全 文 ：第３８卷第９期　　　　　　　　　西 南 大 学 学 报 （自然科学版）　　　　　　　　　　　 ２０１６年９月
Ｖｏｌ．３８　Ｎｏ．９ Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｓｅｐ．　２０１６
ＤＯＩ：１０．１３７１８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｘｄｚｋ．２０１６．０９．０１０
紫参薯的包埋玻璃化超低温保存
①
蔡月琴，　王艳平，　庄君娥，　林燕茹，
柯美玉，　陆銮眉，　张泽宏
闽南师范大学 生物科学与技术学院，福建 漳州３６３０００
摘要：以紫参薯带芽茎段为材料，采用２％海藻酸钠和０．１ｍｏｌ／Ｌ氯化钙凝胶系统制备包埋珠，液氮保存，以茎段
细胞活力和包埋珠成活率为指标筛选获得有关参数适宜水平，比较冻后再生苗与常温苗形态及生理指标．结果表
明：紫参薯试管苗经４℃锻炼６ｄ后，无菌条件下制备其带芽茎段包埋珠，接种到 ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ＋０．２ｍｇ／Ｌ
ＮＡＡ＋０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液体培养基中预培养１ｄ，转入 ＭＳ＋２ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中室温下装载
４０ｍｉｎ，在玻璃化保护剂ＰＶＳ２中脱水４０ｍｉｎ，更新ＰＶＳ２后迅即液氮保存，２４ｈ后置于３７℃水浴中化冻５ｍｉｎ，
用 ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋０．８ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液洗涤３次（每次１０ｍｉｎ），然后转入ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ＋
０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋１ｇ／Ｌ活性炭固体培养基中，暗培养７ｄ后转至光照下培养１４ｄ，该包埋珠成活率
可达６０％．冻后再生苗诸多形态和生理指标与常温苗差异不具有统计学意义．
关　键　词：紫参薯；带芽茎段；包埋玻璃化；超低温保存
中图分类号：Ｓ６３２．１；Ｑ９４５．７９　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１６７３－９８６８（２０１６）０９－００５８－０７
紫参薯是薯蓣科薯蓣属山药（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ａｌａｔａ　Ｌ．）中的精品，为一年生或多年生缠绕性藤本植物，又名
紫山药、紫人参，在我国南方的浙江、江西、福建、台湾、广东等省区有广泛栽培［１］，其块茎椭圆形至扁圆
形，表皮为紫褐色，肉质呈亮紫色，含有丰富的花青素、蛋白质、维生素和薯蓣皂苷等营养物质，具有滋肺
益肾、健脾止泻、降血脂血糖、调节人体免疫力等功效，药食兼用［２］．目前国内有关紫参薯的研究主要集中
在引种［３］、栽培管理［４］、组织培养［５］、营养成分［６］等方面．紫参薯种质资源主要采用大田保存，费时费力，
且易受到各种自然灾害和病虫害的影响而造成种质丢失，且保存时间短、效果差．采用组培方法可长期离
体保存，但需定期继代培养［７－９］，可能会发生污染及引起遗传变异［１０］．因此，探索适合紫参薯种质长期离
体保存方法有重要现实意义．
包埋玻璃化超低温保存是在玻璃化和包埋脱水超低温保存基础上发展起来的一种新的超低温保存技
术，兼具后两者优点，所需设备简单、易于操作、恢复生长快、成活率高［１１］，现已成功应用于苹果［１２］、酸
橙［１３］、高山红景天［１４］、甘薯［１５］和怀山药［１６］等多种植物的种质保存．目前有关紫参薯的超低温保存国外已
有研究［１７］，但未见采用包埋玻璃化法超低温保存的相关报道．本研究采用包埋玻璃化法对紫参薯茎段超低
温保存技术进行探讨，旨在建立紫参薯茎段超低温保存体系，为其种质资源的长期保存提供技术支持．
１　材料与方法
１．１　试验材料
试验材料为继代培养４０ｄ的紫参薯（产自福建漳州云霄马铺乡）试管苗（无菌），由闽南师范大学园艺
① 收稿日期：２０１５－０８－１６
基金项目：福建省科技计划重点项目（２０１３Ｎ００３７）；漳州市科技计划项目（ＺＺ２０１３０５２）；国家大学生创新训练项目（２０１４１０４０２００７）．
作者简介：蔡月琴（１９８０－），女，福建漳州人，硕士研究生，讲师，主要从事植物生物技术研究．
生物技术课题组提供．
１．２　试验方法
１．２．１　试管苗的低温锻炼及带芽茎段的包埋
将试管苗于０～８℃下暗处低温锻炼０～１２ｄ，研究低温锻炼对其超低温保存效果的影响．
