其沾
底焦糊 ,加入称量好的葡萄糖 20g ,加水补至 1000ml ,然后用漏斗装管。培养基的装置量为试管长度的
1/5 ,装好后用镊子夹着棉花把试管内壁靠管口的部分沾上的培养基擦净 ,塞上棉塞 ,牛皮纸包好 ,放入
高压灭菌锅中灭菌 ,灭菌完毕趁热将试管取出摆斜面 ,斜面长度应达试管的 1/2处;最后进行无菌检验 ,
即随机抽出几支试管放入 25℃恒温箱中 3至 5天 ,观察试管斜面有无微生物菌落生长 ,没有则表明灭
菌已彻底 ,可用于试验;反之亦然。
其它培养基配制方法基本相同 。
1.3.2子实体的组织分离:
在无菌箱中选取生长健壮 ,朵形好 ,八成熟期的阿魏侧耳子实体 ,用 75%酒精做表面消毒后 ,按无
菌操作将子实体纵剖 ,用无菌刀在子实体上四个不同部位划“井”字(图1);再用接种钩勾取 2×3×3mm
大的组织块 ,接种于四种不同培养基试管斜面正中。接种钩须在酒精灯火焰上灼烧过 ,并让其冷却 ,以
防温度过高把组织块菌丝烫死 。所勾取的组织块应置于试管斜面的中部 。每种培养基上接种三管 ,接
种完后将试管放入 25 ℃的恒温箱中培养。
1.3.3菌丝生长状况测定[ 4]
1.3.3.1 生长速率的测定:
用铅笔在接种部位做记号 ,每天观察 、测量和记录菌丝生长长度一次 ,每次测量重复三回 ,取其平均
值 ,以减少误差 。直至菌丝长满培养基斜面。
1.3.3.2 菌丝质量的记录:
包括萌发时间 ,菌丝密度 ,爬壁能力 ,满管时间等。
2　结果和讨论
　　各分离部位菌丝在不同培养基中的生长情况比较(见表 1 、表 2)。
表 1:各部位菌丝在不同培养基中的生长速率比较(单位:cm/d)
培养基类型 PDA 培养基 稻草培养基 甜荞培养基 苦荞培养基 平均值
菌柄上部 　0.63 　0.37 　0.6 　0.74 0.585
菌柄中部 　0.68 　0.48 　0.61 　0.38 0.538
菌柄下部 　0.72 　0.41 　0.57 　0.3 0.5
菌肉 　0.8 　0.55 　0.69 　0.5 0.635
平均值 　0.708 　0.453 　0.619 　0.48
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　黔南民族师范学院学报 2003年第 6期
表 2 各培养基中各分离部位组织块菌丝生长质量比较
培养基类型 PDA 培养基 稻草培养基 甜荞培养基 苦荞培养基
分离部位 a　b　c　d a　b　c　d a　b　c　d a　b　c　d
萌发时间(d) 4　3　3　3 4　4　4　3 3　3　4　2 4　4　3　4
爬行能力 　　较强 弱 强 强
密度 　　较密 纤细 密 密
组织块变化 　增 0.5 倍 不变 稍增大 不变
满灌天数 9　10 11 8 16 13 17 12 11 11 11 10 13 16 21　9
　　从表 1可知 ,阿魏侧耳菌肉组织块在 PDA培养基中生长速率最大 ,为最佳培养基;其次为甜荞培养
基 ,苦荞培养基 ,稻草培养基。菌肉组织块在四个分离部位菌肉组织中 ,为最佳分离部位;其次是菌柄上
部 ,菌柄中部 ,菌柄下部。
从表 2可知 ,菌肉组织块在培养基中萌发最早 ,满管时间最短;在 PDA 培养基中各部位组织块菌肉
长势最好 ,从而证明菌肉是阿魏侧耳分离培养基最佳部位;PAD培养基是最佳培养基。
运用组织分离技术培养阿魏侧耳母种 ,通过选择 4种培养基对 4个分离部位的培养结果比较研究
发现:第一 ,各组织在 PDA 培养基中生长速度最快 ,质量最高 ,菌丝外观好 ,粗壮 ,浓密 ,爬壁能力强 ,明
显超过其它培养基;其它依次为甜荞培养基 、苦荞培养基 、稻草培养基。究其原因:①PDA 培养基以马
铃薯为主要营养来源 ,马铃薯营养丰富 ,在添加了适量的葡萄糖后 ,培养基中的营养成分是最适阿魏侧
耳菌丝生长的;②甜荞培养基以甜荞粉做为主要营养来源 ,甜荞营养也很丰富 ,但在添加葡萄糖之后可
能C/N 比偏大或偏小 ,或某些维生素含量不够 ,从而导致培养效果不如 PDA 培养基好;③苦荞培养基
与甜荞培养基相似 ,但苦荞粉中可能含有某些抑制组织块萌发的成分 ,使培养基效果不如甜荞培养基
好;④稻草培养基以稻草作为主要营养来源 ,稻草的营养不如马铃薯 、甜荞粉 、苦荞粉的好 ,再者所用稻
草存放已久 ,所含营养以部分丢失 ,故培养效果是最差的。第二.以菌肉做分离实验效果显著 ,菌丝萌发
早 ,生长速度快 。其次为菌柄上部 ,菌柄中部 ,菌柄下部。这是由于各部分组织中菌丝的含量和所含菌
丝的活力决定的 。如菌柄下部组织块培养效果最差 ,可能是:①该部菌丝生长时间最长 ,已老化;②该菌
丝生长时间长 ,菌子实体细胞已加厚 ,影响萌发和生长 。菌柄中部组织块效果不好 ,则可能是该部菌丝
已泡囊化的原因 。[ 5] [ 6]
可见选用 PDA培养基 、菌肉组织对阿魏侧耳进行分离培养 ,能缩短栽培周期 ,获得优质母种 ,是在
实际生产栽培中获得成功 、取得最大的经济利益的基础 。
参考文献:
[ 1] 黄年来.中国大型真菌原色图鉴[ M] .北京:中国农业出版社.1998.
[ 2] 徐静彬等.南荪北移驯化成功[ J] .食用菌.1990 ,(1).
[ 3] 宋锡全 , 刘保东 ,邱奉同.新编食用菌栽培学[ M] .赤封市:蒙内古科学技术出版社 , 2001.
[ 4] 林娟等.代料栽培灵芝组织分离技术[ J] .食用菌.1999 ,(2).
[ 5] 杨新美.中国食用菌栽培学[ M] .北京:农业出版社 , 1998.
[ 6] 李应华.食用菌栽培与加工[ M] .北京:金盾出版社 , 1989.
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