全 文 ：中 药 研 究
毛脉酸模果实不同部位中大黄素
及白藜芦醇成分含量分析
陈智岩1 ,王振月1＊ ,周晓慧1 ,王伟2
(1.黑龙江中医药大学 ,黑龙江哈尔滨 150040;2.黑龙江省中医研究院制药厂 ,黑龙江 哈尔滨 150321)
摘 要:目的:考察毛脉酸模果实不同部位中大黄素及白藜芦醇的含量 ,为毛脉酸模果实的合理开发利
用提供理论依据 。方法:采用高效液相色谱法进行大黄素及白藜芦醇的含量分析。结果:毛脉酸模一等
种子的大黄素及白藜芦醇含量均高于二 、三等种子 ,白藜芦醇在一等种子中含量较高 ,大黄素在花被片
中含量较高 。
关键词:毛脉酸模果实;大黄素;白藜芦醇;HPLC
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1002-2392(2008)01-0037-03
基金项目:国家自然科学基金项目(项目编号:30270156)
收稿日期:2007-11-15 修回日期:2007-12-06
作者简介:陈智岩(1981-),女 ,黑龙江中医药大学 2005级生药学硕士
研究生 ,助理工程师。
＊通讯作者:王振月(1956-),男 ,黑龙江中医药大学药学院教授 ,硕士
研究生导师, 主要从事中药资源开发与生物技术研究。
Tel:0451-82196254 ,E-mai l:Wangzhen yue@163.com
毛脉酸模(R.gmelini)是蓼科(Polygonaceae)酸模
属(Rumex.L)多年生草本植物 ,主要分布在我国东北 、
华北等地区 ,黑龙江省主要分布于大 、小兴安岭地区。
毛脉酸模在民间以根入药 ,对淋病 、上呼吸道感染 、癣
病和疮毒有确切疗效 。而对毛脉酸模果实成分的含量
研究报道极少 ,本实验利用高效液相色谱法对毛脉酸
模果实不同部位包括三个等级种子 、果皮及花被片中
大黄素及白藜芦醇的含量进行了分析测定。
据报道 ,毛脉酸模中含有白藜芦醇及其苷等二苯
乙烯类成分及大黄素等蒽醌类成分 。白藜芦醇是植物
界分布较广的二苯乙烯类化合物 ,人们在不断的研究
中发现其具有多种药理活性 ,包括抗肿瘤活性[ 1-3] ,抗
氧化性和抗血小板活性[ 4] ,保肝 、利肝作用[ 5] ,镇咳 、平
喘作用 ,抗病原微生物作用[ 6] 等。国内外对大黄素的
研究报道也较多 ,其具体的生物活性表现在抑制胰酶
作用[ 7] ,抑菌 、抗炎及免疫调节作用[ 8-11] ,肝 、肾保护作
用[ 12 、13] 及对胃肠道有双向调节作用[ 14] ,并且对小鼠移
植性肿瘤及人肺 A-549的分裂有明显的抑制作用 ,是
很好的肿瘤细胞生长抑制剂[ 15、16] 。本文探讨了不同浓
度赤霉素浸种不同时间对毛脉酸模种子发芽情况的影
响 ,并对毛脉酸模种子 、果皮及花被片中白藜芦醇及大
黄素的含量进行了测定 ,为毛脉酸模果实及种子的质
量评价提供了依据。
1 试验材料
毛脉酸模种子 2005 年采自黑龙江中医药大学药
用植物园 ,采后室内自然阴干 ,经黑龙江中医药大学王
振月教授鉴定为 Rumex.Gmelini 的种子 。按毛脉酸模
种子的性状特征将其分为三个等级 ,并将三个等级的
毛脉酸模种子 、花被片及果皮分别粉碎成细粉(过 80
目筛)。大黄素 、白藜芦醇由中国药品生物制品检定所
提供;甲醇 、乙腈为 Dikma公司产品;色谱纯 、磷酸由天
津市天河化工厂提供;甲醇(分析纯)由北京化工厂提
供 、水为自制重蒸水 。
2 仪器与设备
美国 Waters 高效液相色谱仪(Waters600 型泵 ,
2487型检测器 ,Empower色谱工作站),Waters C18分析
柱(3.9mm×150mm , 5μm),Dikma 微孔滤膜(0.45μm),
瑞士Mettler AE240电子天平。
3 试验方法与结果
3.1 色谱条件 大黄素的色谱条件:流动相甲醇
0.1%磷酸水 25∶75 ,柱温:40℃,流速 0.8ml min ,进样
量为 20μl ,检测波长 254nm。白藜芦醇的色谱条件:流
动相为乙腈 0.1%磷酸水 70∶30 ,柱温 40℃,流速为
0.8ml min ,进样量 20μl ,检测波长 365nm 。
3.2 标准曲线的绘制 精密称取在 60℃减压干燥至
恒重的大黄素对照品适量 , 加甲醇制成每 1ml 含
0.14mg 的溶液 ,然后分别吸取 2μl 、4μl 、6μl 、8μl 、10μl标
准溶液注入高效液相色谱仪 ,进行测定 。精密称取在
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60℃减压干燥至恒重的白藜芦醇对照品适量 ,加甲醇
制成每1ml含0.036mg 的溶液 ,然后分别吸取 1μl 、2μl 、
3μl 、4μl 、5μl标准溶液注入高效液相色谱仪 ,进行测定 。
最后以进样量 X(μg)为横坐标 ,峰面积 Y为纵坐标分
别绘制标准曲线 ,并得出回归方程 。
表 1 三个等级毛脉模种子清水浸酸种的发芽情况表
等级 性 状 1 2 3 千粒重/ g 发芽率/ % 发芽势/ % 发芽指数
一 棕褐色 ,子粒饱满 ,三棱形 1.44142 1.46017 1.41823 1.43994 88.3 58 31.83
二 棕黄色 ,子粒较饱满 ,三棱形 1.01520 1.08456 1.06335 1.05437 83.6 46 28.19
三 浅棕色 ,子粒不饱满 ,长三棱形 0.74826 0.73562 0.74223 0.74204 76.3 28 20.75
3.3 供试品溶液的制备 分别精密称取毛脉酸模三
个等级种子 、花被片 、果皮粉末(过 80目筛)500mg ,加
50%乙醇 70ml索氏提取 4h ,过滤 ,蒸干。用甲醇溶解
