全 文 ：1　新疆医科大学药理学教研室(830054);　2　新疆自治区人民医院临床药学研究所(830001);3　新疆药物研究所(830002)。
实　验
研　究
驱虫斑鸠菊提取物体外对肿瘤细胞生长抑制　　　　　
作用的初步研究　　　　　　
李红健1　孙　力2　李琳琳1　徐建国3
　　摘　要　目的:观察驱虫斑鸠菊提取物在体外对肿瘤细胞生长抑制的影响。方法:用四甲基噻唑氮蓝比色法
测定驱虫斑鸠菊提取物对人恶性黑色素瘤细胞株 A375、小鼠黑色素瘤 B 16细胞 、人乳腺癌细胞 BCF-7、人胃癌细
胞BGC-823 、人肝癌细胞 HepG-2 生长抑制的影响。结果:驱虫斑鸠菊提取物在体外对 5 种肿瘤细胞生长有不同
程度的抑制作用。结论:驱虫斑鸠菊提取物在体外对多种肿瘤细胞有不同程度的生长抑制作用 , 尤以对恶性黑色
素瘤A375 细胞较为明显。
关键词　驱虫斑鸠菊提取物;肿瘤细胞株;生长抑制作用
　　菊科植物驱虫斑鸠菊(Vernonia anthelminticaWilld.)
为菊科斑鸠属一年生草本植物 ,主要分布于印度 、巴
基斯坦及我国的新疆等地 。收载于《中华人民共和国
卫生部药品标准—维吾尔药分册》 ,维吾尔语称“卡力
孜然” ,药用部位为该植物的成熟瘦果。具有清热 、消
炎 、活血化瘀 、杀虫祛斑的作用 ,维吾尔族民间常用于
治疗白癜风[ 1-3] 。有文献报道驱虫斑鸠菊在体外有
抗肿瘤活性 ,如:吴剑飞等报道驱虫斑鸠菊中所含成
份斑鸠菊大苦素 、斑鸠菊醇对 P388白血病细胞有抑
制作用[ 4-5] ;Lambertini E.等报道驱虫斑鸠菊提取物
对乳腺癌细胞的增殖有抑制作用等[ 6] 。本研究拟采
用人恶性黑色素瘤 A375细胞 、小鼠黑色素瘤 B16细
胞 、人乳腺癌细胞 BCF-7、人胃癌细胞 BGC-823 、人
肝癌细胞HepG-2等为体外工作模型 ,以丝裂霉素和
五氟尿嘧啶为阳性对照来观察驱虫斑鸠菊提取物对
这5种肿瘤细胞株的生长抑制作用。
1　材　料
1.1　斑鸠菊提取物
所用驱虫斑鸠菊药材均产自新疆阿克苏地区扎
木台乡 ,药材经北京医科大学药学院药用植物研究
室艾铁民教授鉴定。分别用氯仿 、丙酮提取驱虫斑
鸠菊的果实得浸膏Q1 和Q2 。
　　实验药物配置:药物先称取 100mg 溶于 0.5mL
二甲基亚砜 ,再配成 400μg/mL ,终浓度为 1 、10 、20 、
40 、80 、100μg/ml;阳性对照组:丝裂霉素配成 400μg/
mL ,终浓度为 2μg/mL。五氟尿嘧啶配成 1000μg/
mL ,终浓度为 5μg/mL。二甲基亚砜终浓度为
0.05%。MTT 以无血清 RPMI —1640临用前配制 ,过
滤除菌备用 。
1.2　肿瘤细胞株
人恶性黑色素瘤细胞株 A375;小鼠黑色素瘤
B16细胞;人乳腺癌细胞 BCF -7;人胃癌细胞 BGC
-823;人肝癌细胞 HepG-2等均购自上海细胞生物
研究所 。
1.3　试剂
二甲亚砜(DMSO ,Sigma公司产品);1640培养基
(Sigma公司产品)、胰蛋白酶(GIBCO公司产品);四
甲基噻唑氮蓝(MTT ,华美公司);新生小牛血清(杭
州四季青);氯仿 、丙酮(分析纯 ,西安化学试剂厂)。
1.4　设备和仪器
二氧化碳培养箱(Heraeus);酶标仪(DNA Ex-
pert);倒置显微镜(重庆)。
2　实验方法
2.1　细胞培养
即春夏养生气 ,养长气 ,以为秋冬之地;秋冬养收气 、
养藏气 ,以为春夏之基。如此解释 ,不仅与上下文意
不悖 ,而且更能体现出《内经》四时五脏阴阳的思想
体系。 (收稿日期:2006-07-17)
12 新疆中医药　2006年　第 24卷　第 6 期(总第 106 期)
　　人恶性黑色素瘤细胞株 A375 、小鼠黑色素瘤
B16细胞 、人乳腺癌细胞 BCF-7 、人胃癌细胞BGC-
823 、人肝癌细胞 HepG-2贴壁培养于 RPMI 1640培
养基(含 10%新生小牛血清),置 37℃、5%CO2 的饱
和湿度培养箱中培养 。
2.2　MTT比色法[ 7]
