全 文 ：本实验建立的 H PLC-CAD检测法为脂质体制剂的磷脂
成分分析检测提供了一套完整的方法 , 成为脂质体制剂中磷
脂的含量和降解产物检测的一种有效手段。本实验以甲醇
和水作流动相 , 采用梯度洗脱 , 具有溶剂系统简单 、低毒 ,且
分离度高的特点 ,使用 C8色谱柱具有适中的极性 , 满足高效
分离 、快速检测的要求。高纯氮气有利于保持压力稳定及基
线的平稳。由于 DSPG 等磷脂对流动相的水分含量敏感 ,因
此在实验中对流动相中的水分含量进行了严格的控制 ,保证
磷脂的有效分离。色谱图中药物峰稍有拖尾 ,主要是由于甲
醇的洗脱能力较弱导致的 , 不同来源的磷脂组成成分不同 ,
分子中脂肪酸链长度 、不饱和度亦有差别 , 磷脂分子本身的
这种异质性也会导致磷脂分离过程中出现色谱峰的延展 、重
叠 、拖尾[ 6] 。
本实验进一步考察了各放置条件对制剂中磷脂的稳定
性的影响。两性霉素 B 脂质体冻干粉在高温 、高湿 、光照的
条件下 ,各磷脂含量明显降低 ,大豆磷脂氢化后的 H SPC 稳
定性虽有所改善[ 7] , 但在强光及高温条件下仍有所降解 ,产
生溶血磷脂 MSPC。常温 25 ℃, 湿度 75%条件下长期放置
脂质体中磷脂含量也明显降低 ,然而 4 ℃放样对磷脂稳定性
略有影响 ,各磷脂含量虽有所降低 , 但是无溶血磷脂成分检
测出。经查阅大量文献 ,对于脂质体中溶血磷脂限度未见报
道。因此考虑进一步改善样品的包装 , 以期使冻干的两性霉
素 B 脂质体适于低温 4 ℃保存。为制剂的储存条件提供了
一定的依据。
参考文献:
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[ 收稿日期] 2007-11-12
[作者简介] 干国平 ,男 ,博士 ,副教授 ,电话:027-61287995 , E-m ail:ganguop@sina.com [ 通讯作者] 刘焱文 ,男 ,博士 ,电话:027-62623577 , E-
m ail:y wliu@public.w h.hb.cn
不同产地菝葜中总黄酮的含量考察
干国平 ,于伟 ,孙进 ,宋爱华 ,陈振江 ,刘焱文 (湖北
中医学院“中药资源与中药复方”省部共建教育部重点实验
室 ,湖北 武汉 430061)
[ 摘要] 目的:比较不同产地菝葜中总黄酮的含量 , 为评价
菝葜的资源品质提供依据。方法:以芦丁为对照品 , 采用比
色法测定我国 13 个省区总黄酮的含量。结果:不同产地菝
葜中总黄酮的含量差异明显。结论:菝葜的质量与生长环境
具有相关性。
[ 关键词] 菝葜;总黄酮;比色法
[中图分类号] R927.2 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1001-
5213(2008)23-2055-02
菝葜为百合科植物菝葜 Smi la x China L.的干燥根茎 ,
具有消肿止痛 ,活血化淤 , 祛风利湿等作用[ 1] ,临床常用于治
疗妇科炎症 ,疗效显著。菝葜中主要含有皂苷 、黄酮 、鞣质等
化学成分[ 2] 。近年来 , 本课题组对菝葜进行了较深入研究 ,
发现其中黄酮类化合物具有抗肿瘤 、抗炎等生物活性[ 3] ,是
一类重要的活性物质。为了评价菝葜的资源品质 , 本课题组
对我国 13 个省区菝葜植物资源进行了实地调查 , 采集了标
本和实验样品 ,并采用比色法对所采集的 26 个菝葜样品中
总黄酮含量进行测定 , 为评价菝葜的资源品质提供科学依
据。
1 材料
UV-2401 型紫外分光光度仪(日本岛津);芦丁对照品
(中国药品生物制品检定所 , 批号 100080-200306);药材由
湖北中医学院中药资源与中药化学省级重点实验室采集 ,湖
北中医学院鉴定教研室鉴定;试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液的制备 取菝葜药材粉末 1 g , 精密称定 ,
加 60%乙醇 50 mL , 称重 , 超声提取 30 min , 用 60%乙醇补
充损失的质量 ,摇匀 , 滤过。精密吸取续滤液 25 mL , 蒸干 ,