在无菌条件（室温）下，切取经低温锻炼的试管苗的带芽茎段（长为２～５ｍｍ），转入 ＭＳ＋２％海藻
酸钠＋０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的包埋基质中，然后将裹有包埋基质的茎段逐个移入 ＭＳ＋０．１ｍｏｌ／Ｌ氯化钙＋
０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的液体培养基中，反应（固化）３０ｍｉｎ（使茎段表面的海藻酸钠溶胶形成具一定厚度和机
械强度的海藻酸钙凝胶），取出茎段包埋珠．
１．２．２　包埋珠的预培养及装载
在无菌条件下，将包埋珠用 ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ液体培养基洗涤和无菌滤纸吸干后，
分别接入含０～１ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的 ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ液体培养基中，在３６μｍｏｌ／（ｍ
２·ｓ）
（１４ｈ／ｄ）光照、（２５±２）℃温度条件下预培养１ｄ，研究预培养中蔗糖浓度对紫参薯超低温保存效果的影响．
在室温下，将经预培养的包埋珠转入 ＭＳ＋２ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的装载液中处理０～
６０ｍｉｎ，研究装载时间对紫参薯超低温保存的效果．
１．２．３　包埋珠的玻璃化保护剂脱水
将装载４０ｍｉｎ的包埋珠分别转入以 ＭＳ液体培养基为基质的４种玻璃化保护剂中（ｐＨ＝５．８）．ＰＶＳ１：
２５％甘油＋１０％乙二醇＋１０％二甲基亚砜＋１５％聚乙二醇；ＰＶＳ２［１１］：３０％甘油＋１５％乙二醇＋１５％二甲
基亚砜＋０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖；ＰＶＳ３：４０％甘油＋１０％乙二醇＋５％二甲基亚砜＋０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖；ＰＶＳ４：２５％
甘油＋２０％乙二醇＋１５％二甲基亚砜＋０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖．然后分别在０℃下脱水处理４０ｍｉｎ，并对保护剂
ＰＶＳ２ 中的包埋珠脱水处理０～８０ｍｉｎ，研究不同玻璃化保护剂和在ＰＶＳ２中的不同脱水时间对紫参薯茎段
超低温保存的效果．
１．２．４　包埋珠的冰冻保存、化冻及洗涤
将经脱水处理的材料换上新的ＰＶＳ２ 溶液后置于４ｍＬ冻存管中，迅速投入液氮（－１９６℃）中保存，
２４ｈ后在３７℃水浴锅中分别化冻３～９ｍｉｎ，研究化冻时间对紫参薯茎段超低温保存的效果．
在室温下，将化冻后的包埋珠，在含０～１．６ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ液体培
养基中洗涤２次，每次１０ｍｉｎ，研究洗涤液中不同蔗糖浓度对紫参薯茎段超低温保存效果的影响．
１．２．５　包埋珠的细胞活力及成活率测定
对经超低温保存、化冻和洗涤后的包埋珠进行茎段细胞活力和包埋珠成活率测定．茎段细胞活力
采用ＴＴＣ法［１８］测定，以相对活力表示．茎段细胞活力＝超低温保存后包埋珠茎段 ＴＴＣ值／未经超低
温保存茎段ＴＴＣ值×１００％．将茎段包埋珠接入 ＭＳ＋２ｍｇ／ＬＫＴ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋
１ｇ／Ｌ活性炭的固体培养基中，暗培养７ｄ后转光照培养（温光条件同预培养），３周后统计成活率．包
埋珠成活率＝腋芽萌发包埋珠数／接种包埋珠总数×１００％．培养５０ｄ后测定再生苗有关形态及生理
指标，并与常温苗比较．
１．２．６　数据处理
各试验不同因子每个水平处理２０个茎段或包埋珠，重复３次．采用Ｅｘｃｅｌ　２００３及ＳＰＳＳ　１７．０软件处理
数据，Ｄｕｎｃａｎ法分析显著性差异．
２　结果与分析
２．１　低温锻炼对紫参薯包埋碧波玻璃化超低温保存的影响
低温锻炼对紫参薯茎段包埋珠超低温保存的效果有显著影响（表１）．０～８℃下锻炼３ｄ的结果表明，４℃
时，冻后茎段细胞活力和包埋珠成活率最高，细胞活力显著高于０℃和２℃，成活率显著高于０℃、２℃
和８℃．４℃锻炼０～１２ｄ的结果表明，低温锻炼后茎段细胞活力和包埋珠成活率显著提高，其中３～６ｄ
效果最好．由此可见，紫参薯用于包埋玻璃化超低保存的带芽茎段，其试管苗低温锻炼的适宜温度为
４℃，适宜时间为３～６ｄ．
９５第９期　　　　　　　　　 　蔡月琴，等：紫参薯的包埋玻璃化超低温保存
表１　低温锻炼紫蔘薯包埋波玻璃化超低温保存的影响
３ｄ低温锻
炼温度／℃
茎段细胞活力／
％
包埋珠成活率／
％
４℃锻
炼天／ｄ
茎段细胞活力／
％
包埋珠成活率／
％
