全 文 ：·生物技术· 北方园艺２０１４（０７）：８６～９０
第一作者简介：王非（１９７５－），女，吉林长春人，博士，副教授，研究
方向为园林植物种质资源。Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｕｉｊｉｎｇ７５３９＠１６３．ｃｏｍ．
基金项目：黑龙江省教育厅科学技术指导资助项目（１１５３３０１８）。
收稿日期：２０１３－１１－１３
褐毛铁线莲茎段诱导丛生芽的研究
王 非，成 璐
（东北林业大学 园林学院，黑龙江 哈尔滨１５００４０）
摘 要：以褐毛铁线莲（Ｃｌｅｍａｔｉｓ ｆｕｓｃａ）带芽茎段为外植体进行组织培养，研究了不同取材季
节及植物生长调节剂对茎段诱导不定芽的影响。结果表明：春季为外植体取材的最佳季节，带芽
茎段初代培养的最佳培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ，不定芽萌发率为
９３．３３％，带芽茎段的继代增殖培养的最佳培养基为 ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ＋
ＫＴ １．０ｍｇ／Ｌ，不定芽的增殖系数为２．６３。
关键词：褐毛铁线莲；带芽茎段；不定芽；组织培养
中图分类号：Ｓ ６８５．９９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１４）０７－００８６－０５
铁线莲属（Ｃｌｅｍａｔｉｓ）植物分布范围广泛，全世界约
３５５种［１］。国内外对铁线莲属植物的研究主要集中在植
物分类、资源调查、地理分布、毒理学和药物学等方
面［２－７］。褐毛铁线莲（Ｃｌｅｍａｔｉｓ ｆｕｓｃａ）属毛茛科铁线莲属
多年生直立草本或攀援藤本［８］，花大且花色特别，宿存
瘦果圆球形，具有良好的园林观赏价值，可作为垂直绿
化和地被材料。作为一种东北特有的野生植物资源，褐
毛铁线莲的抗逆性较强，园林开发利用价值较高，但以
往试验结果显示，其种子不易萌发，繁殖较困难，无法满
足园林绿化大面积栽培的需要。我国对于铁线莲属植
物的研究取得了一定的成果，张启香［９］以栽培品种Ｃ．
‘Ｍｕｌｔｉ－Ｂｌｕｅ’为试验材料分别进行了以带芽茎段为外植
体的直接器官发生途径和以茎尖为外植体进行的体细
胞胚诱导，均获得了再生植株，研究较深入全面；袁迎燕
等［１０］以毛蕊铁线莲为试验材料，用带芽茎段进行组织培
养，获得再生植株；王辉［１１］以湖州铁线莲、大花铁线莲和
气候，既满足了不同花卉的采光要求，又成为室内一道
独特的风景。室内移动式组合花架只占地０．４ｍ２，解决
了养花与占地面积的矛盾。且可随意移动，室内卫生不
留死角。
室内移动式组合花架结构合理、坚固耐用、组装方
便、健康环保，受到了试用者的一致好评。
参考文献
［１］ 朱春福，耿美云，于雷．花架设计中存在的问题及其对策研究［Ｊ］．安
徽农业科学，２０１２（１８）：９７６８－９７７０．
［２］ 刘继展，李萍萍，将大林．可动式螺旋立体花架系统的设计［Ｊ］．中国
农机化，２００３（６）：４０－４２．
［３］ 于辉．工程力学［Ｍ］．北京：北京交通大学出版社，２０１０．
Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｄｏｏｒ Ｍｏｂｉｌｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ Ｐｅｒｇｏｌａ
ＹＵ Ｈｕｉ
（Ｊｉｌｉｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ，Ｊｉｌｉｎ，Ｊｉｌｉｎ １３２０２１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂｅｃａｕｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｒｂａｎｉｚａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｌｉｖｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｉｓ ｂｅｉｎｇ ｉｍｐｒｏｖｅｄ，ｔｈｅ ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ
ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｃｈａｎｇｅｄ，ｔｈｅ ｇｒｅｅｎ ｓｐａｃｅ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｒｅｄｕｃｅｄ．Ｉｎｄｏｏｒ ｍｏｂｉｌｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐｅｒｇｏｌａ ｃａｎ ｓｏｌｖｅ ｔｈｅ
ｃｏｎｔｒａｄｉｃｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｆｌｏｗｅｒｓ ｎｕｍｂｅｒ ａｎｄ ｉｎｄｏｏｒ ａｒｅａ．Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｉｓｔｉｎｇ
ｉｎｄｏｏｒ ｆｌｏｗｅｒ ｐｅｒｇｏｌａ，ｅｌａｂｏｒａｔｅｄ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｄｖａｎｔａｇｅｓ ｏｆ ｍｏｂｉｌｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐｅｒｇｏｌａ，ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｃｏｒｅ ｐａｒｔｓ，ｓｏ ａｓ ｔｏ ｍａｋｅ ｍｏｂｉｌｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｐｅｒｇｏｌａ’ｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｍｏｒｅ ｒｅａｓｏｎａｂｌｅ，ｔｏ ｍｅｅｔ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ
ｉｎｄｏｏｒ ｆｌｏｗｅｒｓ，ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｉｎｄｏｏｒ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｅｒｇｏｌａ；ｍｏｂｉｌｅ ｂａｓｅ；ｃｏｌｕｍｎ；ｆｌｏｗｅｒｐｏｔ ｔｒａｙ；ｐｏｔ ｒａｃｋ
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北方园艺２０１４（０７）：８６～９０ ·生物技术·
短柱铁线莲３种中国野生铁线莲为试验材料，通过带芽
茎段和茎尖诱导不定芽，建立起离体再生体系，并对湖
州铁线莲进行了体细胞胚胎发生的初步研究，可见对于
铁线莲属植物的组织培养以带芽茎段为外植体进行丛
生芽诱导较为快速有效。该试验在借鉴前人研究的基
础上，以褐毛铁线莲带芽茎段为外植体，对其进行组织
培养，研究不同取材时间及植物生长调节剂对其茎段诱
导丛生芽的影响，旨在选择诱导褐毛铁线莲丛生芽的最
佳培养条件，为我国褐毛铁线莲在园林中的广泛推广应
用奠定基础。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
试验材料取自吉林省吉林地区磐石市烟筒山移植
的野生褐毛铁线莲的带冬芽２年生苗，将其栽植于壤土
和蛭石１∶１的２０ｃｍ花盆中，置于室内，待冬芽萌发生
长，春季后移置苗圃中培养。
１．２ 试验方法
１．２．１ 无菌体系建立 取当年生嫩茎，长度大约１０ｃｍ，
用自来水冲洗表面浮尘，将嫩茎剪成２～３ｃｍ左右带芽
茎段，剪掉叶片，放入含洗衣粉水的三角瓶内充分摇动，
静置浸泡３０ｍｉｎ后，在流水下冲洗１ｈ以上。在超净工
作台内将冲洗干净的带芽茎段放入７５％Ｃ２Ｈ５ＯＨ（酒
精）中灭菌１０ｓ，无菌水冲洗３～４遍，用０．１％ ＨｇＣｌ２（升
汞）消毒５ｍｉｎ。将灭菌后的茎段用无菌水冲洗５次以
上，无菌滤纸吸干水分，用解剖刀切掉茎段两端与消毒
液接触的伤口，保留带芽茎段１ｃｍ左右，接于培养基上。
１．２．２ 取材季节 以春季和秋季的带芽茎段为材料，研
究不同季节外植体的污染率、死亡率、萌发率和萌动率。
１．２．３ 初代培养 以 ＭＳ为基本培养基，添加不同浓
度的６－ＢＡ（０．５、１．０、２．０ｍｇ／Ｌ）和 ＮＡＡ（０．０５、０．１、
０．５ｍｇ／Ｌ），组成９种培养基，每种培养基接种３０瓶，每
瓶接１个外植体，３０ｄ后统计各不同浓度激素处理下带
芽茎段不定芽萌发率及萌发新芽的生长状况。