残渣加水 10 m L 使溶解 , 移入分液漏斗中 , 用醋酸乙酯萃取
5 次 , 每次 10 mL ,合并醋酸乙酯层 , 蒸干 ,残渣用甲醇溶解并
定容至 25 mL ,作为供试品溶液。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取于 60 ℃减压干燥至恒
重的芦丁对照品9.4 mg ,用甲醇制成每 1 mL 含0.188 mg 的
溶液 ,作为对照品溶液。
2.3 测定波长的选择 精密吸取对照品溶液和供试品溶液
各 2 m L ,分别置于 25 mL 量瓶中 , 加甲醇至 6 mL , 加 5%亚
硝酸钠溶液 1 m L ,摇匀 ,放置 6 min 后加 10%硝酸铝溶液 1
mL , 摇匀 ,放置 6 min 后再加入氢氧化钠试液 10 m L ,加甲醇
至刻度 ,摇匀。放置 30 min后 ,在 360 ～ 700 nm 波长范围内
进行扫描。结果 ,对照品溶液与供试品溶液在 500 nm 处均
有最大吸收 ,选择测定波长为 500 nm。
2.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液 1 , 2 , 3 , 4 , 5
mL , 分别置于 25 mL 量瓶中 ,按“ 2.3”项下显色方法显色 ,随
行试剂作空白 ,于 500 nm 处测定吸光度。以对照品浓度(C)
为横坐标 ,吸光度(A)为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 得线性回归
方程为:
Y =3.784X -0.013 , r=0.999 9 , n=5 , 线性范围为 7.52
～ 37.6 mg·L-1 。
2.5 精密度测定 取同一供试品溶液 6 份 , 分别精密吸取 2
mL , 同上法处理 、测定 , 结果 6 份样品的吸收度 RSD 为
0.62%, n=6。
·2055·中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 23期 Chin H osp Pharm J , 2008 Dec , Vol 28 , No.23
2.6 供试品溶液稳定性试验 取供试品溶液 , 按“2.3”项的
显色方法显色后 ,进行时间扫描。结果供试品溶液吸光度值
在显色后 30 ～ 90 min 内稳定。表明供试品溶液应在显色 30
min 后开始测定 ,并于 90 min 内完成测定。
2.7 重复性试验 取同一批号的样品 6 份 , 照供试品溶液
的制备方法处理 、测定。结果样品中总黄酮含量的平均值为
1.98%, RSD为1.44%, n=6。
2.8 加样回收率试验 取已知总黄酮含量的菝葜药材(含
总黄酮1.98%)粉末0.5 g , 精密称定 , 分别精密加入一定量
的芦丁对照品 ,加 60%乙醇 50 mL ,按供试品溶液制备的方
法处理 , 测定。 结果平均加样回收率为 98.45%, RSD 为
1.14%, n=6 ,见表 1。
表 1 加样回收率试验结果
Tab 1 The re sult o f recovery test
样品量
/ g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/ %
平均值
/%
RSD
/ %
0.501 6 9.93 8.14 17.98 98.87
0.513 2 10.16 7.96 17.95 97.85
0.517 4 10.24 10.34 20.59 100.05
0.499 3 9.89 10.15 19.95 99.15 98.45 1.14
0.486 9 9.64 12.22 21.45 96.64
0.511 5 10.13 11.87 21.73 97.74
0.501 6 9.93 8.14 17.98 98.87
[作者简介] 王光忠 ,男 ,电话:027-88930834 , E-mai l:w gzhong4067@sina.com
2.9 含量测定 取不同产地菝葜及其近缘种 26 批药材 ,照
供试品溶液制备的方法制备 , 测定 , 计算样品中总黄酮的含
量 ,结果见表 2。