并定容至 25ml ,即为供试品溶液。
表 2 白藜芦醇及大黄素的回归方程表
成分 回归方程 r
白藜芦醇 y=8.06×106x+62574 0.9998
大黄素 y=4.06×106x+102416 0.9997
3.4 稳定性试验 取同一份一等种子供试品溶液 ,分
别于 0h 、2h 、4h 、6h 、8h 、10h进样 20μl ,记录峰面积 ,结
果大黄素的 RSD 值为 1.3%、白藜芦醇的 RSD 值为
0.8%。表明供试品溶液在 10h内稳定。
3.5 重复性实验 精密称取毛脉酸模一等种子粉末
5份 ,按 3.2.3项下供试品溶液的制备方法制备样品并
测定 ,记录峰面积 ,结果大黄素的 RSD值为 1.1%、白
藜芦醇的 RSD值为 1.8%,表明本方法的重复性良好 。
3.6 精密度实验 精密吸取各对照液 20μl ,连续进样
6次 ,大黄素和白藜芦醇峰面积的 RSD分别为 1.6%和
1.4%,表明仪器精密度良好。
3.7 加样回收率实验 精密称取毛脉酸模一等种子
粉末一定量 ,加入一定量混合对照品溶液 ,按供试品溶
液方法制备样品溶液 ,采用上述色谱条件测定 ,大黄素
和白藜芦醇的回收率分别为 100.7%和 100.2%, RSD
[ 0]分别为 1.12%和 0.83%。
3.8 结果与分析 毛脉酸模种子中大黄素及白藜芦
醇的含量与种子的发育及次生代谢产物的积累有关 ,
由表 3可知 ,一等种子中大黄素的含量较二 、三等种子
含量高 ,其在花被片中的含量明显高于种子及果皮;白
藜芦醇在一等种子中的含量颇高 ,而二 、三等种子及花
被片中未检测到其特征峰 ,果皮中含量较低。
表 3 毛脉酸模种子 、花被片及果皮中大黄素 、白藜芦醇的含量
成分 毛脉酸模种子中含量‰一等 二等 三等 花被片‰ 果皮‰
白藜芦醇 0.1790 ——— ——— ——— 0.0920
大黄素 0.0800 0.0096 0.0084 0.4540 0.1740
图 1 毛脉酸模种子及花被片中大黄素 、白藜芦醇的 HPLC谱图
1.大黄素 2.白藜芦醇
a-大黄素标准品 b-白藜芦醇标准品 c、d-样品
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4 讨论
种子中大黄素和白藜芦醇含量与种子的成熟度正
相关 ,种子发育的较成熟 ,其含量也相应较高 ,即次生
代谢产物的含量与种子的生长及发育有关。由毛脉酸
模果实不同部位中的大黄素和白藜芦醇的含量测定可
知 ,种子中大黄素和白藜芦醇的含量与种子的饱满度
及发育程度有关 ,种子发育的好 ,子粒饱满 ,则其含量
也会相应较高 ,相反 ,种子发育不成熟 ,子粒干瘪 ,其含
量会较低甚至检测不到。
选择种子入药时 ,需尽量选择饱满的种子以保证
有效成分(活性成分)的含量及药效 。此外花被片及果
皮中含有较多的大黄素 ,尤其是花被片中的大黄素含
量几乎达到一等种子中大黄素含量的 5倍 ,且花被片
较种子易得 ,所以当以大黄素为有效成分(活性成分)
入药时 ,选用花被片较种子更佳。二 、三等种子及果皮
中检测不到白藜芦醇成分的特征峰 ,分析其原因一是
种子中所含的白藜芦醇成分原本较少 ,二 、三等种子的
发育及饱满度均较一等种子差 ,所以白藜芦醇成分的
蓄积量则更少;二是由于植物次生代谢途径在植物体
内或细胞中并不全部开放 ,而是定位于某一器官 、组
织 、细胞或细胞器中并受到独立的调控 ,推测果皮中不
存在白藜芦醇的次生代谢途径所以检测不到其特征
峰。在操作中分离果皮与种子颇为困难 ,因此生产中
选择果实入药较种子更经济 、简便 。
参考文献:
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百蕊草药材中山奈酚和总黄酮的含量测定
徐国兵1 , 2＊ ,黄万著1 ,王德群2 ,汪海孙1 ,彭代银2
(1.安徽省药品检验所 ,安徽 合肥 230051;2.安徽中医学院 ,安徽 合肥 230031)
摘 要:目的:应用高效液相色谱法(HPLC)和紫外分光光度法(UV),分别测定百蕊草药材中山奈酚和总
黄酮的含量 。方法:以甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50)为流动相 , Elite C18柱 ,在波长为 365 nm 处进行
HPLC 、UV测定。结果:山奈酚在 HPLC进样 0.0594 ～ 1.896μg 和在 UV 0.00164 ～ 0.0164 mg·ml范围内线
性关系良好 ,平均回收率分别为 94.6%、91.8%。结论:该方法较简便 、准确 、可靠 ,可以用于百蕊草的质
量控制。
关键词:百蕊草;山奈酚;总黄酮;含量测定
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:1002-2392(2008)01-0039-03
基金项目:安徽省重点科研项目(05023095)
收稿日期:2007-11-20 修回日期:2007-12-08
＊通讯作者:徐国兵(1966-), 男 ,博士 ,副主任药师 ,Tel:(0551)3358050
-2078 ,13966795279 , E-mail:xgb119@163.com
百蕊草为檀香科百蕊草属植物百蕊草 Thesium
chinese Turey 的干燥全草。收载于 1977 年版《中华人
民共和国药典》 ,有清热解毒 ,补肾涩精之功效 。多用
于治疗急性乳腺炎 、肺炎 、扁桃体炎以及肾虚腰痛 、遗
精等症状[ 1] 。百蕊草抗炎作用主要是其所含的黄酮类
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ABSTRACTS FROM ORIGINAL ARTICLES