１．２．４ 继代增殖培养 将初代培养萌发的嫩茎剪成带
芽茎段接种到ＭＳ为基本培养基，添加不同浓度的６－ＢＡ
（１．０、２．０、３．０ｍｇ／Ｌ）、ＮＡＡ（０．０５、０．１ｍｇ／Ｌ）和 ＫＴ
（１．０、２．０ｍｇ／Ｌ），组成８种培养基，每个组合接种１０瓶，
每瓶接３个带芽的无菌材料，３０ｄ后统计增殖系数，记
录芽的生长情况。
１．２．５ 生根培养 选取生长健壮的幼苗，分别以ＭＳ和
１／２ＭＳ为基本培养基，添加不同浓度的 ＮＡＡ（０．０１、
０．０５、０．１、０．３、０．５ｍｇ／Ｌ）和ＩＢＡ（０．０１、０．０５、０．１、０．３、
０．５ｍｇ／Ｌ），以及２种植物激素的交叉组合。每个组合
接种１０瓶，每瓶接３个幼苗，３０ｄ后统计生根率，并记录
平均根长和平均根数。
１．２．６ 培养条件 除生根培养基中的蔗糖浓度为
１５ｇ／Ｌ，其它 ＭＳ培养基中均添加３０ｇ／Ｌ蔗糖，８ｇ／Ｌ
琼脂，灭菌前调整培养基的ｐＨ为５．８～６．０［１２］，然后在
１２１℃高压灭菌锅（１．１ＭＰａ）内灭菌１５ｍｉｎ待用。接种
后培养室的光照强度为１ ５００～２ ０００ｌｘ，光照时间为白
天１２ｈ，晚上１２ｈ［１０］，培养温度为（２５±２）℃。
１．３ 项目测定
统计长菌的茎段计算污染率。
污染率＝污染的外植体个数／接种的外植体个数×
１００％。
以茎段褐化、茎段枯死为外植体死亡标准，统计死
亡数及死亡率；以茎段芽萌发、茎段保持绿色为外植体
存活标准，统计存活数及存活率。
死亡率＝死亡的外植体个数／接种的外植体个数×
１００％；存活率＝存活的外植体个数／接种的外植体个
数×１００％。
以芽从叶腋处萌动但没有继续生长为标准统计萌
动的腋芽个数及萌动率；以腋芽抽出形成茎和叶片为标
准，统计腋芽萌发的个数及萌发率。
萌动率＝腋芽萌动的外植体个数／接种的外植体个
数×１００％；萌发率＝腋芽萌发的外植体个数／接种的外
植体个数×１００％。
统计形成不定芽的外植体数量及不定芽数量，计算
不定芽诱导率及增殖系数。
不定芽的诱导率＝形成丛生芽的外植体个数／接种
的外植体个数×１００％；丛生芽的增殖系数＝形成的有
效苗的个数／接种的外植体个数×１００％。
１．４ 数据分析
采用Ｅｘｃｅｌ软件对原始数据进行整理，采用ＳＰＳＳ
１０．０进行数据分析，其中包括极差分析法和方差分析法
及邓肯显著性检验方法。
２ 结果与分析
２．１ 不同取材季节对褐毛铁线莲外植体的影响
由表１可知，春季即新梢萌发时期对褐毛铁线莲
外植体的污染率、死亡率及萌发率有较大影响。春季
带芽茎段污染率较低为８％，而秋季带芽茎段污染率
较高，达到２６％，春季不定芽几乎都能够很快萌动膨
大且生长较快，萌动率和萌发率均在５０％以上，而秋
季不定芽可以萌动，萌动率能够达到３８％，但几乎很
难生长形成新芽。说明褐毛铁线莲外植体取材的最
适合季节是春季。
２．２ 不同激素组合对初代培养的影响
从表２可以看出，褐毛铁线莲不定芽萌发率最高为
９３．３３％，最低为２３．３３％。其中当６－ＢＡ浓度在１．０ｍｇ／Ｌ
时，其与ＮＡＡ的组合中不定芽的萌发率均高于其它２
个浓度６－ＢＡ与ＮＡＡ的组合，尤其当６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ与
ＮＡＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ和０．１ｍｇ／Ｌ组合时，其不定芽萌发率
均达到９０．００％以上，而且芽长势良好。
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·生物技术· 北方园艺２０１４（０７）：８６～９０
表１ 不同季节外植体的污染率、死亡率、萌发率比较
Ｔａｂｌｅ １ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｅｘｐｌａｎｔｓ’ｐｏｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ，ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｒａｔｅ，ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｎ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｓｅａｓｏｎｓ
季节
Ｓｅａｓｏｎ
接种数
Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｅｘｐｌａｎｔｓ／个
污染率
Ｐｏｌｕｔｉｏｎ ｒａｔｅ／％
死亡率
Ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｒａｔｅ／％
存活率
Ｓｕｒｖｉａｌ ｒａｔｅ／％
萌动率
Ｂｕｄ ｒａｔｅ／％
萌发率
Ｇｅｒｍａｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ／％
春季Ｓｐｒｉｎｇ ５０ ８ １０ ８２ ７８ ５６
秋季 Ａｕｔｕｍｎ ５０ ２６ １８ ５６ ３８ ６
表２ 不同激素组合对茎段不定芽萌发的影响
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｎ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｅｍｓ
植物生长调节剂
Ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ ＮＡＡ
接种数量
Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ／个
萌发数量
Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ／个
不定芽诱导率
Ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｒａｔｅ
／％
生长状况Ｇｒｏｗｔｈ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
长势
Ｇｒｏｗｉｎｇ
生长速度
Ｓｐｅｅｄ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ
叶色
Ｌｅａｆ ｃｏｌｏｒ
０．５ ０．０５ ３０ ２２ ７３．３３ （＋＋＋＋） 中等 浓绿
０．５ ０．１０ ３０ ２４ ８０．００ （＋＋＋） 较快 绿
０．５ ０．５０ ３０ ７ ２３．３３ （＋） 缓慢 黄
１．０ ０．０５ ３０ ２８ ９３．３３ （＋＋＋＋＋） 快 浓绿
１．０ ０．１０ ３０ ２７ ９０．００ （＋＋＋＋） 快 绿
１．０ ０．５０ ３０ １０ ３３．３３ （＋＋） 缓慢 绿
２．０ ０．０５ ３０ ２４ ８０．００ （＋＋＋＋） 中等 绿
２．０ ０．１０ ３０ ２０ ６６．６７ （＋＋＋） 中等 嫩绿
２．０ ０．５０ ３０ ８ ２６．６７ （＋） 缓慢 绿
注：生长非常好（＋＋＋＋＋），较好（＋＋＋＋），一般（＋＋＋），不好（＋＋或＋）。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｇｒｏｗｔｈ（＋＋＋＋＋），ｂｅｔｔｅｒ ｇｒｏｗｔｈ（＋＋＋＋），ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ ｇｒｏｗｔｈ（＋＋＋），ｂａｄ ｇｒｏｗｔｈ（＋＋ｏｒ＋）．
从表３多重比较可以看出，６－ＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ
和２．０ｍｇ／Ｌ时的浓度水平差异不显著，而与１．０ｍｇ／Ｌ
浓度的水平差异显著，从平均值来看，当６－ＢＡ浓度为
１．０ｍｇ／Ｌ时发芽率最好，为７２．２２％，而其它２个浓度的
发芽率均较低，所以就萌发率而言，褐毛铁线莲带芽茎
段初代培养的最佳６－ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ。ＮＡＡ的３
个浓度水平差异均极显著，且从平均值来看，随着ＮＡＡ
浓度的上升，萌发率呈下降趋势，ＮＡＡ浓度在０．０５ｍｇ／Ｌ
时，萌发率最高，达到８２．２２％，而当浓度在０．５ｍｇ／Ｌ
时，萌发率最低，仅为２７．７８％，表明高浓度的ＮＡＡ对褐
毛铁线莲不定芽萌发有明显的抑制作用。所以就萌发
率而言，褐毛铁线莲带芽茎段初代培养的最佳ＮＡＡ浓
度为０．０５ｍｇ／Ｌ。
通过上述比较，细胞分裂素６－ＢＡ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ，
生长素ＮＡＡ浓度为０．０５ｍｇ／Ｌ时，最有利于不定芽萌
发，同时两激素在此浓度组合下，芽的生长状况也是最
