全 文 ：2014 第十六卷 第四期 ★Vol.16 No.4
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
收稿日期：2013-07-18
修回日期：2013-07-24
＊ 国家自然科学基金委地区项目（81160507）：三脉菝葜总皂苷抗痛风性关节炎药效物质的明晰及构效关系的研究，负责人：黄慧莲；江西省科
技厅青年科学家培养对象（20112BCB23012）：井冈之星，负责人：黄慧莲。
＊＊ 通讯作者：黄慧莲，博士，副教授，主要研究方向：中药药效物质基础研究。
抗痛风性关节炎中草药小叶菝葜中白藜芦醇
含量测定方法＊
黄慧莲＊＊，刘科兰，任 刚，邵 峰，刘荣华
（江西中医药大学现代中药制剂教育部重点实验室 南昌 330004）
摘 要：目的：小叶菝葜是抗痛风性关节炎的中草药，探讨行质量评价方法很有必要。菝葜科植物中
的标志性化合物—白藜芦醇是公认的具有明确疗效的化合物。方法：高效液相色谱（HPLC），流动相乙
腈-水（25∶75）；检测波长 320 nm。结果：该方法可以用于小叶菝葜中白藜芦醇的含量测定。结论：本研究
可建立小叶菝葜中白藜芦醇的测定含量方法，为进一步制定该中草药的质量标准奠定基础。
关键词：小叶菝葜 白藜芦醇 含量测定 HPLC
doi: 10.11842/wst.2014.04.024 中图分类号：R284 文献标识码：A
小叶菝葜 Smilax microphylla C.H.Wright 为菝葜
科（Smilacaceae）菝葜属植物，又名乌鱼刺、地茯苓
藤，主产于华东及华南各省，其味甘、苦，性平，《全
国中草药汇编》、《贵州草药》、《江西草药》、《湖南药
物志》、《贵州草药》、《陕西中草药》均记载其有祛风
活络，祛痰止咳的功效，临床主要用于治疗痛风性
关节炎、筋骨疼痛、支气管炎、肺结核等疾患。研究
表明菝葜属中草药普遍具有抗炎作用，并且治疗关
节炎效果显著 [1~5]。现代药理研究表明，口服小叶菝
葜提取物可以明显促进高尿酸血症模型大鼠的尿
酸排泄，降低血液中的尿酸浓度 [6]。
白藜芦醇（Resveratrol）是存在于葡萄、虎杖等多
种药用或食用植物中的一种多酚类化合物。近代药
理研究表明白藜芦醇具有抗菌、抗氧化、清除自由
基、预防肿瘤、保护心血管、保护肝脏以及抑制花生
四烯酸及其代谢物生成等作用 [7~10]，其抑制癌细胞、
降低血脂、防治心血管疾病、抗氧化、延缓衰老等作
用比较明显，被喻为继紫杉醇之后的又一新型绿色
抗癌药物。
小叶菝葜是民间认可疗效显著的一味中草药，
目前几乎没有其相关研究报道，也没有该植物的分
析方法。作者前期重点对其药效物质进行了分离纯
化，得到一系列的多酚类和甾体皂苷类化合物 [11，12]。
白藜芦醇是菝葜科植物中共有的药效物质，本文首
次建立白藜芦醇在小叶菝葜中的含量测定方法，该
方法简单易行，耗时短，可为进一步评价小叶菝葜
的质量奠定基础。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药
主要仪器：Agilent Technologies 1200 Series 高效
液相色谱仪（G1322A 在线脱气、G1311A 四元泵、
G1316A TCC、G1314B VWD）（美国 Agilent 公司），
Sartorius BT25S 型分析天平（北京赛多利斯仪器系
统有限公司），KQ-250VDB 型双频数控超声清洗器
（昆山市超声仪器有限公司）。
试剂与药材：白藜芦对照品（批号：111535-
200502）购自中国药品生物制品检定所，双蒸水（实
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水平 A甲醇量/mL B提取时间/min C提取温度/℃
1 20 30 20
2 35 40 30
3 50 50 40
表 1 因素水平表
实验号 A B 峰面积
1 1 1 222.8
2 1 2 236.8
3 1 3 228.6
4 2 1 260.2
5 2 2 261.6
6 2 3 260.1
7 3 1 255.3
8 3 2 270.9
9 3 3 281.9
K1 229.4 246.1
K2 260.6 256.4
K3 269.4 256.9
R 40 10.8
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
251.3
259.6
248.5
11.1
D
1
2
3
3
1
2
2
3
1
表 2 正交试验结果
验室自制），乙腈（HPLC 级，美国 Tedia），小叶菝葜
药材由湖南吉首大学张代贵老师采集并鉴定。