表 2 26个样品的来源及含量测定结果(n=3)
Tab 2 Orig in and determination o f samples(n=3)
样品 产地 含量/mg·g -1
菝葜 重庆涪陵 2.23
菝葜 四川宜宾 1.73
菝葜 湖南平江 1.69
菝葜 湖南韶山 1.43
菝葜 湖南靖州 2.14
菝葜 江西月亮山 1.43
菝葜 江西杨家垄 1.54
菝葜 广西宾阳 2.18
菝葜 广西武鸣山 0.98
菝葜 浙江温州 1.71
菝葜 温州永嘉县 1.59
菝葜 安徽天柱山 1.66
菝葜 安徽坟天山 2.15
菝葜 安徽潜山 2.06
菝葜 广东韶关 1.98
菝葜 湖北麻城 2.21
菝葜 湖北大冶 2.14
菝葜 湖北通城 2.10
小叶菝葜 湖北秭归 2.19
小果菝葜 江西吉安 1.43
长托菝葜 江西吉安 1.89
束丝菝葜 贵州毕节 1.95
尖叶菝葜 湖北宜都 1.89
肖菝葜 广东徐闻 2.34
短柱肖菝葜 广东遂溪 1.29
华肖菝葜 广西武鸣 2.33
3 讨论
本试验曾对供试品溶液的净化方法进行了研究 , 利用聚
酰胺小柱吸附黄酮类化合物 ,再依次用水和乙醇洗脱。结果
表明:由于聚酰胺对黄酮类成分的吸附作用很强 , 乙醇洗脱
不完全 ,导致总黄酮的含量偏低。因此 ,本试验选用醋酸乙
酯萃取的方法制备供试品溶液。试验还对醋酸乙酯的萃取
次数进行了考察 ,结果表明:用醋酸乙酯萃取 5 次较为适宜。
比色法是测定总黄酮含量的经典方法 ,常用 5%亚硝酸
钠-10%硝酸铝-氢氧化钠试液或三氯化铝溶液显色。本实验
对这两种显色方法进行比较 ,发现三氯化铝显色后供试品溶
液在可见光区域没有最大吸收;而以 5%亚硝酸钠-10%硝酸
铝-氢氧化钠试液为显色剂 , 显色后溶液在 30 ～ 90 min 内稳
定 ,故本试验选择 5%亚硝酸钠-10%硝酸铝-氢氧化钠试液
为显色剂 ,要求在显色 30 min 后开始测定 ,并于 90 min 内完
成测定。
菝葜在我国分布较广 , 多生长在海拔1 000 m 以下的林
地。经将测定结果与样品的分布特征及生态环境作相关性
分析 ,结果同一品种不同产地的菝葜中总黄酮的含量存在显
著差异 ,菝葜中总黄酮的含量与采集地的海拔高度有一定关
系 ,产于海拔较高的菝葜总黄酮的含量较高 , 如采集于海拔
在 500～ 1 000 m 的湖北麻城 、广西宾阳 、湖南靖州 、重庆涪
陵 ,样品含量较高;不同品种菝葜中总黄酮的含量亦有差别 ,
其中产于广西武鸣的华肖菝葜 、广东徐闻的肖菝葜及湖北秭
归的小叶菝葜含量较高。
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[收稿日期] 2007-11-04
小儿喜食糖浆的质量控制研究
王光忠 ,刘艳菊 ,刘焱文 (中药资源与中药复方省部共
建教育部重点实验室 ,湖北中医学院 , 湖北 武汉 430065)
[ 摘要] 目的:制定小儿喜食糖浆质量控制方法。方法:采
用薄层色谱(TLC)法对枳壳 、山楂分别进行了定性鉴别;采
用高效液相色谱(H PLC)法测定小儿喜食糖浆中柚皮苷的含
量。结果:本品定性鉴别薄层色谱特征明显 , 专属性强;柚皮
苷在 0.208 ～ 1.664 μg 范围内呈良好的线性关系(r =
0.999 8),平均回收率为98.02%, RSD为 1.5%。结论:该方
法可以准确地进行定性 、定量检测 , 有效地控制制剂的质量。
[ 关键词] 小儿喜食糖浆;薄层色谱法;柚皮苷;高效液相
色谱法
[中图分类号] R927.2 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1001-
5213(2008)23-2056-03
小儿喜食糖浆收载于部颁标准中药成方制剂 , 由六神
曲 、稻芽 、麦芽 、白术 、枳壳 、山楂组成 , 具有健脾 ,消食 , 化积
之功效[ 1] 。用于治疗小儿单纯性消化不良 , 食欲不振及消化
不良引起的腹泻。原制剂质量标准中无含量测定及薄层色
·2056· 中国医院药学杂志 2008年第 28卷第 23期 C hin H osp Pharm J , 2008 Dec , Vol 28 , No.23