全 文 ：新疆中医药 2008年 第 26卷 第 5期（总第 117期）
制成每mL合10μg的溶液即得。
（2）供试品溶液的制备：取本品装量差异项的内
容物，研细，称取0.5g，精密称定，置25mL容量瓶中，
加CH3OH适量，超声处理30min放冷，加CH3OH至刻
度，摇匀。用微孔滤膜（0.45mm）滤过，取续滤液即得。
2.3 系统适应性试验及专属性考察
分别取对照品溶液，供试品溶液各10μL，注入
液相色谱仪，记录色谱图。理论板数按橙皮苷峰计
算应不低于4000。橙皮苷峰与其他组分峰基线分
离，分离度＞1.5，保留时间为6.5min。
2.4 线性关系试验
精密吸取橙皮苷对照品溶液（浓度为24.62μg/
mL），4，8，12，15，20，30μL注入液相色谱仪，按上述
色谱条件测定，以进样量（C）为横坐标，峰面积（A）
为纵坐标，经线性回归方程Y=1.51×106+4.53×104
（r=0.9994）。橙皮苷进样量在24~25μg之间，与峰面
积呈线性关系。
2.5 稳定性试验
精密吸取供试品溶液10μL，每隔1h进行测定1
次，共6次，橙皮苷峰面积值为1772386，RSD=
1.28％。
2.6 重复性试验
取同批样品（批号061024）制成6份供试品溶
液，各份吸收10μL进样测定，橙皮苷的平均含量为
1791868，RSD=0.45％。
2.7 精密度试验
精密吸取供试品溶液，进样10μL测定6次，橙皮
苷峰面积值为1778696，RSD=0.65％。
2.8 加样回收率试验
精密量取已知含量0.92μg/mL的样品溶液0.5mL
共6份，分别精密加入对照品溶液（浓度C=24.62μg/
mL）0.5，0.6，0.7mL按2.2项下方法制备后，进样10μL
的测定，计算橙皮苷回收率。
表1 柴银感冒颗粒中橙皮苷回收率测定结果（n=6）
2.9 样品测定
取3批样品分别按2.2项方法制备，进样10μL测
定，按外标峰面积法（橙皮苷对照品溶液24.62μg/μL
进样10μL）计算橙皮苷的含量，结果见表2。
表 2 三批样品中橙皮苷含量测定结果
结论：本文用HPLC方法测定柴银感冒颗粒中橙
皮苷的含量，操作简便、省时、专属性强，结果较为
准确。
（收稿日期：2007- 09- 03；修回日期：2007- 12- 05）
橙皮苷
含量（μg）
橙皮苷加
入量（mg）
测得橙皮
苷量（μg）
4.65 12.31
12.31
14.77
14.77
17.23
17.23
18.22
18.52
17.82
17.92
18.00
18.29
回收率
（%）
101.50
99.26
97.41
98.46
98.90
100.0
平均回
收率（%）
99.3
RSD
（%）
1.4
批号 平均含量（mg/袋）
061016
061018
061024
9.2
9.2
9.6
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
多指标试验公式评分法优选驱虫斑鸠菊澄清工艺
刘文丽1，于鲁海1，杨 洪1，徐建国2
（1.自治区人民医院临床药学研究所，新疆 乌鲁木齐 830001；2.自治区药检所，新疆 乌鲁木齐 830002）
摘 要 目的：优化驱虫斑鸠菊水提取液的澄清工艺。方法：应用多指标试验公式评分法结合正交试验设计，以浸
膏量以及浸膏中紫铆素和总黄酮含量为评分指标，考察澄清工艺条件。结果：驱虫斑鸠菊水提取液的澄清条件为：
ZTC1+1澄清剂的加入顺序为先加入0.5％（g/mL）澄清剂B溶液再加入1.0％（g/mL）澄清剂A溶液，澄清剂B和A的最佳用量
分别为2.0％（V/V）和0.5％（V/V），反应温度分别为（80±1）℃和（60±1）℃，反应时间分别为2h。结论：该工艺是可行的。
关键词 驱虫斑鸠菊；正交试验；多指标试验；公式评分法；澄清工艺
驱虫斑鸠菊（Vernonia Anthelmintica Willd）为
菊科一年生草本植物，在中国新疆、巴基斯坦、印度
等地已有数百年的使用历史，是新疆维吾尔医的习
用药材。作为药用部位的驱虫斑鸠菊成熟果实，具
有清除异常粘液质、驱虫、消肿、散寒止痛的作用，
用于治疗湿寒性胃痛、肝病、白癫风等症[1]。经药效
筛选，发现其所含的黄酮类化合物可能是治疗白癫
风的主要活性部位，紫铆素为活性成份之一。本研
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新疆中医药 2008年 第 26卷 第 5期（总第 117期）
究在对驱虫斑鸠菊水提取液的澄清处理时，以筛选
的活性部位和活性成份为目标物，使用以天然多糖
等为原料组成的ZTC1+1型天然澄清剂替代乙醇用
于蛋白质、鞣质等的去除。本实验在预试验的基础
上，采用正交试验设计，以浸膏量以及浸膏中紫铆
素和总黄酮含量为指标，通过多指标试验公式评分
法优选驱虫斑鸠菊澄清工艺。
1 材料和仪器
