全 文 ：·实验研究·
收稿日期:2007-12-07
基金项目:黑龙江省科技攻关项目(D200675)
作者简介:苏云明(1949-),男 ,教授 ,医学学士。研究方向:中药现代药理学研究。
蝙蝠葛酚性碱对 K562、BXPC-3增殖的影响
苏云明 ,孟繁兴 ,王　欣 ,刘 莉 ,刘春华
(黑龙江中医药大学 ,黑龙江　哈尔滨　150040)
摘　要:目的 观察蝙蝠葛酚性碱(PAMD)在体外的广谱抗肿瘤作用 。方法 采用 MTT比色法测
定不同质量浓度的蝙蝠葛酚性碱对体外处理白血病细胞株(K562)、人胰腺癌细胞株(BXPC-3)24h的
存活率 ,同时测定药物处理不同细胞株的细胞增殖抑制率和 IC50及 IC90。实验设立阴性空白对照组和
氟尿嘧啶阳性对照组 。结果 不同质量浓度蝙蝠葛酚性碱对 K562、BXPC-3细胞株的细胞增殖具有抑
制作用 ,抑制作用均与质量浓度呈梯度关系。结论 蝙蝠葛酚性碱对体外培养人肿瘤细胞株的增殖有
明显的抑制和杀伤作用 ,揭示其具有细胞毒效应 ,蝙蝠葛酚性碱产生抗肿瘤生物学效应的机理有待进一
步研究 。
关键词:蝙蝠葛酚性碱;人肿瘤细胞株;MTT比色法;细胞毒
中图分类号:R284.5　文献标识码:B　文章编号:1003-8450(2008)03-0001-04
　　蝙蝠葛酚性碱(phenolicalkaloidsofmenisper-
mumdauricum, PAMD)是从中药蝙蝠葛(Menisper-
mumdauricum, DC)根茎中提取的多种脂溶性生物
碱的混合物 ,实验已证明其主要成分为蝙蝠葛碱
(dauricine, Dau)和蝙蝠葛苏林碱(daurisoline, Ds),
Dau和 Ds均为双苄基异喹啉类生物碱 ,脂溶性高 ,
具有抗钙活性。 PAMD具有较好的抗心律失常以
及保护脑缺血 —再灌注损伤作用 , 且副作用小 ,
已作为治疗心脑血管疾病的新药供临床使用[ 1-3] 。
但关于 PAMD抗肿瘤的作用未见报道 ,因此我们
采用体外培养的方法研究 PAMD的抗肿瘤活性 ,
并对药物的敏感瘤株进行筛选 。
1　材料与方法
1.1　细胞和细胞培养
人白血病细胞株 (K562)、人胰腺癌细胞株
(BXPC-3)由中科院上海生物细胞所引进。体外细
胞培养于含 10%小牛血清以及 100U/mL青霉素和
100μg/mL链霉素的 1640培养液中 , 37 ℃, 5%CO2
培养箱内培养 ,细胞长至对数生长期用于实验。
1.2　实验药品
蝙蝠葛酚性碱由药学院王栋教授提供。实验
时用生理盐水配制成 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10, 20,
40 μg/mL质量浓度的混悬液 ,用 0.22 μm微孔过
滤除菌 ,置 -20 ℃冰箱保存备用 。氟尿嘧啶注射
液(2.5 g/mL),天津金耀氨基酸有限公司 , 批号:
H12020959。
1.3　试剂和仪器
RPMI1640购自 Gibco公司 , 以 10.4 g溶于
1 000 mL三蒸水中 ,用 NaHCO3调 pH值到 7.0,过
滤除菌 , 4 ℃冰箱保存 。胎牛血清购自杭州四季青
生物工程公司 ,经 56 ℃、30 min灭活处理后 ,置
-20℃冰箱保存备用 。四甲基偶氮唑蓝(MTT)和
二甲亚砜(DMSO)均购自 sigma公司。 DG5031型
酶联免疫仪为华东电子管厂产品 。
1.4　MTT法筛选蝙蝠葛酚性碱的抗癌瘤谱 [ 4]
取对数生长期的 K562、BXPC-3细胞株 ,配制
成 1×107 /mL单细胞悬液 ,接种于 96孔培养板 ,每
孔 0.1mL,实验组分别加入蝙蝠葛酚性碱至终质
量浓度为 40, 20, 10, 5, 2.5, 1.25, 0.625 mg/L,每个
药物质量浓度设 6个复孔 ,空白对照组不加药 ,置于
37℃饱和湿度 5 %CO2条件下常规培养24 h,每孔
加入 20μLMTT(5 mg/mL),再置培养箱内继续培
养 4h。吸取上清液 ,每孔加入 100μLDMSO振荡
5min,用酶联仪在 570 nm波长下测定各孔光吸收
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值(OD值),记录结果。细胞抑制率计算公式为:
细胞抑制率 =(空白对照组 OD均值 -药物组