０　 ６７．７８８±１．９６８ｃＣ　 ３０．０３５±１．９３５ｂｃＣ　 ０　 ２０．９０３±１．２８５ｂＢ　 １１．２９５±０．０４０ｃＣ
２　 ７５．４７６±２．３０４ｂＢ　 ３５．９１７±１．７７８ｂＢ　 ３　 ８８．４９３±１．２５３ａＡ　 ５０．２７５±１．０１４ａＡ
４　 ８７．９０３±１．５８５ａＡ　 ５１．３３１±４．０６０ａＡ　 ６　 ９１．１７７±０．８３７ａＡ　 ５３．２７２±４．８１２ａＡ
８　 ８４．７４１±０．５８４ａＡ　 ４０．７２２±４．２００ｂＢ　 １２　 ８７．５１２±１．３８０ａＡ　 ４７．９０７±３．０７２ｂＢ
　　注：大写字母表示在１％水平差异具有统计学意义，小写字母表示在５％水平差异具有统计学意义．
２．２　预培养基中蔗糖浓度对紫参薯包埋玻璃化法超低温保存的影响
在预培养基中加入０．２５～１．００ｍｏｌ／Ｌ蔗糖时，冻后茎段细胞活力和包埋珠成活率显著提高，且随蔗
糖浓度的增加先升高后下降（表２）．其中，当蔗糖浓度为０．５ｍｏｌ／Ｌ时，细胞活力和成活率最高，且与其他
蔗糖浓度存在显著差异．因此，紫参薯茎段包埋珠预培养基的适宜蔗糖浓度为０．５ｍｏｌ／Ｌ（预培养１ｄ）．
表２　预培养基的蔗糖浓度对紫参薯包埋玻璃化超低温保存的影响
蔗糖浓度／（ｍｏｌ·Ｌ－１） 茎段细胞活力／％ 包埋珠成活率／％
０　 ４６．７２１±０．４２５ｃｄＤ　 １０．８１０±１．４６１ｅＥ
０．２５　 ５２．７９５±０．７３９ｃＣ　 ３２．０９７±０．７６２ｃＣ
０．５０　 ９１．５５７±２．１０２ａＡ　 ５３．００１±１．３６２ａＡ
０．７５　 ６７．０４５±０．０３４ｂＢ　 ３９．８０８±０．７２０ｂＢ
１．００　 ６５．０２９±１．２２７ｂＢ　 ２８．７２１±１．１６７ｄＤ
　　注：大写字母表示在１％水平差异具有统计学意义，小写字母表示在５％水平差异具有统计学意义．
２．３　装载时间对紫参薯包埋玻璃化超低温保存的影响
装载２０～６０ｍｉｎ后，冻后茎段细胞活力和包埋珠成活率显著提高（表３），其中装载４０ｍｉｎ和６０ｍｉｎ
的效果最好，且二者细胞活力和成活率无显著差异．因此，紫参薯茎段包埋玻璃化超低温保存适宜的装载
时间为４０～６０ｍｉｎ．
表３　装载时间对紫蔘薯包埋玻璃化超低温保存的影响
装载时间／ｍｉｎ 茎段细胞活力／％ 包埋珠成活率／％
０　 １９．７６１±０．８１１ｃＣ　 ５．８８０±１．０８３ｃＣ
２０　 ６３．３８１±０．４１２ｂＢ　 ２０．１０２±０．４８２ｂＢ
４０　 ８９．２５２±１．３５３ａＡ　 ５２．９３１±２．４３９ａＡ
６０　 ８５．２４６±０．５６２ａＡ　 ４９．１８２±０．３９２ａＡ
　　注：大写字母表示在１％水平差异具有统计学意义，小写字母表示在５％水平差异具有统计学意义．
２．４　不同保护剂和脱水时间对紫参薯包埋玻璃化超低温保存的影响
在组分不同的４种玻璃化保护剂中０℃脱水４０ｍｉｎ，冻后茎段细胞活力和包埋珠成活率差异具有统
计学意义（图１）．其中保护剂ＰＶＳ２效果最好，其细胞活力和成活率最高，且与其他３种保护剂差异具有
统计学意义．
不经保护剂脱水处理时，包埋珠冻后全部死亡（图２）；经２０～８０ｍｉｎ脱水时，随着时间的延长，茎段
细胞活力和包埋珠成活率先升高后降低．其中，脱水４０ｍｉｎ的细胞活力和成活率最高，且与其他脱水时间
差异具有统计学意义．由此可见，紫参薯茎段包埋珠超低温保存前适宜的脱水条件为：在保护剂ＰＶＳ２中
于０℃下处理４０ｍｉｎ．
２．５　化冻时间对紫参薯包埋玻璃化超低温保存的影响
３７℃水浴化冻３～９ｍｉｎ时，茎段细胞活力和包埋珠成活率先升后降（图３），化冻５ｍｉｎ时最高，
且与其他化冻时间差异具有统计学意义．因此，紫参薯茎段包埋珠超低温保存后适宜的化冻时间为
５ｍｉｎ（３７℃）．
０６ 西南大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　　　　　第３８卷
图１　不同保护剂对茎段细胞活力
和包埋珠成活率的影响
图２　保护剂脱水时间对茎段细胞活力
和包埋珠成活率的影响
２．６　冻后洗涤液蔗糖浓度对紫参薯包埋玻璃化超低温保存的影响
洗涤液蔗糖浓度对冻后茎段细胞活力和包埋珠成活率影响显著（图４），结果与包埋珠脱水时间（图２）
类似．结果表明，冻后洗涤液中适宜的蔗糖浓度为０．８ｍｏｌ／Ｌ．
图３　化冻时间对茎段细胞活力和
包埋珠成活率的影响
图４　洗涤液蔗糖浓度对茎段细胞活力和
包埋珠成活率的影响
２．７　冻后紫参薯再生植株的形成及其形态、生理指标测定
将化冻、洗涤后的包埋珠（图５（ａ））接入含２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ＋０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋３０ｇ／Ｌ蔗糖＋１ｇ／Ｌ活性炭
的 ＭＳ固体培养基中，暗培养７ｄ后转光照下，１周后逐渐恢复生长，部分包埋珠膨大且叶腋处腋芽萌动