Exploration on thinking approach and methodology of syn-
drome normalization of TCM on epilepsy
ZHENGXiang-Chun1 , LIU Jin -Min2
Abstract:Research of TCM syndrome is basic and scientific prob-
lem in epilepsy on diagnose and treatment of TCM , and is central
and difficult problem in research of epilepsy on TCM syndrome di-
agnostic and therapeutic criteria too.Mirroring and analyzing the
existent achievement , study method and technology in research of
TCM syndrome , to try to explore and grope the way of research of
syndrome fitting epilepsy.Exploring syndrome standardization of
TCM and system of differentiation of symptoms and signs on epi-
lepsy , the thinking approach and presumption are proposed:Mode-
rn groups research of TCM syndrome is new thinking approach of
epilepsy on research of syndrome;Combination of disease and syn-
drome and prescription corresponding syndrome are the important
way of the research of TCM syndrome on epilepsy;Modern math-
ematical statistics method and the technique of nonlinear analysis
are the feasible method of the research of TCM syndrome on epi-
lepsy.
Author s address:1.Beijing University of Traditional Chinese
Medicine , Beijing , 100029 , China;2.Department of Emergency ,
Dongfang Hospital ,Beijing University of Traditional Chinese Medi-
cine ,Beijing , 100078 ,China
Key words:epilepsy;syndrome of TCM;normalization;thinking
approach (Original article on page 1)
Effects of acupuncture on the expression of OPG and BMP-
2 in aorta of SAMP6
ZHANG Xue-zhu , PENG Ying -mei , LIU Cun -zhi , YU Jian-chun ,HAN Jing -xian
Abstract:Objective:To investigate the effects of acupuncture on
arterial calcification in SAMP6 mice.Methods:In this study , the
sections of arteriae aorta were stained by HE and von Kossa meth-
ods to demonstrate the aortic calcification.The expression of OPG
and BMP -2 in the aorta was determined by Western Blotting
analysis.Results:Slight calcification was detected in the tunica
media of SAMP6.Acupuncture could remodel the abnormal archi-
tecture of aorta wall , up-regulate the expression of OPG and down-regulate the expression of BMP-2 in the aorta of SAMP6.Con-
clusions:
Thoracic aortic wall calcification observed in SAMP6 was correlat-
ed with abnormal expression of OPG and BMP-2.Acupuncture
could inhibit calcium deposition in aorta wall by protecting the aor-
ta wall cells and regulating the expression of some local factors of
bone metabolism to normal.