驱虫斑鸠菊成熟果实采自新疆阿克苏地区扎
木台乡，经北京医科大学药学院天然药物教研室艾
铁民教授鉴定，为菊科植物驱虫斑鸠菊（Vernonia
Anthelmintica Willd）；芦丁对照品（供含量测定用，
中国药品生物制品检定所），紫铆素对照品（自制，
色谱纯度大于99.0％）；ZTC-预处理剂及ZTC-Ⅳ型
澄清剂（天津正天成澄清技术有限公司）；乙腈为色
谱纯，其余试剂均为分析纯。
Agilent 1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公
司）；Agilent 8453紫外分光光度计（美国安捷伦公
司）；电子天平（德国Sartorius）。
2 方法与结果
2.1 驱虫斑鸠菊水提取液的制备
称取驱虫斑鸠菊成熟果实适量，置于圆底烧瓶
中，加入8倍量水，浸泡1.0h，回流提取3次，每次
1.0h，过滤，合并滤液，按1∶10比例水浴浓缩，备用。
2.2 测定方法
2.2.1 紫铆素含量测定方法 色谱条件、色谱柱：
ZORBAX SB-C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相：
乙腈-0.02M磷酸盐缓冲液（梯度洗脱），流速：1.0mL/
min，检测波长：280nm，柱温：室温，进样量：20μL。
（1）对照品溶液的制备：取紫铆素对照品适量，
精密称定，置适宜量瓶中，加甲醇溶解并用流动相
稀释至刻度，制成0.1mg/mL的对照品溶液。
（2）样品测定：分别吸取对照品溶液和供试品
溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，计算紫铆素含
量。
2.2.2 驱虫斑鸠菊总黄酮含量测定[1] 按照部颁标
准[1]的方法，以芦丁为对照品，经NaNO2-AL（NO3）3-
NaOH显色反应，在波长510nm处测定吸光度值，计
算总黄酮含量。
2.2.3 浸膏量的测定 精密移取驱虫斑鸠菊提取
液10mL，置于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，残
渣于105℃干燥至恒重，取出，置干燥器中放置30min
后称定重量，计算。
2.3 驱虫斑鸠菊水提取液的澄清过程
2.3.1 ZTC-Ⅳ型澄清剂配制 1.0%（g/mL）澄清剂
A溶液：取A组分加少量去离子水，搅拌成糊状，加去
离子水至足量，溶胀24h以上，备用。
0.5％（g/mL）澄清剂B溶液：取B组分加少量0.5%
（V/V）醋酸溶液，搅拌成糊状，加0.5%醋酸溶液至足
量，溶胀24h以上，备用。
2.3.2 澄清液制备 量取驱虫斑鸠菊水提取液
150mL，按正交表（表1）的设计要求，用稀盐酸溶液
或0.1mol/L的氢氧化钠溶液调pH；在提取液中加入
适量预处理剂A，直接煮沸，温度降至（55±1）℃后，
加入同量的预处理剂B，恒温6h，取出，煮沸15min，
放置；在（80±1）℃下搅拌加入澄清剂B溶液适量，恒
温2h，且每隔30min缓慢搅拌1次，2h后降温至（60±
1）℃，缓慢搅拌加入适量澄清剂A溶液，恒温2h，每
隔1h搅拌1次，2h后取出冷却，用去离子水补至足
量，备用。
2.3.3 供试液制备 上述溶液以3000r/min离心
10min，移取上清液供测定用。
2.3.4 正交试验设计 根据预试验结果，选出处理
前pH值（A）、预处理剂用量（B）及澄清剂用量（C）等
3因素，每个因素采用4水平进行试验，对测定的浸
膏量以及浸膏中紫铆素和总黄酮含量等3个指标采
用多指标试验公式评分法进行评定，优化澄清工艺
的条件。正交试验表见表1。
表 1 因素水平表
2.4 数据处理
用多指标试验公式法[2]进行数据处理。以Xij表
示第j个指标下的第i个测定值。i=1，2…n；j=1，2…k。
首先，以各指标的最大值作为参照对同一指标各数
据进行标准化处理，Dij表示第j个指标下的第i个测
定值的标准化数据。
Dij=100×Xij/(Xj）max [1]
以SDj表示第j个指标下Dij的标准差，以RSDj表
示第j个指标的相对标准差，则根据各指标相对标准
差赋权为RSD/RSDj（其中RSD为指定指标的相对标
水平
因 素
pH
(A)
预处理剂
%A∶%B
（B）
1
2
3
4
不调 pH
4.0
7.0
10.0
0∶0
0.2%∶0.2%
0.4%∶0.4%
0.1%∶0.1%
ZTC用量
0.5%B∶1.0%A
（C） （D） （E）
0∶0
2.0%∶0.5%
4.0%∶1.0%
6.0%∶1.5%
40
新疆中医药 2008年 第 26卷 第 5期（总第 117期）
表 3 试验公式评分方差分析表
直观分析表明：在所选因素水平范围内，按多
指标试验公式评分法判定，预处理剂（因素B）的使
用对驱虫斑鸠菊提取液指标成份的影响最大，其次
为澄清剂（因素C）的使用，酸碱度（因素A）的影响最