1.2 实验方法
1.2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent C18 （4.6 mm×200 mm，5 μm）；
流动相：乙腈-水（25∶75）；检测波长：320 nm；温度：
30℃；流速：1 mL·min-1；进样量：10 μL。
1.2.2 对照品溶液的制备
精密称取白藜芦醇对照品 2.2 mg，置 5 mL 容
量瓶中，加甲醇制成浓度为 0.44 mg·mL-1 的对照
品溶液。
1.2.3 供试品溶液的制备
分别选择试剂加入量（A）、提取时间（B）、提取
温度（C）设计 3 因素 3 水平表，优选提取白藜芦醇
的最佳条件。
1.2.4 正交设计优选提取条件
取菝葜药材粉末（过 60 目筛）约 0.5 g，精密称
定，置 50 mL 具塞锥形瓶中，加入甲醇 50 mL，超声
提取 50 min（30℃，80 Khz），放置至室温，过滤至 50
mL 容量瓶中加甲醇至刻度，摇匀，用 0.22 μm 微孔
滤膜过滤为供试品溶液。
2 结果与分析
2.1 优化提取方法实验
用正交试验设计法优选超声提取小叶菝葜中
白藜芦醇的条件，见表 1、2。
因素水平极差值：RA＞RC＞RB，甲醇用量对其影
响因素最大，其次是超声时间和超声温度。最佳提
取工艺为：A3B3C2，即取小叶菝葜粉末约 0.5 g（过三
号筛），精密加入甲醇 50 mL，超声（30℃，80 kZ）提
取 50 min，用甲醇定容至刻度。0.22 μm 微孔滤膜
过滤，即得供试品溶液。
2.2 方法学考察
2.2.1 系统适用性考察
取供试品溶液依法测定，记录色谱图，结果白
藜芦醇的保留时间为 13.567 min，理论板数大于
5 000，与相邻峰的分离度大于 1.5，见图 1。
2.2.2 线性关系考察
精密称取白藜芦醇对照品 0.64 mg，置 10 mL
容量瓶中，用甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，备用。逐
次稀释配置成 6.4、4.9、3.2、1.6、0.8、0.4 μg·mL-1。
精密吸取上述对照品溶液各 10 μL，注入高效液相
色谱仪中，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品
的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准
曲线，回归方程为 Y=95.932X-7.354 5，R2=0.999 4，
白藜芦醇在 0.4~6.4 μg·mL-1线性关系良好。
2.2.3 精密度试验
取白藜芦醇对照品溶液，按上述色谱条件进行
因素 偏差平方和 自由度 F 显著性
A 2 649.127 2 79.841 0.012*
B 222.887 2 6.718 0.13
C 201.607 2 6.076 0.141
误差 33.180 2
表 3 方差分析表
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图 1 白藜芦醇对照品和小叶菝葜样品的 HPLC 图谱
注：A.白藜芦醇对照品，B.小叶菝葜药材；1.白藜芦醇。
测定。重复进样 6 次，测定白藜芦醇峰面积，结果
RSD 值为 0.88%，表明精密度良好。
2.2.4 稳定性试验
取供试品溶液，按上述色谱条件分别于 0、2、4、
6、8、12 h 测定，结果显示，RSD 值为 2.97%，表明样
品溶液制备后 12 h 内稳定。
2.2.5 重复性试验
精密称取同一样品 6 份，依样品测定方法测
定，RSD 值为 0.7%。
2.2.6 加样回收率试验
精密称取已知白藜芦醇含量的样品 6 份，按上
述样品溶液制备方法制备供试品溶液，测定，平均
加样回收率为 100.5%，RSD 值为 2.1%。
2.3 样品测定
精密吸取样品溶液 10 μL，注入高效液相色谱
仪，记录峰面积，根据标准曲线的回归方程计算，小
叶菝葜中白藜芦醇的含量为 325 μg·g-1。
3 讨论
3.1 提取方法的选择试验
分别考察回流提取（加热回流 2 h）、超声提
取（30℃，80kHz）和冷浸法（12 h），过滤至 50 mL
容量瓶中，用甲醇定容至刻度，测定。实验结果显
示，超声提取法和回流提取法得到的白藜芦醇的
峰面积相似，但是超声提取法省时，故采用超声提
取法。
3.2 提取溶剂的选择试验
分别考察甲醇、70%乙醇和乙酸乙酯为提取
溶剂，超声（30℃，80 kHz）30 min，过滤至 50 mL
容量瓶中，定容后测定。结果显示，采用甲醇溶剂
提取得到的白藜芦醇的峰面积最大，故采用甲醇