Author s address:Acupuncture &Moxibustion Research Insti-
tute ,The First Teaching Hospital of Tianjin University of Tradition-
al Chinese Medicine , Tianjin 300193 ,China
Key words:vascular calcification;osteoporosis;senescence ac-
celerated mouse P6 (Original article on page 13)
Protective effect of total flavonoids of Hedysarum polybotry on
oxidized LDL related to endothelial cells injury
CHEN Che1 , YANG Ya -li1 , CHU Hui -yuan 1 , WANG Ya -
li1 ,DONG Jian -yong2
Abstract:Objective:To investigate protective effect of total fla-
vonoids of Hedysarum polybotry on human umbilical vein endothe-
lial cells injury induced by oxidized LDL (ox-LDL).Method:
Human umbilical vein endothelial cellswere injuried by ox-LDL.
Lactate dehydrogenase(LDH)and nitric oxide(NO)in the cul-
ture medium , superoxide dismutase(SOD)and nitric oxide syn-
thase(NOS)in the cell were measured by spectroscopy , respec-
tively.Result:Total flavonoids of Hedysarum polybotry could de-
crease the release of LDH , increase the content of NO , and en-
hance activity of SOD and NOS significantly in endothelial cells
which were injuried by ox-LDL.Conclusion:Total flavonoids of
Hedysarum polybotry has protective effect on human umbilical vein
endothelial cells injury induced by ox-LDL ,which may be related
to increasing the antioxidant capacity of human umbilical vein en-
dothelial cells.
Author s address:1.Gansu College of Traditional ChineseMedi-
cine , Lanzhou 730000;2.School of Pharmacology ,Wenzhou Medi-
cal College ,Wenzhou 325035
Key words:total flavonoids of Hedysarum polybotry;umbilical
vein endothelial cells;ox-LDL;antioxidation(Original article on page 19)
The component analysis of rhein and resveratrol in the diffent
position of fruit of Rumex.Gmelini
CHEN Zhi -yan 1 , WANG Zhen -yue1 , ZHOU Xiao -hui 1 ,
WANGWei2
Abstract:Objective:To study the component of rhein and resvera-
trol in the diffent position of Rumex.Gmelini fruit , and to provide
the theoretical basis for the reasonable exploitation of the fruit of
Rumex.Gmelini.Methods:Themethod of HPLC was used for an-
alyzing the content of rhein and resveratrol.Result:The contents
of rhein and resveratrol of the first rate seed were higher than the
second and the third rate seed.The content of resveratrol of the
first rate seed was higher than others , and the content of rhein of
the involucre was higher than others.
Author s address:1.Heilongjiang University of Chinese Medi-
cine.Harbin 150040 ,China;2.Heilongjiang Province Academy of
Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Manufacturing.Har-
bin 150321 ,China
Key words:Rumex.Gmelini fruit;rhein;resveratrol;HPLC(Original article on page 37)
Determination of kaempferol and total flavonoids in Herba
Thesii by HPLC and UV
XU Guo -bing1 , 2 , HUANG Wan -zhu 1 , WANG De -qun 2 ,
WANGHai-sun1 ,PENGDai -yin2
Abstract:Objective:To determine the content of kaempferol and
total flavonoids in Herba Thesii by reversed phase high perfor-
mance liquid chromatography and ultraviolet spectrophotometry.
Method:A Elite C18 column was used with a mixture of methanol
and 0.4%phosphoric acid solution (50∶50)as the mobile phase
with the detection wavelength at 365 nm.Result:The method
proved to be linear over the range of 0.0594 ～ 1.896μg for
kaempferol by HPLC and 0.00164 ～ 0.0164 mg·mL for total fla-
vonoids by UV.The average recovery of this method was 94.6%
and 91.8% respectively.Conclusion:The method appeared sim-
ple ,reliable , and accurate and can be used for the quality control
of the herb.
Author s address:1.Anhui Institute for Drug Control , Hefei
230061 China;2.Anhui College of Traditional Chinese Medicine ,
Hefei 230038 China
Key words:Herba Thesii , kaempferol , total flavonoids , determina-
tion (Original article on page 39)