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蜜环菌菌种的分离与复壮



全 文 :菌丝恢复生长所需时间因不同菌种的特性而异 ,香菇 2
~ 4夭 ,金针菇 z ~ 3天 ,蘑菇 2一 5天 ,平菇 l ~ 2天 ,黑木
耳 1夭 ,灵芝 2天 ,获等 1~ 3天 ,猪荃 3天 ,球盖菇 2~ 3天 。
蒸馏水保存的菌丝生长速率与 4 ℃斜面和液氮保藏的
无显著差异。 以麦粒基质培养的菌种和 P D A 菌种相
比 ,蒸馏水和液氮保存后 ,菌丝恢复 、生长快旺盛 。蒸馏
水保存的菌丝生长正常 ,保持了原有的形态特征 .
纤维素酶活性测定结果表明 ,香菇 、灵芝和球盖菇
纤维素酶活性较强 ,刚果红染色后透明圈大而明显 . 金
针菇、 蘑菇 、 获等和猪等透明圈明显 ,但平菇的透明圈
极小 ,木耳菌种透明圈不明显 ,表明纤维素酶活性因不
同菌种特性而异 ,但所有蒸馏水保藏菌种的酶活性与
液氮及4 ℃斜面保藏的无显著差异 。麦粒基质和琼脂基
质培养的菌种之间酶活亦无显著差异 (表 3) 。
表 3 保燕方式对菌种纤维紊酶的影响 (单位 : 。 m / m m )
菌种” . ’ 蒸馏水保藏 J 液氮保藏 斜面
编号 麦较 琼脂 麦位 琼脂 保藏
L e l 一 1 5 / 3 5 一 一 2 1 / 3 5
L e Z 一 1 0 / 3 0 一 9 / 3 0 一
L e 3 2 0 / 3 5 1 9 / 3 5 一 一 一
L e 6 1 4 / 3 0 1 9 / 3 5 一 一 17 / 3 4
L e 7 一 1 4 / 3 0 一 2 2 / 33 一
F l l 3 0 / 3 3 2 6 / 2 9 3 1 / 3 4 2 5 / 28 2 8 / 2 8
F 1 2 2 8 / 3 2 2 9 / 3 3 3 3 / 3 7 2 7 / 3 1 2 2 / 2 6
F 1 3 一 2 9 / 3 3 2 3 / 2 7 2 6 / 30 2 2 / 2 6
A g b i 一 1 8 / 2 2 一 1 9 / 26 一
A g b : 1 8 / 2 6 一 一 一 18 / 2 1
P
、 、 3 4 / 34 3 4 / 3 4 一 一 一
P一: 3 5 / 3 5 一 一 3 4 / 3 4 一
P
: : 一 2 8 / 2 7 一 2 7 / 2 6 一
P
1 . 一 3 2 / 3 2 3 2 / 3 2 3 2 / 3 2 一
A u l 透 明圈不明显
A u Z 透明圈不明显
P o l 一 2 0 / 2 3 一 2 2 / 2 5 22 / 2 5
G r l 一 2 9 / 3 3 一 2 9 / 3 1 2 9 / 3 1
G a l 一 3 0 / 3 7 一 一 2 7 / 3 4
S t l 一 2 3 / 3 0 2 3 / 2 9 2 4 / 3 1 一
, 蜜环菌菌种的分离与复壮 ,
陈燕妍
(中国科学院徽生物所 , 北京 1 0 0 0 5 0 )
三 、 讨 论
蒸馏水保藏方法适于绝大多数食用菌菌种保藏 .
本研究中 ,蒸馏水保藏的不同属 、种的菌种除长裙竹荪
菌种外均成活 ,且菌种转接后恢复生长快 ,菌丝旺盛 ,
尤其是麦粒基质的菌种 ,菌丝生长速度更快 . 蒸馏水保
藏菌种其菌丝形态特征和纤维素酶活性与4 ℃斜面保
裁及液氮保藏的菌种无显著差异 。且蒸馏水保藏简便 ,
占空间小 ,成本低 ,减少了连续短期转管次数 .
