全 文 ：3　讨论
IBS是一种以腹痛或腹部不适伴排便习惯改变和(或)
粪便性质改变的功能性肠病 , 该病缺乏可解释症状的形态
学改变和生化异常 [ 3] 。该病是一组症状的总称 , 多种因素
可诱发其症状发作 , 如饮食改变 、生活方式变化 、肠道感
染 、心理因素等 [ 4] 。我们以调肝理脾通腑为法的中医药治
疗为主 , 结合护理干预治疗便秘型肠易激综合征临床疗效
显著。本病属中医学 “便秘”、“气秘”、“腹痛”等范畴 , 但
从临床实践具体来看 , 便秘型 IBS与肠梗阻 、结肠外神经异
常等因素引起的便秘不同 , 其症状与精神因素密切相关 ,
故辨证上也与热盛伤津 、气血虚衰等证候所致的便秘迥然
而异 , 而是与情志失调 、肝气郁结有关 , 这与现代医学认为
IBS属典型的身心疾病相契合。所以 , 笔者采用中药治疗
结合护理干预(心理干预 、饮食干预)取得良好效果。
本法中所用燕麦 , 甘缓和中 , 润肠通便 , 而不致滋腻碍
胃 , 明·李时珍《本草纲目》记载可 “充饥滑肠 ”;现代研究
表明 , 纤维具有亲水性 , 能使食物残渣膨胀并形成润滑凝
胶 , 达到增加粪便容积 ,刺激肠蠕动的作用 [ 5] , 是治疗便秘
型 IBS的首选。温开水或盐开水能更好地刺激胃 -结肠反
射而达到促进缓解便秘的作用 [ 6] 。科学合理膳食习惯是
保证健康的基石。
综上所述 , IBS作为一种功能性肠病 , 虽不危及生命 ,
但却给患者带来生活和工作的不便和精神压力 , 且长期便
秘可能导致肠内致癌物长时间不能排除而增加患结肠癌
的危险。随着生活水平的改善 , 人们对生活质量要求也不
断提高 , 治疗的愿望更加迫切 , 本研究采用药物治疗与护
理干预相结合的方法能有效的减轻患者痛苦 , 提高生活质
量 , 且病人有良好的依从性 , 更易于达到预期的疗效。临
床护理结合模式为疾病治疗最佳模式和最终方向。
参考文献
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＊国家自然科学基金项目(30960503),贵州省科学技术基金(黔科合丁字 [ 2008] 2143号)。
＊通讯作者:董立莎 , 硕士生导师 ,教授 , Tel:18984079597, E-mail:dlsha1216@yahoo.cn
修回日期:2010-12-21
贵州产菝葜类 8个品种中白藜芦醇的
分析及镇痛作用的比较＊
韦　欣 1 ,任广聪 2 ,曲国玉 2 ,董凯旋 2 ,董立莎 2＊
(1.贵阳医学院 ,贵州贵阳　550004;2.贵阳中医学院 ,贵州贵阳　550004)
　　摘要:目的:采用 TLC法及 RP-HPLC法分析贵州产菝葜属(SmilaxL.)、肖菝葜属(HeterosmilaxK.)8个品种中的活性
成分白藜芦醇 , 并通过对 8个品种间镇痛试验的对比研究 ,对品种间进行药效与质量的评价 。方法:TLC法用硅胶 G板 ,
以氯仿 -丙酮 -乙酸 -水(4:4:0.5:0.2)为展开剂定性分析。用 RP-HPLC法分析白藜芦醇 ,色谱条件:依利特 Hyper-
silODS2色谱柱(5μm, 4.6×250mm), 流动相:乙腈 -0.05%磷酸(24:76);流速 0.8mL· min-1;检测波长 306nm,理论塔板
数以白藜芦醇计不得低于 4000。用冰醋酸所致小鼠扭体影响进行镇痛试验。结论:在 TLC鉴别中 , 8个品种均含有白藜
芦醇;在选定的色谱条件下 ,白藜芦醇在 6.2625μg～ 200.4μg范围内与峰面积呈良好线性关系。加样回收率(n=9)为
101.07%, RSD=1.13%。 8个品种中白藜芦醇含量为 0.00599% ～ 0.04392%, 其中以小叶菝葜含量最高。通过镇痛试验
研究 , 8个品种均有明显镇痛作用 ,且在相同有效剂量下 , 8个品种间没有明显差异。 本研究可为菝葜类新的药用资源开
发利用及质量控制提供了科学的参考依据。
关键词:白藜芦醇;菝葜类;薄层色谱法;反相高效液相色谱法;镇痛试验
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第 33卷　第 4期
2011年 7月　 　　　　　　　　　　　
贵阳中医学院学报
JGCTCM 　　　　　　　　　　　
No.4　Vol.33