佳的，新生芽生长健壮，生长快（图１Ａ、Ｂ）。因此，适宜于
褐毛铁线莲带芽茎段初代培养的最佳激素组合为ＭＳ＋
６－ＢＡ １．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ。
２．３ 不同激素组合对继代增殖的影响
由表４可知，不同激素组合对褐毛铁线莲的继代
增殖有较大影响，通过增殖系数的方差分析结果显示，
表３ ６－ＢＡ和ＮＡＡ ３浓度水平Ｄｕｎｃａｎ检验
Ｔａｂｌｅ ３ Ｄｕｎｃａｎ ｔｅｓｔ ｏｎ ｔｈｒｅｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ６－ＢＡ ａｎｄ ＮＡＡ
６－ＢＡ浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ６－ＢＡ
平均值
Ａｖｅｒａｇｅ
０．０５水平
Ｌｅｖｅｌ ｉｎ ０．０５
０．０１水平
Ｌｅｖｅｌ ｉｎ ０．０１
ＮＡＡ浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＡＡ
平均值
Ａｖｅｒａｇｅ
０．０５水平
Ｌｅｖｅｌ ｉｎ ０．０５
０．０１水平
Ｌｅｖｅｌ ｉｎ ０．０１
０．５ ５８．８９±２．４０ ｂ Ｂ ０．０５ ８２．２２±０．５８ ａ Ａ
１．０ ７２．２２±１．３８ ａ Ａ ０．１０ ７８．８９±１．０４ ｂ Ｂ
２．０ ５７．７８±０．９１ ｂ Ｂ ０．５０ ２７．７８±０．８８ ｃ Ｃ
表４ 不同激素组合对不定芽继代增殖的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｎ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｓｈｏｏｔｓ
植物生长调节剂
／ｍｇ·Ｌ－１
６－ＢＡ ＮＡＡ ＫＴ
接种数量
Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ／个
增殖系数
Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
丛生芽生长状况Ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｓｈｏｏｔｓ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
基部愈伤组织
Ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ｂａｓｉｃａｌ ｃａｌｕｓ
生长速度
Ｓｐｅｅｄ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ
叶色
Ｌｅａｆ ｃｏｌｏｒ
粗壮度
Ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ
１．０ ０．０５ ０ ３０ １．５３ｂ 少量 慢 黄 细
１．０ ０．１ ０ ３０ １．６７ｂ 中等 慢 浅绿 较细
２．０ ０．０５ ０ ３０ ２．３６ｃ 中等 中等 绿 粗
２．０ ０．１ ０ ３０ ２．４３ｄ 少 较快 浅绿 细
３．０ ０．０５ ０ ３０ １．１６ａ 多 慢 黄绿 细
３．０ ０．１ ０ ３０ １．２３ａ 较多 慢 黄 细
２．０ ０．０５ １．０ ３０ ２．６３ｅ 少 快 浓绿 较粗
２．０ ０．０５ ２．０ ３０ ２．４０ｃｄ 中等 慢 ——— 玻璃化
注：同列不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）。
Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｏｗｅｒｃａｓｅ ｌｅｔｔｅｒｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｔ ０．０５ｌｅｖｅｌ．
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北方园艺２０１４（０７）：８６～９０ ·生物技术·
图１ 褐毛铁线莲组织培养过程
注：Ａ：不定芽萌发；Ｂ：不定芽生长；Ｃ、Ｄ、Ｅ：丛生芽生长较好；Ｆ：丛生芽生长不良。
