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(收稿日期:2009-06-09)
·经验交流·
石墨炉原子吸收分光光度法测定复叶耳蕨
地上部分铅含量
李辉敏 ,吴家忠 ,石向群
(九江学院基础医学院 ,江西九江 332000)
近年来 , 我们在参考阚连娣等人文献的基础上 , 采用石
墨炉原子吸收分光光度法对中药复叶耳蕨地上部分铅(Pb)
含量进行了测定。现报告如下 。
仪器与试药:①仪器:AA240FS型原子吸收光谱仪 ,
GTA-120石墨炉原子化器 , PSD-120自动进样器 , 热解涂层
石墨管 , Pb空心阴极灯 , MDS-6型微波消解仪 , BT224S型电
子分析天平 , DFT-50手提式中药粉碎机。 ②试药:复叶耳
蕨 , 浓硝酸(优级纯), H2O2(分析纯), Pb标准液(浓度为 1
mg/ml), 用 1%硝酸为制备液采用自动进样器自动配制成不
同浓度标准应用液;基体改进剂为 5 g/L磷酸二氢铵。
方法与结果:①原子吸收分光光度计的工作条件:光源
用 Pb空心阴极灯 , 波长为 283.3 nm, 灯电流为 10 mA, 狭缝
0.5 mm, 氘灯扣背景 , 基体改进剂共进方式进样 , 进样体积
15 μl。 ②石墨炉升温:干燥步骤为 85 ℃升温 5 s, 95 ℃升温
40 s,保留 40 s, 120℃升温 10 s, 气体流量 0.3 L/min;灰化
步骤为 400 ℃升温 5 s, 保留时间 1 s, 气体流量 0.3 L/min,
400℃保留时间 2 s, 气体流量 0.3 L/min;原子化步骤为 2
100℃保留 3.0 s;清洗步骤为 2 100 ℃保留 2 s, 气体流量
0.3 L/min;冷却步骤为 50 ℃升温 5 s, 保留时间 2 s, 气体流
量 0.3 L/min。 ③样品溶液处理:a.样品预处理:复叶耳蕨地
上部分用去离子水漂洗 3 ～ 4次 , 纱布过滤 , 60 ℃烘干 , 研
碎 , 过 200目筛 , 取粉末存放于干燥器中待用。 b.药材消化:
分别取约 0.5 g复叶耳蕨根粉末样品 5份 , 电子天平精密称
定 , 置于聚四氟乙烯消解罐中 , 加入 5 ml硝酸 +2 mlH2O2 ,
水浴加热 4 h,使反应趋于缓和。将溶样杯取下 , 稍冷却 , 擦
干外表水分 , 放入消化罐内 ,盖好后置于微波消解炉内 , 消解
基金项目:江西省自然科学基金资助项目(2007GQY0114)。
完成后取出样品冷却、定容 、待测 ,进样前用 0.45μm滤膜过
滤 ,待用。同时做空白实验。 ④标准曲线绘制:Pb元素标准
系列溶液按①和②方法分别利用石墨炉进行测定 , 以标准溶
液吸光度(Abs)对应浓度(C)进行线性拟合 ,得到待测组分的
回归方程及相关系数 , 方法的检出限以空白浓度重复测定所
得吸光度标准偏差 3倍值所对应浓度计量。标准曲线方程为
Abs=0.010 80×C+0.047 18,线性范围为 5 ～ 45 μg/L, r=
0.998 9,特征浓度为 3.96μg/L。 ⑤精密度试验:Pb标准液分
别在相同设定条件下重复测定 5次 , 标准 1、 2、3溶液测得 Pb
吸光度的相对标准偏差(RSD%)分别为 1.6、 1.7、0.3,表明仪
器精密度良好。 ⑥稳定性试验:将同一 Pb标准液在相同仪器
条件下 , 分别于 0、2、 4、 6、8、16和 24 h重复测定, 测得 Pb吸
光度 RSD%为 2.12, 表明 Pb在 24h内测定结果稳定。 ⑦重
复性试验:按样品测定项下方法 ,对同一批样品消化液分别取
样平行测定 5次 , 测得 Pb吸光度 RSD%为 1.7,表明重复性良
好。⑧回收率:取适量消化后的供试品溶液 ,加入一定量 Pb
标准溶液 ,按照①和②工作条件 ,分别测定 Pb吸光度 ,连续进
样 5次 ,计算回收率为 105.27%, RSD%为 0.6。 ⑦样品 Pb测
定:将上述处理好的样品消化液用石墨炉原子吸收分光光度
法按照①和②条件平行测定 5次 ,以 Pb吸光度值代入回归方
程 ,计算含量为 1.867mg/kg, RSD%为 0.7。
讨论:随着国际上对中药材和中成药中重金属限量要求的
提高及我国绿色中药材的兴起 ,有害重金属的检测和控制已成
为当前研究热点之一。本实验显示 ,所测复叶耳蕨地上部分 Pb
含量为 1.867mg/kg,符合《药用植物及制剂进出口绿色行业标
准》有关规定;本方法具有简便 、准确、快速、重复性好、灵敏度高
等优点。总之 ,石墨炉原子吸收分光光度法测定复叶耳蕨地上
部分 Pb含量可用于中药材的质量控制。
(收稿日期:2009-06-11)
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山东医药 2009年第 49卷第 35期
Pin1和 β-连环素在胃癌组织中的表达
及其临床意义
缪云翔 ,王晶敏
(南京医科大学附属苏州医院 ,江苏苏州 215008)
摘要:目的 探讨肽酰脯氨酰异构酶 1(Pin1)与 β -连环素在胃癌发生 、发展中的作用。 方法 应用免疫组化
SP技术对 50例胃癌组织(胃癌组)及 30例正常胃组织(对照组)中 Pin1、β -连环素表达进行检测 , 分析两指标间相
关性及与胃癌临床病理学特征的关系。结果 胃癌组及对照组 Pin1表达阳性率分别为 24.0%(12/50)、0, β-连环