取培养 4 ～ 5天的对数生长期细胞用 0.25%胰
蛋白酶(含 EDTA 0.02%)消化单层培养细胞消化
后 ,配成5×104/mL的细胞悬液接种于96孔培养板 ,
每孔加细胞悬液 100μL;培养 24h后加入驱虫斑鸠菊
提取物100μL终浓度从1 ～ 100μg/mL/(每个浓度设 3
孔 ,做 3批),空白对照组加 100μL 培养液 ,阳性对照
为丝裂霉素和五氟尿嘧啶[ 8-9] ;24h 后各孔加入
5.0g/L的MTT50μL ,培养 4h后再加入 DMSO100μL终
止反应 ,37℃振荡 30min ,使结晶溶解 ,用酶标仪检测
570nm波长的光密度(OD)值 。
肿瘤细胞生长抑制率(%)的计算:肿瘤细胞生
长抑制率(%)=(对照组 OD值-用药组OD值)/对
照组OD值×100%。
2.3　统计学方法
样本检验统计量用 x±s表示 ,采用直线回归和
相关分析 。
3　结　果
表 1　驱虫斑鸠菊提取物 Q1 对 5种肿瘤细胞
生长增殖的影响(x%±s , n=3)
组别
浓度
(μg/mL)
A375 B16 MCF-7 BGC-823 HepG-2
空白对照 0 — — — — —
驱虫斑鸠菊 1.00 4.78±1.73 -21.48±5.58 31.03±2.53 20.71±7.73 6.04±3.51
10.00 12.18±3.46 -17.35±2.28 20.06±4.75 30.78±2.17 9.90±5.35
20.00 12.58±2.23 -6.05±3.90 30.46±2.06 30.19±3.37 30.33±3.27
40.00 14.36±3.01 4.63±4.34 37.12±2.98 34.50±6.90 72.41±0.66
80.00 28.38±2.89 49.40±8.93 59.49±1.10 25.62±6.03 81.25±1.16
100.00 29.44±4.32 75.28±40.98 67.41±2.76 37.37±8.86 85.07±0.26
阳性对照
MMC 2.00 59.59±2.84 82.88±1.60 63.53±0.90 57.28±5.77 51.06±1.70
5-Fu 5.00 73.75±2.19 77.39±3.84 59.70±2.90 37.34±3.70 53.71±4.03
　　驱虫斑鸠菊提取物对 5种肿瘤细胞增殖作用的
影响。不同浓度驱虫斑鸠菊提取物 Q1 和 Q2 对肿瘤
细胞的抑制结果见表 1 、表 2 、图 1 和图 2。结果显
示 ,驱虫斑鸠菊提取物Q1和Q2对 5种肿瘤细胞株有
不同程度的生长抑制作用 。采用直线回归分析 ,求
出驱虫斑鸠菊提取物 Q1 和Q2 对 5种肿瘤细胞株抑
制的 IC50值 ,驱虫斑鸠菊提取物 Q2 对人黑色素细胞
A375 的抑制作用 较明显 , IC50 值 为(19.25 ±
0.74μg)/mL。
图 1　驱虫斑鸠菊提取物 Q1对肿瘤细胞抑制的影响
表 2　驱虫斑鸠菊提取物 Q2 对 5种肿瘤细胞
生长增殖的影响(x%±s , n=3)
组别
浓度
(μg/mL)
A375 B16 MCF-7 BGC-823 HepG-2
空白对照 0 — — — — —
驱虫斑鸠菊 1.00 9.52±0.13 1.91±0.58 7.91±1.10 9.42±1.51 7.36±2.24
10.00 30.13±4.44 2.88±1.02 13.66±0.95 13.25±1.22 16.36±2.02
20.00 66.04±3.73 3.31±0.81 11.53±3.86 9.66±0.55 17.58±1.62
40.00 82.91±0.81 54.86±3.66 15.18±5.03 19.43±6.25 51.37±0.35
80.00 91.51±1.09 84.51±1.32 22.67±5.03 40.51±4.22 79.90±0.54
100.00 92.58±0.45 82.53±4.39 22.05±2.16 65.09±3.11 82.29±0.48
