全 文 ：ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定胆南星中胆酸含量
王光函１，２，姜 鸿１，邹桂欣１，尤献民１＊
（１．辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳１１００３４；２．辽宁中医药大学，辽宁 大连１１６６００）
摘 要：目的：建立ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定胆南星中胆酸含量的方法。方法：色谱柱为Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ Ｃ１８色
谱柱（４．６ｍｍ×２００ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈－水（３６∶６４），柱温为２５℃，流速为１．０ｍＬ·ｍｉｎ
－１。检测
器为ＥＬＳＤ，漂移管温度为１００℃，载气流量为３．０Ｌ·ｍｉｎ－１。结果：胆酸在０．１４～１．４μｇ进样量范围内
与其峰面积积分呈良好的线性关系（ｒ＝０．９９９ ４），平均加样回收率为９７．１３％，ＲＳＤ＝１．８０％。结论：该
方法简便准确，灵敏度高，可用于胆南星中胆酸含量的测定和产品质量控制。
关键词：胆南星；ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ；胆酸
中图分类号：Ｒ２８４．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３－２１９７（２０１４）２２－０００８－０２
收稿日期：２０１４－０７－１１
基金项目：国家科技部重大新药创制项目（２０１２ＺＸ０９１０２２０１－００５）
作者简介：王光函（１９８０－），女，辽宁省中医药大学在职博士研究生，辽宁省中医药研究院副研究员，研究方向为中药新药质
量控制。
通讯作者：尤献民（１９６４－），男，辽宁中医药研究院研究员，研究方向为新药开发。
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｂｉｌｅ Ａｒｉｓａｅｍａ ｂｙ ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ
Ｗａｎｇ Ｇｕａｎｇｈａｎ１，２，Ｊｉａｎｇ Ｈｏｎｇ１，Ｚｏｕ Ｇｕｉｘｉｎ１，Ｙｏｕ Ｘｉａｎｍｉｎ１＊
（１．Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１００３４，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄａｌｉａｎ １１６６００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｂｉｌｅ Ａｒｉｓａｅｍａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ
Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２００ｍｍ，５μｍ）ｉｎ ａｎ ｏｖｅｎ ａｔ ２５℃ ｗａｓ ｎｅｅｄ，ｗｉｔｈ ａ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－ｗａｔｅｒ（３６∶６４），ｔｈｅ
ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｔｈｅ ｄｒｉｆｔ－ｔｕｂｅ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｆ ＥＬＳＤ ｗａｓ １００℃，ａｎｄ ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ ａｉｒ ｗａｓ ３．０Ｌ·ｍｉｎ－１．Ｒｅｓｕｌｔｓ：
Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄｓ ｗａｓ ０．１４～１．４μｇ（ｒ＝０．９９９ ４），ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９７．１３％，ＲＳＤ＝１．８０％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：
Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ａｃｃｕａｔｅ，ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｂｉｌｅ Ａｒｉｓａｅｍａ．
Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ：Ｂｉｌｅ Ａｒｉｓａｅｍａ；ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ；Ｃｈｏｌｉｃ Ａｃｉｄｓ
胆南星为制天南星的细粉与牛、羊或猪胆汁经混合加工
而成，或由天南星细粉与牛、羊或猪胆汁经发酵加工而成。
其具有清热化痰、熄风定惊的功效，临床用于痰热咳嗽、咳痰
黄稠、中风痰迷、癫狂惊痫的治疗。天南星经胆汁炮制后性
味发生改变，功效由燥湿化痰变为清热化痰，由散结消肿变
为熄风定惊，这种变化主要是由胆汁引起的。胆汁酸中主要
含有胆酸、去氧胆酸和鹅去氧胆酸等成分。本文采用
ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法对胆南星中胆酸含量进行测定，目标物与杂
质峰分离效果好，该方法快速准确，重现性好，现报道如下。
１ 仪器与试药
仪器：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱仪，蒸发光散射检测
器；试剂：乙腈为色谱纯，甲醇为分析纯，水为娃哈哈纯净
水；对照品：胆酸（批号：０７８－９３１２，中国食品药品检定研究