Jul　2011
Doi:10.3969/j.issn.1002-1108.2011.04.09
　　中图分类号:R927.2　文献标识码:A　文章编号:1002-1108(2011)04-0019-04
　　百合科菝葜属(SmilaxL.)及肖菝葜属(Heterosmilax
K.)中多种药用植物的根及根茎在贵州省均为苗族民间用
药 , 蕴藏量较大 [ 1 ～ 2] 。本类植物中活性成分之一的白藜芦
醇具有明显抗炎 、镇痛作用 , 近年研究表明白藜芦醇还具
有多种生物活性 , 如抗癌 、抗血小板聚集 、保护肝脏
等 [ 3～ 4] 。但本类品种在应用上多样化 , 研究基础也较薄
弱 [ 5] , 尤其是贵州产的 8种常用药用植物的研究未见相关
报道。为了研究本类药用品种间的化学成分与药效学有
否相关性 , 并为开发新的药用资源及质量控制提供一定的
科学依据 , 故本文以该类药用植物中活性成分白藜芦醇为
指标 , 对其 8个品种中白藜芦醇的有无及含量进行了分析
研究 , 并通过镇痛试验为主要药效指标来进行相关的
评价。
1　仪器 、试药及药材
1.1　仪器　美国惠普 Agilent1100高效液相色谱仪:四元
泵 、在线脱气机 、柱温箱 、自动进样器 、G1315BDAD检测器
(美国 Agilent公司);依利特 HypersilODS2色谱柱(5μm,
4.6×250mm),大连依利特分析仪器有限公司;SK8310LHC
型恒温超声波提取器(500W, 50/60Hz,上海科导超声仪器
有限公司);紫外分析仪(WD-9403C型 , 北京市六一仪器
厂);薄层照相系统 (CAMAGREPROSTAR3);分析天平
(METTLERTOLEDO, AB104-N),梅特勒上海有限公司。
1.2　试药　白藜芦醇对照品(批号:111535 -200502)购
于中国药品生物制品鉴定所;乙腈 、甲醇为色谱纯 ,水为乐
百氏纯净水 , 其他试剂均为分析纯;硅胶 G板(青岛海洋化
工厂 , 规格:20×20cm)。
1.3　药材　菝葜类 8种药用植物全株由作者在贵州各地
采集 , 并经贵阳中医学院药学系生药教研室董立莎教授鉴
定为小叶菝葜(S.microphyla)、黑叶菝葜(S.nigrescens)、
短梗菝葜 (S.scobinincaulis)、菝葜 (S.china)、托柄菝葜
(S.discotis)、光叶菝葜 (土茯苓 S.glabra)、柔毛菝葜
(S.chingii)及短柱肖菝葜(H.yunnanensis)。 除去地上部
分后 , 根茎及根洗净 ,切片 , 阴干备用。
2　薄层鉴别
2.1　对照品制备　精密称取白藜芦醇 5mg于 10mL容量
瓶中 , 用甲醇定容 ,配制 0.50mg· mL-1的对照品溶液。
2.2　供试品溶液制备　分别精密称取 8个品种的根茎及
根(过 24 目筛)粗粉各 1g, 于 25mL容量瓶中 , 加甲醇
20mL, 超声(频率 59kHz,功率 500W)提取 20min, 放冷 , 过
滤 , 滤液浓缩至 1mL作为供试品溶液(生药浓度为 1g·
mL-1)。
2.3　薄层色谱条件对照品溶液点样量为 4μL, 样品溶液为
10μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上 , 以氯仿 -丙酮 -乙
酸 -水(4:4:0.5:0.2)为展开剂 , 上行展开 15cm, 取出 , 晾
干 , 在 365nm紫外灯下观察荧光斑点。结果 , 各样品在与
对照品相应的位置上出现相同亮蓝色斑点 , 表明贵州产 8
个品种中均含有白藜芦醇。结果见(图 1)。
3　含量测定
3.1　色谱条件与系统适应性试验　依利特 HypersilODS2
色谱柱(5μm, 4.6×250mm),流动相乙腈 -0.05%磷酸(24
∶76),流速 0.8mL· min-1 , 检测波长 306nm, 柱温 30℃, 进
样量 10μL,采集时间 20min,理论踏板数以白藜芦醇峰面
·20· 　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵阳中医学院学报　　　　　　　　　　　　　　　　第 33卷
积计不得低于 4000, 在此条件下 , 供试品(生药浓度 0.02g