素异常表达率分别为 62.0%(31/50)、23.3%(7/30), P均 <0.05;Pin1与 β-连环素在胃癌组织中的表达密切相关
(r=0.51, P<0.01);Pin1及 β -连环素表达与胃癌病理分化程度 、临床分期 、淋巴结转移有关(P<0.05)。结论
Pin1和 β-连环素异常表达可能在胃癌发生 、发展中起重要作用 , 可作为指导肿瘤治疗及判断转移 、预后等的参考指
标之一。
关键词:胃肿瘤 ,胃癌;免疫组织化学方法;肽酰脯氨酰异构酶 1;β-连环素
中图分类号:R735.2 文献标志码:A 文章编号:1002-266X(2009)35-0029-03
ExpressionofPin1 andβ-cateniningastriccarcinomatisueandtheirclinicalsignificance
MIAOYun-xiang, WANGJing-ming
(AfiliatedSuzhouHospital, NanjingMedicalUniversity, Suzhou215008, P.R.China)
Abstract:Objective ToinvestigatetherolesofPin1 andβ-catenininthetumorigenesisanddevelopmentofgastric
carcinoma.Methods TheexpressionofPin1 andβ-cateninproteinsin50 casesofgastriccancertissues(gastriccancer
group)and30 casesofnormalgastrictissues(controlgroup)weredetectedbyimmunohistochemistry.Therelationshipsa-
mongPin1 andβ-cateninexpressionandclinicopathologicalfactorsofgastriccarcinomawereanalyzed.Results Theposi-
tiveratesofPin1expressioningastriccancergroupandcontrolgroupwere24%(12/50), 0(0/30)respectively, theposi-
tiveratesofβ -cateninexpressionwere62%(31/50), 23.3%(7/30)respectively, P<0.05。Therewasasignificantcor-
relationbetweenPin1 andβ-cateninexpressioningastriccancertissues(r=0.51, P<0.01).ThePin1andβ -cateninex-
pressionweresignificantlycorrelatedwithpathologicalgrade, clinicalstageandlymphnodemetastasisofgastriccancer(P
<0.05).Conclusion TheabnormalexpressionofPin1andβ -cateninmayplayanimportantroleinthegenesisandde-
velopmentofgastriccarcinoma, anditmayactasthecriterionstoguidethetreatmentofcarcinomaandjudgementofmetas-
tasisandprognosis.
Keywords:gastrictumor, gastriccarcinoma;immunohistochemistry;peptidyl-proplylisomerase1;β-catenin
目前对肽酰脯氨酰异构酶(Pin)1、β-连环素在
胃癌发生 、发展中作用的研究较少。 2008年 9月 ,
我们对 Pin1、β-连环素在胃癌组织中的表达进行了
检测 ,旨在为判断胃癌的生物学行为提供参考 。
1 资料与方法
1.1 临床资料 2000年 2月 ～ 2003年 8月本院普
外科手术切除并经病理组织学证实的胃癌标本 50
份(胃癌组),患者男 34例 ,女 16例;平均年龄 53.6
岁 。病理类型为黏液腺癌 20例 、管状腺癌 14例 、印
戒细胞癌 16例 ,其中高中分化 36例 、低分化 14例 ,
有淋巴转移 34例;TNM分期 WieⅠ期 +Ⅱ期 29例 ,
Ⅲ期 +Ⅳ期 21例 。术前均未进行化疗或放疗 ,无长
期服用非甾体类抗炎药或皮质激素药物史。入选病
例皆具备完整的临床病理资料和随访资料(随访截
止日期为 2008年 8月)。取肿瘤远端 、经病理组织
学证实的正常组织标本 30份为对照组 ,患者男 19
例 ,女 11例;平均年龄 51.7岁。两组一般资料具有
可比性。试剂羊抗人 Pin1多克隆抗体 (编号 sc-
46660 ,工作浓度 1∶150),鼠抗人 β-catenin单克隆抗
体和 SP免疫组化试剂盒。
1.2 检测方法 石蜡标本经 4μm厚度连续切片 ,
常规脱蜡至水 ,抗原修复采用水浴加热至沸腾并持
续 15 min,室温下自然晾凉。组织切片经消除内源
性过氧化物酶和封闭后 ,依次加入一抗 37 ℃孵育 3
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山东医药 2009年第 49卷第 35期