Ｆｉｇ．１Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｃｌｅｍａｔｉｓ ｆｕｓｃａ Ｔｕｒｃｚ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｎｏｔｅ：Ａ：Ｇｅｒｍａｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｓｈｏｏｔｓ；Ｂ：Ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｓｈｏｏｔｓ；Ｃ，Ｄ，Ｅ：Ｔｈｅ ｇｏｏｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｓｈｏｏｔｓ；Ｆ：Ｔｈｅ ｐｏｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ
ｃｌｕｒｓｔｅｒｅｄ ｓｈｏｏｔｓ．
当６－ＢＡ浓度相同时，各处理之间差异不显著，但不同浓
度的６－ＢＡ处理之间差异显著，可见６－ＢＡ在不定芽增殖
过程中作用明显，是决定不定芽增殖的关键因素，同时
通过表４和图１可知，ＫＴ在不定芽的增殖中也起到了
促进作用（图１Ｃ、Ｄ、Ｅ），但ＫＴ浓度过高也会对不定芽
增殖产生抑制作用，且丛生芽容易出现玻璃化现象（图
１Ｆ），故在ＫＴ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时，与其它处理差异显
著，增殖系数最高，达到２．６３，芽的生长状况良好。因此
褐毛铁线莲不定芽继代增殖的最佳培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ
２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ １．０ｍｇ／Ｌ。
２．４ 生根培养
褐毛铁线莲的生根情况不佳，几乎所有培养基均无
或仅有极少的幼苗生根，无法记录根的生长状况，包括
根的数量及根长度等，不足以进行比较分析，同时幼苗
多生长不良，植株极易失绿枯死。
３ 讨论
该研究中，春季（４月中旬左右）是外植体取材的最
佳时期，其污染率相对较低，可能由于春季带芽茎段还
未开始萌动或刚刚开始萌动，生长期较短，自身所带有
害菌较少；但秋季（９月中旬左右）枝条经过半年左右的
生长，芽苞处鳞片较多，容易积累大量微生物及有害菌，
而外植体表面消毒又很难彻底将其杀灭，故污染率较春
季高。春季新梢经过冬季休眠，其自身所带的多酚类含
量较秋季低［１３］，故在死亡率上春季外植体低于秋季。而
秋季带芽茎段虽可以萌动，但萌发率很低，容易死亡，不
利于丛生芽的诱导增殖。
初代培养中接种５～１０ｄ，不定芽开始萌动膨大，
１０～１５ｄ开始萌发生长，包括开始芽的伸长生长和叶片
的舒展。褐毛铁线莲不定芽萌发需要一定浓度的细胞
分裂素，太高或太低均不利于不定芽萌发，而６－ＢＡ浓度
在０．５ｍｇ／Ｌ时的萌发率平均值又略高于２．０ｍｇ／Ｌ浓
度，可以推断６－ＢＡ浓度较高时可能会抑制褐毛铁线莲
不定芽的萌发，有待进一步研究。而生长素ＮＡＡ浓度
为０．０５ｍｇ／Ｌ时，最有利于不定芽萌发。但是在不定芽
的初代培养中，由于植株个体的差异，也可能影响不定
芽的萌发率及生长速度和生长状况，易出现生长缓慢或
萌发后停止生长以及玻璃化现象。
继代增殖培养中，６－ＢＡ浓度过高或过低均会降低
不定芽的增殖系数，减少丛生芽的产生，且不利于丛生
芽的生长，当６－ＢＡ浓度在２．０ｍｇ／Ｌ时，其增殖系数均
在２．００以上。同时配合低浓度的ＫＴ可以提高增殖系
数，且芽生长良好，说明ＫＴ在增殖过程中起到促进作
用。但长期使用６－ＢＡ和ＫＴ，又会使大量的激素在丛生
芽体内积累，容易产生毒害，破坏体内正常激素的平衡
代谢，导致丛生芽长势变弱，甚至枯萎死亡。
在丛生芽增殖过程中，其增殖系数并不高，且基部
均有愈伤组织形成，愈伤在一定程度上存在褐化现象，
进而可能会影响丛生芽的生长，这在袁迎燕［１４］对毛蕊铁
线莲的带芽茎段不定芽的增殖培养中也存在类似的问
题，故需要进一步优化在增殖过程中细胞分裂素和生长
素的浓度组合。同时褐毛铁线莲由于其自身属于半木
质藤本，故容易褐化［１５－１６］。郭艳等［１７］在试验中采取在培
养基中加入不同浓度活性炭作为吸附剂和多次转移缩
短继代时间的方法，结果表明在培养基中加入活性炭防
９８
·生物技术· 北方园艺２０１４（０７）：８６～９０
止褐变的效果并不理想，而采用缩短继代时间的方法，