溶剂提取。
3.3 分析方法的选择试验
实验中考察了 Alltimate C18（250 mm×4.6 mm，5
μm）和 Agilent C18（200 mm ×4.6 mm，5 μm）色谱
柱，发现使用 Alltimate C18色谱柱时，得到的白藜芦
醇的色谱峰有明显的前沿峰，且分离效果不好。
Agilent C18 色谱柱分离得到的色谱峰的峰形良好，
分离效果好。分别考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-
0.3%磷酸水的流动相系统。使用甲醇-水系统时，白
藜芦醇的峰宽较宽，洗脱能力差，但是乙腈-水系统
得到的白藜芦醇的峰形良好，且重现性好。实验中
还考察了 25℃、30℃、35℃的柱温，发现在 30℃条件
下分离得到的色谱峰的峰形良好。
小叶菝葜属于民间草药，关注者甚少。本文作者
初次进行该植物的质量分析研究，主要源于白藜芦
醇是菝葜科植物中的代表性化合物。菝葜科植物在
世界分布广泛，我国是菝葜属和肖菝葜属的主要分
布区，其中菝葜属 79 种，肖菝葜属 9 种，主要生长
在长江以南和西南的热带和亚热带地区。迄今菝葜
科只有两味药入中国药典，即菝葜和土茯苓。作者
希望通过对小叶菝葜的研究，拓宽该属植物的应用
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世界科学技术—中医药现代化★中药研究
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
范围。本文应用现有成熟的 HPLC 技术，首次探讨小
叶菝葜的质量分析方法，抛砖引玉，亟待同行更多
深入的研究。
参考文献
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Content Determination of Resveratrol in Smilax macrophylla Using HPLC
Huang Huilian, Liu Kelan, Ren Gang, Shao Feng, Liu Ronghua
(Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Key Laboratory of Modern Preparation of Traditional Chinese
Medicine, Ministry of Education, Nanchang 330004, China)
Abstract: Smilax macrophylla is a type of Chinese herbal medicine for the treatment of gouty arthritis. Study on its
quality evaluation method was very necessary. Resveratrol (trans-3,5,4-trihydroxystilbene), its generally acknowl -
edged major compound with definite therapeutic effect, was detected in the root of S. macrophylla. HPLC was used
with the mobile phase of acetonitrile-water (25 ∶75). The detection wavelength was 320 nm. The results showed that
the method can be used in content determination of resveratrol in S. macrophylla. It was concluded that the study
was able to establish content determination method of resveratrol in S. macrophylla in order to lay the foundation of
the establishment of quality standard of this Chinese herbal medicine.
Keywords: Smilax macrophylla, resveratrol, content determination, HPLC
（责任编辑：张丰丰 张志华，责任译审：王 晶）
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