全 文 ：ChineseJournalofNewDrugs2010, 19(22)
2103　　
中国新药杂志 2010年第 19卷第 22期
[基金项目 ] 　新疆维吾尔自治区高校科研计划(XJEDU2009S49);
新疆医科大学创新基金(XJMEDU2007-14)
[作者简介 ] 　李改茹 ,女 ,副教授 ,主要从事天然药物分离分析研究
工作。联系电话:15909000768, E-mail:gruli104@hotmail.com。
·实验研究·
荧光法测定维药刺糖中黄酮类化合物含量
李改茹 ,常军民 ,程煜凤 ,王　研
(新疆医科大学药学院 ,乌鲁木齐 830054)
　　[摘要 ] 　目的:建立维药刺糖中黄酮类化合物含量测定的荧光分析法。方法:根据黄酮类化合物的荧
光性质 ,以芦丁为标准品 ,用荧光分析法测定了刺糖中黄酮类化合物的含量;并系统考察了溶剂 、pH值 、放置
时间对荧光强度的影响 。结果:在 70%的乙醇中加入 pH值 7.0的三酸缓冲溶液 ,芦丁荧光强度最大 ,线性
范围在 2.7×10-7 ～ 1.35×10-5 mol·L-1 , r=0.999 5,平均回收率为 98.9%(RSD=1.9%, n=9)。结论:该
方法准确度高 、灵敏度高 ,适用于药用刺糖中黄酮类化合物的含量测定。
[关键词 ] 　黄酮;荧光法;刺糖
[中图分类号 ] R927.2　　[文献标志码 ] A　　[文章编号 ] 1003-3734(2010)22-2103-03
Determinationoftotalflavonesinsaccharumalhagibyspectrofluorimetry
LIGai-ru, CHANGJun-min, CHENGYu-feng, WANGYan
(ColegeofPharmacy, XinjiangMedicalUniversity, rǜmqi830054, China)
[ Abstract] 　Objective:Toestablishfluorescencemethodforthedeterminationofflavonecontentsinsaccha-
rumalhagi.Methods:Accordingtofluorescentcharacterofflavonoids, theflavonecontentsinsaccharumalhagi
weredeterminedbyspectrofluorimetry.Results:Thefluorescencewasthestrongestwhilesolventwas70%ethanol
withBriton-Robinsonbufer(pH7.0).Thelinearconcentrationrangeofrutinwas2.7 ×10-7 ～ 1.35 ×10-5
mol·L-1 withacorelationcoeficientof0.999 5.Theaveragerecoveryofsampleswas98.9% (n=9, RSD=
1.9%).Conclusion:Themethodissimple, rapidandaccurate, whichissuitablefordeterminationofflavone
contentsinsaccharumalhagi.
[ Keywords] 　fluorescencemethod;totalflavone;saccharumalhagi
　　刺糖为豆科植物骆驼刺 (Alhagipseudlhagi.