蒸馏水保藏需用带盖试管 ,棉塞易受潮易招致杂
菌污染 。蒸馏水保藏菌种要求菌龄适当 ,菌丝生长健
壮 。据报道 ,病原真菌用蒸馏水可保存 1~ 2 0年 ,食用菌
菌种燕馏水最适保裁期尚在继续研究之中 。
一 1 6 一
蜜环菌 ( A o l’ ac ia , le a) 在我国分布很广 。它
是一种美味的食用菌 ,同时也是中药天麻的共生真菌 ,
利用共生关系可以提高天麻的产量和质量 。 近年来 ,随
着科研工作的不断深入 ,人们对蜜环菌进一步的进行
开发利用 ,试生产了针剂 、 口服液之类 ,通过试验和临
床 ,证明它与天麻有相似的功能 . 为此 ,一些生产单位
进行生产和批量生产 ,但在生产中常发现菌种退化 、不
长菌索等间题 。本文主要介绍蜜环菌菌种的形态特征 、
分离和复壮的方法 。
〔一 )供试菌种及来源 5 . 1 30 菌株 ,为我所采集 ,
经组织分离得到 , 5 . 14 6菌株 ,引自北京药物研究所 。
(二 )菌种的形态特征 上述两株蜜环菌在 P D A
培养基上 ,菌丝白色 , 逐渐变成褐色短茸毛菌落 , 局限
型 , 而后菌丝交织 , 呈白色 、 坚硬 、 多分枝似树根状的菌
索 , 菌索一般很长 ,一直延伸至充满培养基深部 。 在黑
暗中菌索产生蓝绿色的荧光 ,荧光的强弱与菌索的活
力成正比 ,菌索老后不发光 。菌索尖端延伸到培养基表
面上 ,并逐渐角质化变为红揭色膜质 . 在光照 、 气温较
高和保藏期较长时 ,则基内菌索也慢慢角质化 , 成为红
褐色膜质 ,有时还产生大量紫红色色素 ,培养基变为紫
红褐色 。 此时移接 , 只能形成少量的短茸毛的褐色菌
落 , 不形成菌索 ,同时产生大量紫色色素 。 一般出现这
种情况 ,生产单位就认为是菌种退化 ,没有生产价值 。
(三 )菌种分离与复壮 ①低温 、 黑暗保藏 :菌种培
养好后 ,尽快放入低温保藏 (4 ℃左右 ) ,不见光或少见
光 ,这样可以推迟菌索的角质化 ,延长保藏时间 。 ②缩
短保藏期及时移接 : 菌种培养好 ,基内菌索为白色 。 白
色菌索角质化需要一定的时间 ,生产者要掌握这一规
律 ,应在菌索未形成褐色角质膜前进行移接 。移接时挑
取一小段白色菌索 ,接在新鲜培养基上进行适温培养 ,
长出的大量白色新菌索 ,具有较强的活力 。③菌索角质
膜的剥离 :首先将培养皿 、 解剖刀等工具进行高压灭
菌 ,再在无菌室中将蜜环菌斜面勾出 ,放入无菌培养皿
内 ,用两把无菌解剖刀轻轻地对蜜环菌的角质膜进行
剥离 ,直至露出白色菌索 ,取白色菌索一小段 ,移入综
合 P D A 斜面或平板上 ,在25 ~ 28 ℃下培养 7~ 10 夭 。 在
培养过程中要经常观察 ,多次进行纯化 ,则培养基内又
可大量形成粗壮的白色菌索 ,供生产上使用 。此法较易
引起污染 ,一定要严格无菌操作 。 ④不断更换培养基 :
我们在保藏蜜环菌的过程中 , 经常交替使用 自然培养
基和半合成培养基 ,这样培养基的更换可以 延缓角质
膜的形成 . 我们常用的培养基配方有以下四种 . A . 玉
米粉培养基— 玉米粉 30 ~ 4鲍 ,蛋白陈 209 ,菊萄糖
2 0 9
,琼脂 1 7 9 . 配制时先将玉米粉加 5 0 0m l 水煮沸 ,琼
脂用另外 s o m l 水煮溶化 ,然后两者混合 ,再加入其他
成分 ,装人三角瓶或试管中 ,进行高压灭菌 。 B . 20 环玉
米粉培养基— 将 40 9 玉米粉装人 50 ml 三角瓶中 ,加入 2 0 ml 水 ,加棉塞 ,包好 , 15 磅灭菌 30 分钟 . C . 面包
粉培养基— 将 2 0 9 的干面包粉装入 50 ml 三角瓶中 ,加人 20 0动 蒸馏水 ,再加 3 . 6 9 的琼脂粉 , pH 自然 ,
1 5磅灭菌 30 分钟 . D . 综合 P D A 培养基— 20 %马铃薯汁 1。。。m l ,磷酸二氢钾 3 9 , 硫酸镁 1 . 59 ,葡萄糖 2馆 ,
V B
I徽量 ,琼脂 15 9 , pH 6 , 15 磅灭菌 3。分钟 . 试验表明 ,
使用培养基 B 和 C ,菌种可以保藏较长时间 ,菌索不易
退化 ,不易形成角质膜 ,可保持菌索有较强的活力 。
破么必6 以乡峨么喊` 进乡政山遮 6 渡么必少赶 毋曳么渡吧动 ` 魂 6 政止政 ` 该肠改乙遮肠改碑
、 六个平菇菌株比较试验、
陈虞禄
(广东韶关市第二林科所 , 5 2 2 0 2 3 )
, 北方地区平菇露地畦栽技术 、
东北北部地 区气温低 ,干燥多风 , 空气相对湿度
低 . 为了发展平菇生产 , 我们进行了平菇室外畦栽试
验 ,取得了初步效果 ,现将有关技术简介如下 :
(一 )选地作畦 阳 畦应设在楼房南向阳干燥地
方 。畦长 s m ,宽 6浇 m ,深 s o e m ,周围加筑 3 c0 m 的高堤 。
畦上要架弓棚覆薄膜和草帘 , 畦底及四周夯实 。铺料前
向畦面喷洒一次10 %的石灰水进行消毒 。
(二 )供试材料 菌种为新平 1 0 1 2 . 培养料配 比为
锯末 78 % ,麦鼓2。% , 白糖和石膏粉各 l % , p H 值自然 ,
含水量 60 %左右 。
(三 )烫料播种 培养料总量 3 2 . s k g ,拌匀后加足
量开水拌料 ,堆闷 3小时再铺床 ,料厚 l倪 m ,采用穴播
(穴距 sc m ) ,最后在料面撤一层菌种 ,播种量为干料重
的 10 %左右 。播后先贾膜再盖纸遮直射光 。 畦四周堤上
种上豆角 , 以便出菇期搭豆角棚遮阳 .