· mL-1)中白藜芦醇峰能与其它组分达到完全基线分离 ,
分离度大于 1.5,且峰形较好。结果见(图 2)。
3.2　对照品溶液制备　精密称取白藜芦醇对照品 10mg
于 10mL容量瓶中 , 加乙腈溶解并定容 , 配制成 1.00mg·
mL-1的对照品溶液。
3.3　供试品溶液制备　分别精密称取菝葜类上述 “ 2.2”
项下药材粗粉各 0.5g,于 25mL容量瓶中 ,加甲醇 20mL, 超
声(频率 59kHz,功率 500W)提取 20min, 放冷 , 定容至刻度
线 , 摇匀滤过 , 滤液过 0.45μm微孔滤膜作为供试品溶液
(生药浓度 0.02g· mL-1)。
3.4　线性范围考察　分别精密移取白藜芦醇对照品储备
液(0.025mg· mL-1)分别于 10mL容量瓶中 , 各加乙腈定
容至刻度线 , 得到一系列浓度对照品溶液 , 分别吸取对照
品溶液各 10μL, 注入液相色谱仪 ,记录色谱 ,以对照品量 C
(μg)对峰面积 A进行线性回归 , 得线性回归方程:C=
1.2345×10-5A+0.00977(r=0.9999), 结果表明:白藜芦
醇进样量在 6.2625μg～ 200.4μg范围内与峰面积有良好
的线性关系。
3.5　精密度试验　精密吸取供试品溶液制备项下的土茯
苓样品溶液(生药浓度 0.02g· mL-1)10μL, 重复进样 6
次 , 白藜芦醇峰面积值的 RSD=0.9535%(n=6), 结果表
明 , 本法精密度良好。
3.6　重复性试验　精密称取土茯苓过 24目筛的粗粉各 6
份 , 按 “ 3.3”项下供试品溶液的制备法制备。分别吸取上
述各溶液 10μL进样 , 结果 , RSD=2.02%(n=6), 故重复
性良好。
3.7稳定性试验　取上述供试品溶液 10μL,分别在 0、1、2、
3、4、 5、6、7、8h进样 ,测得白藜芦醇含量的 RSD=1.75%(n
=9),表明供试品溶液在 8h内稳定。
3.8　加样回收率试验　精密称取稳定性试验样品(土茯
苓药材中白藜芦醇含量 0.004529%)9份于 25mL容量瓶
中 , 加甲醇 20mL, 其中 1 ～ 3份加入相当于样品含量的
80%对照品 , 4 ～ 6份加入相当于样品含量 100%的对照品 ,
7 ～ 9份加入相当于样品含量 120%的对照品。按 ” 3.3”项
下供试品溶液制备法制备。 记录色谱。结果 ,白藜芦醇平
均加样回收率(n=9)为 101.07%, RSD=1.12%。
3.9　样品含量测定　按 “ 3.3”项下方法 , 每个样品平行制
备 2份供试品溶液。在上述色谱条件下 , 分别精密吸取对
照品溶液(0.01002mg· mL-1)与供试品溶液各 10μL, 注入
液相色谱仪 , 测定峰面积 , 按外标一点法计算含量。 结果
见表 1。
　表 1贵州产菝葜类 8个品种中白藜芦醇的含量(n=4)
品种来源 产地白藜芦醇含量(%)
小叶菝葜(S.microphyla) 贵州平坝 0.0439
黑叶菝葜(S.nigrescens) 贵州贵定 0.0437
短梗菝葜(S.scobinincaulis) 贵州贵阳 0.0286
菝葜(S.china) 贵州安龙 0.0106
托柄菝葜(S.discotis) 贵州大方 0.0096
土茯苓(S.glabra) 贵阳清镇 0.0064
柔毛菝葜(S.chingi) 贵阳水田 0.0060
短柱肖菝葜(H.yunnanensis) 贵州兴义 0.00382
　　注:上述品种已测定水分 ,均以干燥品计算。
4　小鼠扭体法镇痛试验
4.1　试验药物
4.1.1　受试药物　8个品种根茎及根的 70%乙醇提取浸
膏粉。 实验前分别精密称取 8个品种的浸膏粉 2.5g, 加
0.2mL吐温 80作为助溶剂 ,酌加少量蒸馏水研磨溶解后 ,
加蒸馏水稀释配制成生药浓度为 0.25g· mL的混悬液。
4.1.2　阳性对照药物　阿司匹林肠溶片(批号:081009),
规格:每片 50mg。实验前将阿司匹林肠溶片捣碎 、酌加少
量蒸馏水研磨溶解后 , 加量适蒸馏水稀释制备成为一定浓
度的混悬液供用。
4.2　化学试剂　冰醋酸(批号:080116)。
4.3　实验动物　昆明种小鼠 ,一级 , 6 ～ 8周龄 , 体重 20±
2g,雌雄各半。由贵阳医学院实验动物中心提供 , 动物质量