（图５（ｂ）），２～３周后芽苗伸长生长，高可达１ｃｍ（图５（ｃ）），６周后分化成正常植株（图５（ｄ））．
紫参薯茎段包埋珠超低温保存后再生苗的平均株高、茎节长和叶片数、叶绿素、类胡萝卜素和可溶性
糖含量、ＰＯＤ和ＳＯＤ活性等形态及生理指标与常温苗无显著差异（表４），说明采用包埋玻璃化法超低温
保存紫参薯茎段是可行的．
３　讨　论
在植物种质包埋玻璃化超低温保存中，预培养时将试管苗置于零上低温条件下锻炼一定时间，可提高
植物体内脯氨酸、多胺含量及降低胞液的渗透势，从而增加植株耐冷冻能力．洪森荣等人［１６］在怀山药茎段
超低温保存中发现低温锻炼可提高茎段冻后成活率，４℃锻炼７ｄ成活率较高；陈加利等人［１９］在扁桃茎尖
包埋玻璃化超低温保存研究中发现未经低温锻炼的茎尖冻后不能存活，４℃锻炼４周后成活率提高．在本
试验中，４℃锻炼６ｄ能显著提高紫参薯冻后茎段的细胞活力和成活率．
预培养除了低温锻炼外，还有高渗培养．一般是在预培养基中加入高浓度的蔗糖［１１］，以降低植物细
胞内自由水含量，提高胞质浓度，降低原生质冰点，从而增强植物的抗冻性．李红民等人［１８］在匍匐胚性
１６第９期　　　　　　　　　 　蔡月琴，等：紫参薯的包埋玻璃化超低温保存
愈伤组织的预培养基中加入０．３ｍｏｌ／Ｌ蔗糖，陈志林等人［２０］在木薯茎尖预培养基中加入０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗
糖都取得了较好的效果．本试验在预培养基中添加０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖时，紫参薯茎段冻后的细胞活力和成
活率最高．
图５　紫参薯茎段包埋玻璃化超低温保存后植株的再生
表４　紫参薯包埋玻璃化超低温保存后再生苗与常温苗的形态、生理指标比较
形态指标及生理指标 常温苗 冻存后再生苗
平均株高／ｃｍ　 ７．８７７±０．１１６Ａａ　 ７．８３３±０．０４０Ａａ
平均叶片数／个 １２．０００±１．０００Ａａ　 １２．３３３±０．５２４Ａａ
平均茎节长／ｃｍ　 ０．９８３±０．０２１Ａａ　 ０．９８２±０．０２５Ａａ
平均芽数／个 ４．６６７±１．１５５Ａａ　 ５．３３３±０．５７７Ａａ
总叶绿素质量分数／（ｍｇ·ｇ－１） １．３０４±０．０４２Ａａ　 １．２９８±０．０２７Ａａ
叶绿素ａ质量分数／（ｍｇ·ｇ－１） ０．９４３±０．０３４Ａａ　 ０．９４１±０．０４０Ａａ
叶绿素ｂ质量分数／（ｍｇ·ｇ－１） ０．３６１±０．０１Ａａ　 ０．３５７±０．００６Ａａ
类胡萝卜素质量分数／（ｍｇ·ｇ－１） ０．１９３±０．００９Ａａ　 ０．２０１±０．００７Ａａ
可溶性糖质量分数／（ｍｇ·ｇ－１） ４．７９３±０．３５９Ａａ　 ４．７８７±０．２４１Ａａ
ＰＯＤ活性／［Ｕ·（ｇ·ｍｉｎ）－１］ １００±５．３０７Ａａ　 １０３．８±４．６５７Ａａ
ＳＯＤ活性／（Ｕ·ｇ－１） １．７４３±０．１９０Ａａ　 １．７３３±０．０９６Ａａ
　　注：大写字母表示在１％水平差异具有统计学意义，小写字母表示在５％水平差异具有统计学意义．
预培养后，为减轻玻璃化过程中高浓度冰冻保护剂的毒害作用，常采用 ＭＳ添加低浓度蔗糖和甘油等混
合物作为转载液，不同植物装载液组成和装载时间不同．以 ＭＳ＋２ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．４ｍｏｌ／Ｌ蔗糖为装载液时，
适宜的装载时间树莓试管苗茎尖为９０ｍｉｎ［２１］，红芽芋胚性愈伤组织［２２］和本试验紫参薯茎段均为４０ｍｉｎ．
玻璃化保护剂在植物种质的超低温保存中有重要作用．经玻璃化保护剂处理后，植物材料在液氮中
被迅速固化成玻璃态，可避免冰晶的形成和防止细胞因脱水瓦解和溶液电解质浓度过高带来的伤害［１１］．
菊花茎尖在上述玻璃化保护剂ＰＶＳ２中０℃处理１５ｍｉｎ，成活率达８５．７％［２３］，怀山药带芽茎段在ＰＶＳ１
２６ 西南大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　　　　　第３８卷
中，０℃处理６０ｍｉｎ，成活率达７７．１４％［２４］．脱水时间对超低温保存效果也有显著影响．怀地黄带芽茎段
在包埋玻璃化保存中脱水３０ｍｉｎ的再生率是脱水６０ｍｉｎ的８倍［２５］．在本试验中，紫参薯带芽茎段最佳
玻璃化保护剂为ＰＶＳ２，０℃下适宜的脱水时间为４０ｍｉｎ．
化冻是超低温保存后的重要环节．植物材料液氮保存后，快速解冻可避免细胞再次结冰造成机械损伤
和渗透伤害［１０］．木薯茎尖的化冻条件为４０℃化冻１．５ｍｉｎ［２０］，红芽芋胚性愈伤组织为３７℃化冻３ｍｉｎ［２２］．
在本试验中，紫参薯茎段适宜的化冻条件为３７℃化冻５ｍｉｎ．
化冻后的植物材料用适宜浓度的蔗糖溶液洗涤，既可除去细胞内玻璃化液中的有毒成分，又能防止渗