Desv)叶中分泌液凝结而成的糖粒。刺糖为一味传
统维吾尔医药 [ 1] ,在 《维吾尔常用药材 》中早有记
载 ,具有滋补强壮 、精液浓缩 、益精壮阳 、涩肠止痛 、
祛痰止咳的功效 [ 2] ,至今临床仍在使用 。维吾尔医
将之与其他药材配伍 ,用于治疗痢疾 、腹泻 、胃脘胀
痛 、血尿等疾病。
刺糖中主要成分为糖类化合物 ,作者至今未见
刺糖中黄酮类化合物的研究报道 。药用植物中总黄
酮含量测定方法一般是紫外 -可见分光光度法
(UV)[ 3-4] ,其方法简单 ,便于普及 ,但是灵敏度不
高 ,准确度易受影响。本实验根据黄酮类化合物显
荧光的性质 [ 5-6] ,采用荧光分析法测定刺糖中黄酮
类化合物的含量 ,为今后新疆药用植物资源的进一
步开发和利用提供基础研究资料。
仪器与试药
RF-5301型荧光分光光度计 (日本岛津公
司);万分之一电子天平(梅特勒公司);芦丁对照品
(中国药品生物制品检定所 ,批号:100080-200707,
供含量测定用)。刺糖(批号:20080412, 20090510,
20091221)购自本地药市 ,经 60℃恒温干燥 ,过 80
ChineseJournalofNewDrugs2010, 19(22)
2104　
中国新药杂志 2010年第 19卷第 22期
目筛 ,备用。其他试剂均为分析纯 。
方　　法
1　芦丁对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品 10.0mg,置 50mL量瓶
中 ,用乙醇溶解并稀释至刻度 ,得浓度为 0.20mg·
mL-1的储备液 。精密移取 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0
mL芦丁储备液于 25mL量瓶中 ,加入 pH值 7.0的
三酸缓冲液 2.0mL,用 70%乙醇稀释至刻度 ,即得。
2　供试品溶液的制备 [ 4]
取刺糖样品 1.0g,加乙醇 40mL,在 80℃水浴
回流提取 2次 ,每次 2 h,过滤 ,滤液用乙醇定容至
100mL。再从中移取 1mL,加入 pH值 7.0的三酸
缓冲液 2.0mL,最后用 70%乙醇定容至 25 mL,摇
匀 。静置 30min,待测。
3　总黄酮含量测定
在激发波长 λex=432 nm,发射波长 λem=514
nm条件下测定系列芦丁标准溶液的荧光强度 ,绘制
标准曲线 ,然后在上述相同的条件下测定样品的荧
光强度 ,根据回归方程计算含量。
结果与讨论
1　芦丁的激发光谱及发射光谱
按实验方法选择光谱通带宽度 10.0nm,对芦
丁标准溶液的激发及发射光谱进行扫描 ,所得激发
及发射光谱见图 1。最大激发和发射波长分别为
432nm和 514nm。
1激发光谱 , 2发射光谱
图 1　芦丁的激发光谱和发射光谱
2　测定条件的选择
2.1　溶剂的选择　黄酮类化合物易溶于甲醇 、乙
醇 、乙酸乙脂 、乙醚等有机溶剂 ,难溶于水 。考虑到
醇类溶剂常用于植物中黄酮类化合物的提取 ,因此
实验选用乙醇作溶剂。实验考察了不同浓度的乙醇
溶液对荧光强度的影响 ,见图 2。结果表明 ,乙醇浓
度越大 ,芦丁荧光强度越强;但当乙醇浓度超过
70%,溶液荧光强度变化较小 ,本实验选用 70%的
乙醇作溶剂 。
图 2　乙醇浓度对荧光强度的影响
2.2　溶液酸度的影响　为了考察溶液的 pH值对
黄酮类化合物荧光强度的影响 ,分别在溶液中加入
了不同 pH值的三酸缓冲溶液。实验结果表明 ,当
溶液 pH值为 7.0时 ,溶液荧光强度最大 ,且趋于稳
定。所以本实验选择加入 pH7.0的三酸缓冲液控
制溶液的酸度。
2.3　静置时间的影响　在上述实验条件下 ,将溶液
静置于室内 ,避免阳光直射 ,并取不同时间点测定芦
丁标准溶液的荧光强度 。结果表明 ,溶液荧光强度
在 30min时达到最大(见图 3),之后略有下降 ,但趋
于稳定 。所以本实验选择放置 30min后测定其荧
光强度 。
图 3　放置时间对荧光强度的影响
3　标准曲线及方法的检出限
在实验选定的最佳条件下 ,配制不同浓度的标