OD均值)/空白对照组 OD均值 ×100 %。
按下列公式计算肿瘤细胞的存活率 ,判断蝙蝠
葛酚性碱对肿瘤细胞的敏感性(肿瘤细胞的存活
率 <30 %为高度敏感 , 30 % ～ 50 %为中度敏感 ,
>50%为不敏感),同时计算 IC50和 IC90 ,实验在相
同条件下重复 3次。
细胞存活率 =实验组光吸收值 /空白对照组光
吸收值 ×100%
1.5　统计学处理
实验数据以( x±s)表示 ,采用 t检验比较各组
的 OD值 ,采用线性回归计算 IC50和 IC90。
2　实验结果
2.1　蝙蝠葛酚性碱对肿瘤细胞的增殖抑制作用
不同质量浓度的蝙蝠葛酚性碱处理 BXPC-3、
K562细胞株 24h后 ,对 BXPC-3、K562细胞株的抑
制率随着质量浓度的增加而增大;实验组各剂量组
与阳性对照组比较 , 质量浓度为 40, 20, 10, 5,
2.5μg/mL时 ,对 BXPC-3细胞株的抑制率显著高
于 5-FU(P<0.01),质量浓度为 40, 20, 10 μg/mL
时 ,对 K562细胞株的抑制率显著高于 5-FU(P<
0.01)。表明蝙蝠葛酚性碱对肿瘤细胞的增殖具
有良好的抑制作用 。见表 1。
表 1 PAMD对人肿瘤细胞株的影响
组　别 质量浓度(μg/mL)
人肿瘤细胞 OD均值( x±s) 人肿瘤细胞株抑制率(%)
BXPC-3 K562 BXPC-3 K562
空白对照组 — 0.221±0.028 0.440±0.044 — —
实验组　　 40 0.017±0.007＊＊■ 0.078±0.012＊＊■ 92.31■ 82.27■
20 0.043±0.023＊＊■ 0.135±0.020＊■ 80.54■ 69.32■
10 0.055±0.018＊■ 0.205±0.014＊■ 75.11■ 53.41■
5 0.080±0.019＊■ 0.255±0.015＊ 63.80■ 42.05
　 2.5 0.104±0.026＊■ 0.309±0.027＊ 52.94■ 29.77
　　1.25 0.137±0.023＊ 0.368±0.029＊ 38.01 16.36
　　 0.625 0.161±0.037＊ 0.403±0.014＊ 27.15 8.41
阳性对照组(5-FU) 100 0.135±0.020＊ 0.230±0.020＊ 38.91 47.73
　　注:与空白对照组比较 ＊P<0.01, ＊＊P<0.001;与阳性对照组比较■P<0.01
2.2　蝙蝠葛酚性碱对敏感肿瘤细胞的筛选
不同质量浓度的蝙蝠葛酚性碱作用于 BXPC-
3、K562细胞株 24 h时均有明显的细胞毒效应 ,其
中以 BXPC-3最为敏感 ,当蝙蝠葛酚性碱质量浓度
为 40 μg/mL时 ,细胞的存活率仅为 8.96 %,而同
一剂量处理 K562细胞株 24 h的细胞存活率为
17.91 %。各细胞存活率与蝙蝠葛酚性碱的质量浓
度呈负相关 。不同质量浓度的蝙蝠葛酚性碱对各
细胞株存活率的影响见图 1。实验结果表明 BX-
PC-3、K562对蝙蝠葛酚性碱的作用都有较强的敏
感性。
图 1　PAMD对 BXPC-3、K562存活率的影响
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2.3　蝙蝠葛酚性碱对肿瘤细胞毒的 IC50和 IC90
蝙蝠葛酚性碱对上述两种人癌细胞株均有明
显的体外细胞毒作用 ,并且其细胞效应与蝙蝠葛酚
性碱的质量浓度呈正相关 ,两种人肿瘤细胞株的
IC50和 IC90值见表 2。
表 2 PAMD对 BXPC-3、K562的细胞毒效应
人肿瘤细胞株 IC50(μg/mL) IC90(μg/mL)
BXPC-3 2.30 30.78
K562 7.79 67.28
3　讨论
肿瘤的发生 、发展严重威胁人们的生命 ,已经
是人类健康的大敌 。肿瘤学也成为世界医学研究
领域的重点 。在肿瘤的治疗方面 ,除了传统的手
术 、放疗与化疗 ,又出现了基因干扰和靶向治疗 ,使
肿瘤的防治工作有了突破性进展。同时科学工作
者应用中药进行综合调节治疗也成为近年研究的
热点领域 ,使得中药复方或单味中药提取的有效成
分在抑制肿瘤细胞增殖 、转移 、侵袭和诱导肿瘤细
胞分化 ,促进凋亡以及逆转肿瘤细胞多药耐药 、减
毒增效等方面进入了一个新的时代。