透损伤．怀山药茎段化冻后用含７％蔗糖的ＭＳ溶液洗涤４次（每次１０ｍｉｎ），成活率显著提高［２４］．在本试验
中，紫参薯带芽茎段化冻后用含０．８ｍｏｌ／Ｌ蔗糖的 ＭＳ溶液洗涤，茎段细胞活力和成活率最高．
在本试验中，紫参薯带芽茎段包埋玻璃化超低温保存后再生苗的诸多形态和生理指标与常温苗无显著
差异，说明包埋玻璃化超低温保存技术可用于紫参薯的种质保存，所得各种参数可为其具体应用提供技术
参考．但有关参数水平还可优化，包埋珠超低温保存后再生苗的遗传稳定性还需深入研究．
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Ｔｉｐｓ　Ｆｏｌｏｗｉｎｇ　Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ－Ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ　ｏｒ　Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ－Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０００，１９（８）：
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Ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ　Ｃｅｌｕｌａｒ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ－Ｐｌａｎｔ，２００２，３８（６）：６０２－６０７．
［１４］ＬＩＵ　Ｊｉａｎ－ｆｅｎｇ，ＣＨＥＮＧ　Ｙｕｎ－ｑｉｎｇ，ＱＩＮ　Ｘｉａｏ－ｗｅｉ．Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｈｏｏｔ　Ｔｉｐｓ　ｏｆ　Ｒｈ．Ｓａｃｈａｌｉｎｅｎｓｉｓ　ｂｙ　Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ－
Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．吉林师范大学学报（自然科学版），２００９（３）：６１－６５．
［１５］ＨＩＲＡＩ　Ｄ，ＳＡＫＡＩ　Ａ．Ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ　Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｗｅｅｔ　Ｐｏｔａｔｏ［Ｉｐｏｍｏｅａ　ｂａｔａｔａｓ（Ｌ．）Ｌａｍ．］ｂｙ　Ｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇ　Ｃｏｎｄｉ－
ｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｏｓｍｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｒｅｐｏｒｔｓ，２０００，２１（１０）：９６１－９６６．
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［１７］ＢＡＲＲＡＣＯ　Ｇ，ＳＹＬＶＥＳＴＲＥ　Ｉ，ＣＯＬＬＩＮ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｈｉｓｔｏｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｙａｍ （Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ａｌａｔａ）Ｓｈｏｏｔ　Ｔｉｐｓ
Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｂｙ　Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ－Ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｒｏｔｏｐｌａｓｍａ，２０１４，２５１（１）：１７７－１８９．
［１８］李红民，马晖玲．玻璃化法超低温保存匍匐翦股颖胚性愈伤组织及其植株再生 ［Ｊ］．甘肃农业大学学报，２００９，４４（４）：
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３６第９期　　　　　　　　　 　蔡月琴，等：紫参薯的包埋玻璃化超低温保存
［２０］陈志林，陆柳英，李开绵．木薯茎尖包埋—玻璃化法超低温保存及植株再生 ［Ｊ］．广西热带农业，２００７（４）：１９－２２．