准品溶液 ,对线性范围进行考察。实验结果表明 ,荧
光强度与芦丁浓度在 2.7×10-7 ～ 1.35×10-5 mol·
L-1范围内具有良好的线性关系 ,其线性回归方程为
Y=10.485X+1.372 8,式中:Y为荧光强度 , X为芦
ChineseJournalofNewDrugs2010, 19(22)
2105　　
中国新药杂志 2010年第 19卷第 22期
丁的浓度(μg·mL-1)。相关系数 r=0.999 5,说明
荧光强度与芦丁浓度线性显著相关 ,数据重现性良
好 。方法检出限为 6.96×10-8 mol·L-1。
4　样品测定及回收率试验
按上述实验方法测定了 3批维药刺糖中黄酮类
化合物的含量 ,对样品溶液进行了平行测定(n=
5),结果见表 1。
表 1　不同批次刺糖中总黄酮的含量 n=5
样品 测定含量 /% 平均含量 /% RSD/%
刺糖 1(20080412) 2.18 2.16 2.20 2.24 2.26 2.21 1.9
刺糖 2(20090510) 2.16 2.19 2.22 2.25 2.24 2.21 1.7
刺糖 3(20091221) 2.20 2.24 2.18 2.21 2.16 2.20 1.5
　　为了验证方法的准确性 ,称取已知含量的刺糖
样品(批号:20091221)共 9份 ,每份约 0.5g,精密称
定 。按低 、中 、高浓度分别精密加入芦丁对照品
2.7, 5.5, 16.5mg,每个浓度 3份 ,按 “供试品溶液的
制备”项下进行样品处理得所需溶液 ,用上述方法
进行测定并计算回收率 ,结果见表 2。平均回收率
为 98.9%, RSD为 1.9%(n=9)。
表 2　样品回收率试验结果 n=9
称样量 /g 样品含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD/%
0.494 0 10.87 2.7 13.51 97.8 97.5 2.3
0.501 2 11.03 2.7 13.60 95.2
0.498 9 10.98 2.7 13.67 99.6
0.499 6 10.99 5.5 16.40 98.4 99.9 1.4
0.501 1 11.02 5.5 16.58 101.1
0.492 3 10.83 5.5 16.34 100.2
0.500 6 11.01 16.5 27.32 98.8 99.4 1.9
0.502 3 11.05 16.5 27.21 97.9
0.500 3 11.01 16.5 27.75 101.5
5　结论
采用荧光分析法测定维药刺糖中总黄酮的含
量 ,考察了溶剂 、pH值 、静置时间等实验条件对荧光
强度的影响 ,提高了测定结果的准确性 。
采用荧光分析法直接测定维药刺糖中总黄酮含
量 ,检出限达到 6.96×10-8 mol·L-1。方法灵敏度
高 ,其准确性 、重现性 、线性关系均能达到科研和生
产的要求 ,操作简便 ,是药用植物中总黄酮含量测定
的较佳方法。
[ 　参　考　文　献　]
[ 1] 　李君山 ,刘勇民 , 蔡少青 , 等.维吾尔医用骆驼刺类药材的资
源 、商品流通及民间应用研究 [ J] .中国民族医药杂志 , 1996,
2(2):39-40.
[ 2] 　张贵杰 ,李宁 ,倪慧 ,等.骆驼刺属植物的化学成分与生物活性
[ J].国外医药·植物药分册, 2008, 23(4):157-159.
[ 3] 　张雪 ,丁长河.紫外分光光度法检测山楂总黄酮方法的建立
[ J].食品工业科技 , 2007, 28(7):200-202.
[ 4] 　方芳 ,于峰 ,刘娟 ,等.紫外分光光度法测定满山红总黄酮含量
[ J].黑龙江医药科学 , 2007, 30(6):33-34.
[ 5] 　曹叶霞 ,张海容 ,史文灵 ,等.荧光分析法测定沙棘叶中总黄酮
的含量 [ J] .中国酿造 , 2007, 172(7):62-64.
[ 6] 　王艳.荧光分析法测定桑叶中总黄酮含量的研究 [ J] .中国酿
造 , 2008, 188(11):90-91.
编辑:周卓 /接受日期:2010-07-20