可以在一定程度上减轻外植体的褐化现象。存在的最
重要的问题是获得的组培苗不易生根。而在生根过程
中，培养条件、基质、激素、水和糖都对无菌苗的生根率
有较大影响［１８］。
该研究尝试了不同生根激素诱导，添加不同浓度蔗
糖和不同浓度活性炭及分别进行光暗培养，并采用
１／２ＭＳ和ＭＳ在生根前进行壮苗等措施，均无法诱导组
培苗生根，组培苗呈现２种状态：１种是基部产生乳白色
愈伤组织，上部芽苗枯黄死亡；另１种是基部无愈伤组
织形成，但基部１～２ｃｍ左右茎段变黑，上部芽苗枯黄死
亡。这可能有多方面的因素影响，首先褐毛铁线莲是野
生铁线莲品种，研究较少，其生根机理等方面无从参考，
包括其自身可能存在抑制其生根的物质，故即使在不加
任何激素的ＭＳ和１／２ＭＳ培养基上，芽苗的死亡率也较
高，可能是由于在前期初代和继代培养中，细胞分裂素
浓度较高，在植株体内残留，对植株产生毒害，加大了生
根的难度；其次由于实验室的培养条件有限，在生根培
养环节无法创造最适合其生长的生境，包括温度、光照、
水分等，也是导致其不易生根的原因；而在生根诱导激
素的种类和浓度方面还应做更多的尝试，包括不单纯使
用常规生长素促进生根，还可以使用细胞激动素ＫＴ［１９］，
并辅助添加水解酪蛋白和维生素Ｃ等。褐毛铁线莲的
生根培养还需多借鉴前人在其它铁线莲属植物的组织
培养中的方法和经验，进一步进行试验研究，以探索出
最适合其生根的培养条件。
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（Ｌａｎｄｓｃａｐｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ Ｃｏｌｅｇｅ，Ｎｏｒｔｈｅａｓｔ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｒｂｉｎ，Ｈｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇ １５００４０）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ Ｃｌｅｍａｔｉｓ ｆｕｓｃａ ｗｉｔｈ ｂｕｄ ｓｔｅｍ ｓｅｇｍｅｎｔｓ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｆｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ，ｔｈｅ ｅｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｒｎｔ ｓｅａｓｏｎｓ ａｎｄ
ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｎ ｔｈｅ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｂｅｓｔ
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ＮＡＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ ｗａｓ ９３．３３％，ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ
ｓｔｅｍｓ ｗｉｔｈ ｂｕｄｓ ｗａｓ ＭＳ＋６－ＢＡ ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．０５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ １．０ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ
ｂｕｄｓ ｗａｓ ２．６３．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｌｅｍａｔｉｓ ｆｕｓｃａ；ｓｔｅｍｓ ｗｉｔｈ ｂｕｄｓ；ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ ｂｕｄｓ；ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ
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