院）；药材：胆南星（批号：１００３２，四川广汉中药饮片有限责
任公司）；胆南星（批号：１１１００２，四川百胜药业有限公司）；
胆南星（批号：２０１２１１０２，四川千方中药饮片有限公司）。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件
色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ Ｃ１８（４．６ｍｍ×２００ｍｍ，５μｍ），流
动相：乙腈－０．２％醋酸 （３６∶６４），柱 温：２５℃，流 速：
１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测器为ＥＬＳＤ，漂移管温度：１００℃，载气流
量：３．０Ｌ·ｍｉｎ－１。在上述色谱条件下，供试液色谱图中胆酸
与其他组分的色谱峰分离度良好，见图１。
２．２ 供试品溶液制备
取胆南星粉末（过三号筛）约２ｇ，精密称定，置于具塞锥
形瓶中，加甲醇２５ｍＬ，超声处理３０ｍｉｎ，滤过，滤液蒸干，残
渣加甲醇溶解，转移至５ｍＬ容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，
滤过，取续滤液，即得。
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图１ 供试品ＨＰＬＣ色谱
２．３ 对照品溶液制备
精密称取胆酸对照品适量，加甲醇制成每１ｍＬ含７０μｇ
胆酸的溶液，作为对照品溶液。
２．４ 标准曲线制备
精密吸取胆酸对照品溶液（７０μｇ／ｍＬ）２、４、８、１２、１６、
２０μＬ分别注入液相色谱仪中，测定峰面积。以胆酸进样量
的对数为横坐标，以峰面积的对数为纵坐标，得线性回归方
程为：Ｙ＝１．４６８ ６Ｘ＋３．１１３ １，ｒ＝０．９９９ ４，胆酸在０．１４～
１．４μｇ进样量范围内与其峰面积积分呈良好的线性关系。
２．５ 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液（百胜），分别放置０、２、４、６、
８、１２ｈ后进样测定峰面积，得峰面积积分ＲＳＤ为１．２４％，表
明供试液在１２ｈ内化学性质稳定。
２．６ 精密度试验
取同一供试品溶液（百胜），连续进样测定６次，计算得
峰面积积分ＲＳＤ为１．５２％，表明该方法精密度良好。
２．７ 重复性试验
取同一份样品（百胜），平行取样６次，按“２．２”项下方
法制备供试品溶液，进样测定峰面积，计算供试液中胆酸含
量，ＲＳＤ为１．６０％，表明该方法重复性良好。
２．８ 回收率试验
取已知含量的样品（百胜）１ｇ，精密称定，平行取样９
份，分别加入胆酸对照品溶液适量，按“２．２”项下制备供试
品溶液，进样测定峰面积，计算供试液中胆酸加样回收率，
得平均回收率为９７．１３％，ＲＳＤ为１．８％，结果见表１。
２．９ 样品测定
分别精密吸取对照品溶液 ５、１０μＬ 与供试品溶液
１０μＬ，注入液相色谱仪中测定峰面积，根据标准曲线计算供
试液中胆酸含量，结果见表２。
表１ 加样回收率测定结果
序号
胆酸
总含量（ｍｇ）
样品中
胆酸含量（ｍｇ）
测得胆酸
对照品量（ｍｇ）
胆酸对照品
加入量（ｍｇ）
回收率（％）
平均
回收率（％）
ＲＳＤ（％）
１ ０．３５８ ０．２２１ ０．１３７ ０．１４４ ９５．２０
２ ０．３７６ ０．２３４ ０．１４２ ０．１４４ ９８．９３
３ ０．３５６ ０．２１６ ０．１４０ ０．１４４ ９６．８４
４ ０．４０２ ０．２３２ ０．１７０ ０．１８ ９４．４５
５ ０．４０６ ０．２３４ ０．１７２ ０．１８ ９５．８８ ９７．１３ １．８０
６ ０．４０８ ０．２３３ ０．１７５ ０．１８ ９７．０１
７ ０．４５５ ０．２４５ ０．２１０ ０．２１６ ９７．５１
８ ０．４６４ ０．２４９ ０．２１５ ０．２１６ ９９．３４
９ ０．４６６ ０．２５２ ０．２１４ ０．２１６ ９９．０５
表２ 不同来源胆南星中胆酸含量测定结果
来源 胆酸含量（ｍｇ／ｇ）
百胜 ０．２３２
千方 ０．１６１
广汉 ０．０２９
３ 讨论
在炮制过程中，胆汁不仅是加工胆南星的主要辅料，其
还从根本上改变了主药的理化性质及性味。目前，２０１０版
中国药典尚未对胆南星质量标准进行规范，但许多学者在
胆南星质量标准方面进行了研究。赫炎等［１］采用 ＨＰＬＣ－
ＥＬＳＤ法测定胆南星中猪去氧胆酸含量；高向军等［２］以胆酸
为指标，采用薄层扫描法对胆南星及其制剂中的胆酸含量
进行了测定；张厚宝等［３］以总胆酸、胆红素含量为检测指
标，对江苏省８个市县的胆南星进行了测定；张绍轩等［４］以
鹅去氧胆酸为对照，建立了胆南星的薄层色谱鉴别方法。
本文采用高效液相色谱法，选择蒸发光散射检测器，以
胆酸为对照品，对市售三种胆南星药材中的胆酸含量进行
了测定，可能由于加工过程中胆汁来源及加入量的不同，导
致胆酸含量有所差异。实验过程中考察了甲醇－水、乙腈
－水、乙腈－０．２％醋酸３种色谱系统，并对流动相比例进
行了考察，最终乙腈－０．２％醋酸（３６∶６４）分离效果最为理
想。
采用 ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定胆南星中胆酸含量简便准
确，灵敏度高，稳定性好，可用于胆南星中胆酸含量测定，用
于其质量控制。
参考文献：
［１］ 赫炎，张永欣，赵惠东，等．ＨＰＬＣ测定胆南星中猪去氧胆酸
的含量［Ｊ］．中国中药杂志，２００７，３２（１６）：１６３４－１６３６．
［２］ 高向军，刘涵芳，张伯崇．胆南星及其复方制剂中胆酸的检查
［Ｊ］．中药通报，１９８７，１２（６）：３１－３２．
［３］ 张厚宝，康纯．胆南星中胆汁成分的检测［Ｊ］．中药材，１９９１，
１４（３）：３７－３８．
［４］ 张绍轩，黄青，王学农，等．胆南星的薄层色谱鉴别［Ｊ］．长春
中医药大学学报，２００８，２４（２）：１４７－１４８．
（责任编辑：尹晨茹）
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