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Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｕｒｐｌｅ　Ｙａｍ（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ａｌａｔａ）
ｂｙ　Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ－ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ＣＡＩ　Ｙｕｅ－ｑｉｎ，　ＷＡＮＧ　Ｙａｎ－ｐｉｎｇ，　ＺＨＵＡＮＧ　Ｊｕｎ－ｅ，　ＬＩＮ　Ｙａｎ－ｒｕ，
ＫＥ　Ｍｅｉ－ｙｕ，　ＬＵ　Ｌｕａｎ－ｍｅｉ，　ＺＨＡＮＧ　Ｚｅ－ｈｏｎｇ
Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｉｎ　Ｎａｎ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ　Ｆｕｊｉａｎ　３６３０００，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｕｒｐｌｅ　ｙａｍ（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ａｌａｔａ）ｂｙ　Ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ　ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ．
Ｓｔｅｍｓ　ｗｉｔｈ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄｓ　ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ　ｉｎ　Ｍｕｒａｓｈｉｇｅ　ａｎｄ　Ｓｋｏｏｇ（ＭＳ）ｍｅｄｉｕｍ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　２％ｓｏｄｉｕｍ
ａｌｇｉｎａｔｅ　ａｎｄ　０．４ｍｏｌ／Ｌ　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｗｅｒｅ　ｐｌａｃｅｄ　ｉｎ　ｌｉｑｕｉｄ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　０．１ｍｏｌ／Ｌ　ｃａｌｃｉｕｍ
ｃｈｌｏｒｉｄｅ　ａｎｄ　０．４ｍｏｌ／Ｌ　ｓｕｃｒｏｓｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｂｅａｄｓ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ　ｗｉｔｈ　ｌｉｑｕｉｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ（ＬＮ）．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ
ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌ　ｖｉｔａｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｅｍｂｅｄｄｉｎｇ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ａｓ　ｉｎｄｅ－
ｘｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｎｄｅｘｅｓ　ｏｆ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ａｎｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｐｌａ－
ｎｔｌｅｔｓ　ｗａｓ　ｍａｄｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｏｆ　ｐｕｒｐｌｅ　ｙａｍ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｄ－ｈａｒｄｅｎｅｄ　ｆｏｒ　６ｄａｔ　４℃，
ｔｈｅｎ　ｓｔｅｍｓ　ｗｉｔｈ　ａｘｉｌａｒｙ　ｂｕｄｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｃｉｓｅｄ　ａｎｄ　ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｂｅａｄｓ　ｉｎ　ｓｔｅｒｉｌｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｐｒｅ－
ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｌｉｑｕｉｄ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ，０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　ａｎｄ　０．５ｍｏｌ／Ｌ　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｆｏｒ
１ｄ．Ｔｈｅ　ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ　ｂｅａｄｓ　ｗｅｒｅ　ｌｏａｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ　ｐｌｕｓ　ｗｉｔｈ　２ｍｏｌ／Ｌ　ｇｌｙｃｅｒｏｌ　ａｎｄ　０．４ｍｏｌ／Ｌ　ｓｕ－
ｃｒｏｓｅ　ｆｏｒ　４０ｍｉｎ　ａｔ　ｒｏｏｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｄｅｈｙｄｒａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ＰＶＳ２ｆｏｒ　４０ｍｉｎ　ａｔ　０℃．Ｔｈｅ　ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ
ｂｅａｄｓ　ｗｅｒｅ　ｐｌｕｎｇｅｄ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｉｎｔｏ　ＬＮ　ｆｏｒ　１ｄａｙ　ａｆｔｅｒ　ｄｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｒａｐｉｄｌｙ　ｔｈａｗｅｄ　ｉｎ　ａ　ｗａｔｅｒ　ｂａｔｈ　ｆｏｒ
５ｍｉｎ　ａｔ　３７℃．Ａｆｔｅｒ　ｗａｒｍｉｎｇ，ｔｈｅ　ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ　ｂｅａｄｓ　ｗｅｒｅ　ｒｉｎｓｅｄ　ｔｈｒｅｅ　ｔｉｍｅｓ　ｗｉｔｈ　ｌｉｑｕｉｄ　ＭＳ　ｍｅｄｉｕｍ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ，０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　ａｎｄ　０．８ｍｏｌ／Ｌ　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｆｏｒ　１０ｍｉｎ　ａｔ　２５℃，ｔｈｅｎ　ｔｒａｎｓｆｅｒｒｅｄ　ｔｏ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄ　ｗｉｔｈ　２ｍｇ／Ｌ　ＫＴ，０．２ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ　ａｎｄ　３０ｇ／Ｌ　ｓｕｃｒｏｓｅ　ｐｌｕｓ　０．１ｇ／Ｌ
ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｒｂｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｄａｒｋ　ｆｏｒ　７ｄｂｅｆｏｒｅ　ｅｘｐｏｓｕｒｅ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｌｉｇｈｔ．Ｔｈｅ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｂｅａｄｓ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｔｏ　６０％
ａｆｔｅｒ　ｔｗｏ　ｗｅｅｋｓ　ｏｆ　ｌｉｇｈｔ　ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｈａｄ　ｎｏ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ
ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｎｏｒｍａｌ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｕｒｐｌｅ　ｙａｍ （Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ａｌａｔａ）；ｓｔｅｍ　ｗｉｔｈ　ｂｕｄｓ；ｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ　ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ
责任编辑　潘春燕　　　　
４６ 西南大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　　　　　第３８卷