阳性对照
MMC 2.00 78.38±1.27 77.83±0.72 54.61±0.03 48.02±6.23 60.40±2.16
5-Fu 5.00 74.7±2.12 81.41±0.11 33.92±2.16 32.22±6.89 53.65±3.38
图 2　驱虫斑鸠菊提取物 Q2 对肿瘤细胞抑制的影响
4　讨　论
本研究采用 MTT 法对驱虫斑鸠菊提取物 Q1 和
Q2进行了体外抗肿瘤活性的试验 ,结果显示 ,驱虫斑
鸠菊提取物在体外对 5种肿瘤细胞生长有不同程度
的抑制作用 ,尤以对恶性黑色素瘤A375细胞较为明
显。
13新疆中医药　2006年　第 24卷　第 6 期(总第 106 期)
临　床
报　道 　　　　自拟“香芍枳佛汤”治疗慢性浅表性胃炎 200例
四川省盐亭县八角中心卫生院(四川　盐亭　621602)　黄爽明
　　摘　要　目的:观察自拟香芍枳佛汤治疗慢性浅表性胃炎的临床疗效。方法:对 200例慢性浅表性胃炎患者采
用自拟香芍枳佛汤随证加减治疗。结果:治愈率 60%,好转 37%,总有效率 97%。结论:自拟香芍枳佛汤治疗慢性
浅表性胃炎疗效显著 ,根据症状变化 , 随证加减是治疗慢性浅表性胃炎的有效方法。
关键词　慢性浅表性胃炎;香芍枳佛汤
　　慢性浅表性胃炎是临床上常见的一种消化道疾
病 ,属中医“胃脘痛” 、“腹胀”等范畴 ,笔者用自拟香
芍枳佛汤治疗取得满意疗效。总结如下 。
1　一般资料
200例中 ,男 108例 ,女 92例;年龄最小 13岁 ,
最大 72岁;病程最短 6个月 ,最长达 10年以上。患
者以胃脘部胀满不适 ,无规律性疼痛 ,嗳气或泛酸 、
嘈杂等为主要表现 ,临床上胃镜检查而确诊。
2　治疗方法
香芍枳佛汤组成:香附 6 ～ 10g , 白芍 15g , 枳
壳 、佛手各 9g , 黄连 5 ～ 10g , 吴萸 3 ～ 5g , 延胡索
12g , 乌贼骨 、 牡蛎各 20g , 甘草 5g 。随证加减;
疼痛伴食少 , 舌淡苔白 , 加党参 、 白术 、炮姜:疼
痛喜温喜按 , 加桂枝 、 炮姜;胃脘灼痛 , 舌苔黄
腻 , 加瓜壳 、冬瓜仁 、 蒲公英;疼痛如针刺 , 局部
拒按者 , 加蒲黄 、 五灵脂 、 丹参 、砂仁;胃镜见胆
汁返流者 , 加柴胡 、 茵陈 、 郁金 、大黄 。水煎服 ,
每日 1剂 , 7天为 1疗程 。服药期间注意休息 , 饮
食清淡有规律 , 禁烟酒及辛辣之品。
3　治疗结果
3.1　疗效标准
治愈:临床症状消失 ,食欲正常 ,胃酸分泌正常 ,
胃镜所见胃粘膜组织学改变基本恢复正常;好转:症
状基本消失或减轻 ,胃酸分泌接近正常 ,胃镜见胃粘
膜组织学改变减轻或病变范围缩小;无效:为治疗 2
～ 3个疗程临床症状无明显改变 。
　　由于MTT比色法简单 、快速 、灵敏 ,明显优于过
去常用的染料排斥法 ,使用 96孔培养板使得操作半
自动化 ,可以在短时间内进行大量标本的测定 ,故对
大量筛选抗肿瘤药物具有重要的意义 ,现已被广泛
用于体外肿瘤药敏的测定。美国的 SFDA以及国内
外的一些有权威的新药研发单位均采用 MTT 比色
法作为抗肿瘤药物筛选的经典方法。本试验采用
MTT 比色法对驱虫斑鸠菊提取物Q1和Q2 进行了体
外抗肿瘤活性的初筛 。
驱虫斑鸠菊提取物中抗癌作用的物质基础尚不
明确 ,有报道已从分离得到的数个单体化合物有抗
肿瘤活性 ,主要为萜类 、内酯类化合物[ 4] ;系统的研
究尚待进一步进行。
尽管驱虫斑鸠菊提取物在体外初筛实验中具有
一定的抗瘤活性 ,但是否具有抗瘤作用尚需进一步
的深入研究。
参考文献
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9　陈军 ,战洪生.结晶紫染色法在抗肿瘤药物筛选中的应用[ J] .癌
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(收稿日期:2006-08-30)
14 新疆中医药　2006年　第 24卷　第 6 期(总第 106 期)