近年来研究发现 ,从中药中提取的一些生物碱
类物质在肿瘤防治方面具有重要作用 , 如从紫唐
松草和唐松草等的根中分离得到的唐松草碱和厚
果唐松次碱对 W256有显著的抑制作用 ,国外已进
入临床研究 [ 5] 。从贴梗木瓜和番木瓜分离的番木
瓜碱 , 具有显著的抗淋巴细胞性白血病 L1210的活
性作用 ,对 L388 、鼻咽癌肿瘤细胞也有中等程度的
抑制作用。从苦参以及山豆根的根中提取的苦参
碱 ,对 S180 、U14及艾氏腹水癌均有抑制作用 ,氧化苦
参碱对 S180有抑制作用 , 并具有明显升高白细胞的
作用 , 临床上用于结肠癌 、直肠癌及肝癌的治
疗 [ 6] 。从山豆根中提取的异喹啉类生物碱(蝙蝠
葛碱)和从胡椒果实中分离的主要生物碱(胡椒
碱)对 CNE-1、CNE-2Z鼻咽癌细胞株的生长增殖
均有抑制作用 ,并呈时间依赖性抑制 [ 7] 。
已有研究表明蝙蝠葛酚性碱对心肌 Na+、K+、
Ca2+的转动过程均有非特异性抑制作用 ,抑制了
Ca2+-ATP酶的活性 , 使肌浆网钙的摄取下降 , 同
时 Dau和 Ds还具有抑制钠离子内流 、钙离子内流
和钾离子外流的作用 ,并具有逆转肿瘤多药耐药性
的作用 [ 8 -10] 。本实验对蝙蝠葛酚性碱抗肿瘤效应
进行筛选 , 研究结果发现 ,蝙蝠葛酚性碱对 K562
和 BXPC-3细胞株增殖均有抑制作用 ,其中对 BX-
PC-3作用最为敏感 , 24h的抑制率高达 91.04 %,
其 IC50和 IC90分别为 2.30 μg/mL和 30.78μg/mL。
目前 ,国内未见对应用蝙蝠葛酚性碱进行抗肿
瘤的实验研究 ,我们对蝙蝠葛酚性碱抗肿瘤的初步
筛选时发现 ,它具有明显抑制肿瘤细胞增殖的作
用 ,显示出良好的抗肿瘤效应 ,实验结果揭示其对
肿瘤细胞具有细胞毒作用 ,但蝙蝠葛酚性碱产生抗
肿瘤生物学效应的机理还有待进一步研究 。
参考文献:
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甘 肃中 医学院 学报
J.GANSUCOLLEGEOFTCM　　　　　　　
Vol.25　No.3
Jun.2008
EfectofPAMDontheproliferationofK562、BXPC-3
SuYunming, MengFanxing, WangXin, LiuLi, LiuChunhua
(HeilongjiangUniversityofTCM, 150040, Ha erbin, China)
Abstract:Objective Tostudybroad-spectrumanti-tumorefectofphenolicalkaloidsofMenispermum
dauricum(PAMD)invitro.Methods　MTTcolorimetricassaywasemployedtodetectthesurvivalratesof
K562, BXPC-3 cellinestreatedwithPAMDofdiferentconcentrationfor24hours.Detectedproliferationinhi-
bitionratio, IC50 andIC90 ofdiferentcellinestreatedwithPAMDofdiferentconcentrationfor24 hours, es-
tablishedthenegativeblankcontrolgroupandpositivecontrolgroupof5-FUintheexperiment.Results　
PAMDofdiferentconcentrationcouldinhibittheproliferationofK562, BXPC-3 cellinesdirectlyinadose-
dependent.Conclusion PAMDcouldinhibittheproliferationofhumancancercelsinvitro, thisdirectle-
thalandbreakdownefecttocancercelsshowsitscytotoxicaction.Andtheexactoncobiologyefectsof
PAMDdeservefurtherinvestigation.