合格证:SCXK(黔)2008-0001。
4.4　试验方法
4.4.1　分组及药物剂量　取昆明种小鼠 140只 , 雌雄各
半 , 分别称重后用苦味酸标记小鼠 , 再按随机分组的原则 ,
将其平均分为 10组 ,分别作为空白对照(生理盐水)组 、阿
司匹林组 、菝葜组 、土茯苓组 、柔毛菝葜组 、托柄菝葜组 、短
梗菝葜组 、小叶菝葜组 、黑叶菝葜组及肖菝葜组 , 每组 14
只。每天灌喂给药一次 , 连续 5d,给药体积 0.2mL· 10g。
4.4.2　小鼠扭体反应测定 [ 6] 　末次给药后 1h, 各组小鼠
再腹腔注射 0.7%冰醋酸溶液 0.2ml/只 , 观察 15min内(从
第一次扭体开始计时)出现扭体反应的次数(腹部内凹 , 伸
展后肢 , 臀部抬高)。
4.4.3　镇痛百分率计算公式　镇痛百分率(%)=[ (空白
对照组扭体反应次数 -空白给药组扭体反应次数)/空白
对照组扭体反应次数 ] ×100%
5　统计学处理
数据采用 SPSS10.0forWindows统计分析软件分析处
理 , 数据采用 ±S表示 ,两组之间的比较用 Dunnett检验。
·21·　　第 4期　　韦　欣 , 任广聪 ,曲国玉 , 等.贵州产菝葜类 8个品种中白藜芦醇的分析及镇痛作用的比较
6　结果　见(表 2)。
　表 2 对醋酸引起的扭体反应的影响
组别 剂量 g· kg(生药)
动物数
(n)
扭体次数
(次 /15min)
镇痛百分率
(%)
空白对照 14 21.357±10.18
阿司匹林 0.5 14 6.29±8.42＊ 70.57
柔毛菝葜 5 14 13.07±9.74＊＊＊ 38.80
黑叶菝葜 5 14 14.36±6.40＊＊＊ 38.80
菝葜 5 14 13.57±12.43＊＊＊ 36.45
托柄菝葜 5 14 13.57±12.13＊＊＊ 36.45
短梗菝葜 5 14 13.79±11.50＊＊＊ 35.45
土茯苓 5 14 14.14±10.90＊＊＊ 33.78
小叶菝葜 5 14 14.5±10.73＊＊＊ 32.78
短柱肖菝葜 5 14 13.07±7.67＊＊＊ 32.11
　　注:与对照组相比较 , ＊P<0.05;与菝葜组比较 , ＊＊P>0.05
7　小结与讨论
7.1　本研究进行了超声提取时间(10min、20min、30min及
40min)对白藜芦醇含量是否有影响进行了考察 , 结果 , 超
声提取 20min白藜芦醇的含量最高 , 故以超声提取 20min
作为最佳提取时间。
7.2　在色谱条件的选择中 , 分别考察了甲醇 -水 、甲醇 -
0.05%磷酸水溶液梯度洗脱 、乙腈 -水 、乙腈 -0.05%磷酸
水溶液等度洗脱及梯度洗脱 4个溶剂系统及不同的比例 ,
结果 , 以乙腈 -0.05%磷酸水溶液(24:76)为流动相 , 所得
色谱峰形较好 , 分离效果最佳。
7.3　在对不同品牌色谱柱的选择中 , 分别考察了依利特
HypersilODS2色谱柱 , 迪马 Diamonsil色谱柱 , AgelaTech-
nologiesPromosilC18色谱柱 , AgilentZORBA×NH
2
色谱柱。
结果 , 依利特 HypersilODS2色谱柱对白藜芦醇的分离度
较好。
7.4　通过 TLC法鉴别 , 贵州产菝葜类 8个品种的根茎及
根均含有白藜芦醇 , 在 RP-HPLC法中也检测到 8个品种
均含有白藜芦醇 , 且肖菝葜属中短柱肖菝葜中白藜芦醇的
含量最低为 0.003819%,而菝葜属中小叶菝葜的白藜芦醇
含量相对较高为 0.04392%。所以不同品种间白藜芦醇的
含量有较大差异。此为菝葜类新的药用资源开发及质量
控制提供了参考依据 。
7.5　镇痛试验的研究表明 ,菝葜类 8个品种均具有明
显的镇痛作用 , 且在相同的有效剂量下 , 8个品种间没有明
显差异。由此可见 , 8个品种中白藜芦醇的含量高低与镇
痛作用的强弱不呈正相关 , 说明本类药物的镇痛作用可能
是各品种中多种化学成分多靶点共同作用的结果。而品
种间其他活性成分含量及其他药效有否关联性? 我们有
待于更深一步的继续研究其成分及相关药理后并陆续
报道。
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