(四 )管理技术 发菌期畦温控制在 30 ℃左右 ,高
于 30 ℃时将四周薄膜掀起降温 , 畦温低时将薄膜封严 。
于 4月16 日播种 , 6月 10 日菌丝长满料并出菇蕾 ,此时揭
膜搭弓棚 ,整理豆角棚 , 畦内早晚各喷一次水 。
(五 )栽培结果 试验于 6月 1 9~ 29 日收头潮菇
2 2
.
g k g
,
7月高温后终止出菇 。 s月 4 ~ 1 0 日收第二潮菇
4
.
88k g
。后因连降数次暴雨 ,菌块被淹而报废 。 两次总
共收菇 2 .7 28 k g ,生物学效率为84 % 。 试验结果表明 ,在
北方用阳畦栽培平菇是完全可行的 ,尤其是利用豆角
棚遮阳 ,农户在菜园地 内也可推广应用 。但播种期以 4
月中旬为好 ,不能晚于 5月 , 否则大量出菇期正值 7~ 8
月高温多雨 ,就难以保证栽培收益 。
黑龙扛省北安农校 李丹 陈淑范 杨 昆
为了选出适应本市自然条件下栽培的优良平菇菌
株 , 1 9 86年对我所引进的六个平菇菌株进行了比较试
验 ,筛选出优良菌株 P : ; ,经过菇农多年试种 ,一致得到
好评 ,现将结果报告如下 。
一 、 材料和方法
(一 )供试菌种 P l 。 、 sP : ,引自广东省微生物所 ,
P
: 。引自韶关市人防办 ;宁杂 1号 、 丹 1 0 1弓l自南京师大 ;
平菇引自上海农科院食用菌所 。
(二 )菌丝生长试验 于 1 9 8 6年 n 月 5 日按常规法
将上述各菌株接入 P D A 培养基上 ,置 24 一 25 ℃恒温箱
培养 ,重复 6次 ,接种 10 天后观测各菌株菌丝 的平均长
速和长势 。
(三 )栽培试验 采用室内床栽 , 以棉纺厂下脚料
三破子为培养料 ,每小区面积 .0 64 m , ,用料 gk g ,拌料
时加入石灰 1% ,多菌灵 0 . 2% ,石膏 1% ,料水 比 1 : 1 . 6 。
各菌株均重复 5次 ,随机排列 。 于 n 月 21 日采用二层撒
播法 ,用种量每小区 2瓶 ( 7 5 0m l 装量 ) ,播后稍拍平 , 盖
膜至菌丝 吃透料面 ,当菇床现蕾时喷一次重水 ,加强通
风透气 ,保持一定的散射光 , 以后视料湿度而轻喷 。各
试验小区管理基本一致 。
二 、 结果与分析
(一 )菌丝长势 各菌株在 P D A 培养基上的长势
有明显差异 , P : 。和宁杂 1号 ,菌丝粗壮 ,长势旺 ,菌落呈
厚绒毛状 ,色浓白 , P 、 。 、 aP 川平菇菌丝长势中等 ,丹 101
表现较差 ,菌落稀疏 ,菌丝纤细 。 10 天后菌丝长满试管
斜面的百分率依次为 5 9 . 5 、 7 5 . 4 、 7 6 . 5 、 7 5 . 6 、 7 0 . 4和
6 7
·
5%

(二 )出菇积温 各菌株从菌丝布满料面至第一次
采菇时 , 测定出菇积温 . 积温高的有丹 10 1 (25 天 ) 、 平
菇 ( 2 4天 ) 分别为 3 5 5 . 6℃和 3 4 2 . 9 ℃ , 其次是 P I 。 ( 2 4
天 ) 、 宁杂 1号 ( 2 1天 ) , 分别为 3 0 4 . 8 ℃和 3 0 7 . 2℃ ; 积
温低的有 P : ` ( 2 7天 ) 、 P S , , ( 1 8夭 ) , 分别为2 5 6 . 0℃ 和
26 .8 8 ℃ 。 因此 , P : . 、 aP , 1菌株的始收期都比其他菌株要
早 2~ 7天 。
(三 )子实体经济性状 从下表测定的结果看 , 经
济性状最好的是 P Z; 菌株 ; 依次为 lP 。 、 平菇 、 丹 10 1 、
P 。 ; ,较差的是宁杂 1号 。
一 1 7 一