Keywords:PAMD;humancancercelline;MTTcolorimetricassay;cytotoxicity
收稿日期:2008-03-12
作者简介:韩涛(1966-),男 ,副教授 ,医学学士 ,主要从事中药学教学与科研工作。
破茎松萝不同用法的止咳祛痰抗炎作用比较研究
韩 涛 ,王佳蕾 ,李俊乐 ,刘东林
(甘肃中医学院 ,甘肃 兰州 730000)
摘　要:目的　研究破茎松萝水煎液 、水浸液对实验性小鼠止咳 、祛痰 、抗炎的药理作用 ,并分析比
较作用强度 。方法　制备破茎松萝水煎液 、水浸液 。止咳实验采用浓氨水引咳法 ,祛痰实验采用气管酚
红排泌法 ,抗炎实验采用二甲苯致耳肿胀和琼脂致肉芽肿法 。实验小鼠分生理盐水组 ,破茎松萝水煎液
高 、中 、低剂量组 ,破茎松萝水浸液高 、中 、低剂量组 ,阳性药物对照组。结果　3个不同剂量的破茎松萝
水煎液 、水浸液均能显著减少氨水所致小鼠咳嗽次数(P<0.01),延长咳嗽潜伏期(P<0.05或 P<
0.01);高 、中剂量破茎松萝水煎液 、水浸液能显著增加气管内酚红排泌量(P<0.05或 P<0.01),抑制
二甲苯致耳肿胀和琼脂致肉芽肿(P<0.05或 P<0.01)。结论　破茎松萝有较强的止咳 、祛痰 、抗炎作
用 ,与水煎 、水浸不同用法无明显关系 ,祛痰 、抗炎作用与剂量有关 。
关键词:破茎松萝;水煎液;水浸液;止咳;祛痰;抗炎
中图分类号:R284.5　文献标识码:B　文章编号:1003-8450(2008)03-0004-04
　　破茎松萝作为常用的民间中药 ,可用于治疗急
慢性呼吸系统病症 ,疗效良好 ,用法主要有水煎 、水
浸的不同。为了探讨破茎松萝的作用特点 ,为临床
提供药效学实验依据 ,指导临床科学合理用药 ,本
文对破茎松萝水煎液 、水浸液的止咳 、祛痰 、抗炎作
用进行实验研究 ,并分析比较作用强度。
1 实验材料
1.1 药物及试剂
破茎松萝 ,购于甘肃省张掖市药业集团有限公司。
破茎松萝水煎液的制备:准确称取破茎松萝
11.7g,加蒸馏水 100 mL浸泡 15 min,加热煮沸
30 min,纱布过滤 ,药液浓缩至 50 mL,装入试剂瓶
中 ,此药液为破茎松萝水煎液高剂量组(内含生药
234.0mg/mL)用药。中剂量组 、低剂量组用药时 ,
将上述药液分别加入蒸馏水稀释后使用。
破茎松萝水浸液的制备:准确称取破茎松萝
11.7g,加热水(70 ℃)55 mL浸泡 1 h,纱布过滤 ,
得药液 50 mL,装入试剂瓶中 ,此药液为破茎松萝
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