小。以空白列D和E作为误差项进行方差分析，结果
表明：因素B为主要影响因素，具有统计学意义（P＜
0.05），因素A和因素C则无统计学意义。结合澄清效
果综合考虑，对驱虫斑鸠菊提取液不调节酸碱度，
不使用预处理剂，澄清过程中，在（80±1）℃下搅拌
加入2.0％（V/V）的0.5%澄清剂B溶液，恒温2h，且每
隔30min缓慢搅拌1次，2h后降温至（60±1）℃，缓慢
搅拌加入0.5％（V/V）的1.0％澄清剂A溶液，恒温2h，
每隔1h搅拌1次，2h后取出冷却。
2.5 验证试验
根据结果进行验证试验，表明经澄清剂处理的
提取液有絮凝物出现，离心后液体清亮，其紫铆素
含量14.42mg/g，总黄酮含量 309.5mg/g，浸膏量
11.0mg/mL；而未经处理的提取液离心后不清亮，其
紫铆素含量12.80mg/g，总黄酮含量405.5mg/g，浸膏
量11.47mg/mL。
3 讨论
采用多指标进行工艺筛选，有利于兼顾各指标
的综合效应，避免单一指标进行工艺优化时产生的
偏差，有利于对结果进行正确分析，易于发现较优
方案。多指标试验公式评分法根据变异系数的大小
和指标的重要程度确定加权系数，有利于更加全
面、真实地衡量各指标的作用，更能揭示事物的本
质，较单一指标筛选更加科学、合理。
准差）；根据各指标的重要程度赋权为Ej，其中浸膏
量以及浸膏中紫铆素和总黄酮含量分别为0.1、0.5、
0.4；结合各指标的重要程度和各组数据的相对标准
差确定的权重系数为
Fj=Ej*RSD/RSDj [2]
其中j=1，2…k。
因此，多指标试验公式为
Pi=∑（Fj×Dij）/∑Fj i=1，2…n；j=1，2…k； [3]
[3]式计算所得的兼顾3指标综合效应的公式分
越大越好。结果见表2，方差分析见表3。
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
K1
K2
K3
K4
R*4
1
1
1
1
2
2
2
2
3
3
3
3
4
4
4
4
309.0
299.5
297.2
306.5
11.83
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
1
2
3
4
343.8
284.5
270.0
313.9
73.84
1
2
3
4
2
1
4
3
3
4
1
2
4
3
2
1
320.1
312.7
300.2
279.2
40.89
实验号
A B C
评 价 指 标
紫铆素
D1
总黄酮
D2
浸膏
D3
综合评分
Pi
100.0
83.7
66.4
75.5
90.1
76.9
71.7
87.2
89.5
63.7
59.0
80.1
74.6
64.4
68.4
85.3
77.3
11.4
0.148
0.500
100.0
74.3
63.2
52.6
80.0
55.0
53.0
71.0
85.2
68.7
67.3
77.2
85.2
66.0
64.6
94.6
72.4
14.1
0.194
0.305
68.5
72.4
75.5
70.0
65.2
77.6
79.0
69.5
68.3
76.7
93.1
76.9
78.3
94.3
100.0
84.3
78.1
10.1
0.130
0.114
96.1
79.2
66.5
67.2
83.7
69.7
66.4
79.6
85.5
67.0
66.0
78.7
78.6
68.6
71.1
88.3
因 素
1
2
3
4
3
4
1
2
4
3
2
1
2
1
4
3
309.9
303.4
305.5
293.5
16.38
1
2
3
4
4
3
2
1
2
1
4
3
3
4
1
2
313.8
319.3
293.5
285.6
33.75
D E
mean
SD
RSD
Fj
表 2 L16（45）正交试验设计表及结果
注：D按公式 1计算，Pi按公式 3计算。
方差来源 离均差平方和 自由度 均方
A
B
C
误差（D+E）
23.89
805.17
240.19
231.24
3
3
3
6
7.96
268.39
80.06
38.54
F值
0.2066
6.9638
2.0774
P值
0.8883
0.0222
0.2047
41
新疆中医药 2008年 第 26卷 第 5期（总第 117期）
大量研究表明：氧自由基所致的脂质过氧化作
用与动脉粥样硬化（AS）的形成与发展关系密切。本
试验是应用Fe2+-半胱氨酸诱导的大鼠肝微粒体脂
质过氧化模型，加入景天通脉方水溶性部分浸膏样
品清除了由于加入Fe2+-半胱氨酸而使微粒体系统
产生的大量自由基，从而有效的阻断了Fe2+-半胱氨
酸导致的脂质过氧化作用。
1 材料与方法
1.1 动物
二级雄性SD大鼠10只，体重250g，由中国医学
科学院动物繁育场提供。
1.2 试剂与仪器
试剂：10-3M半胱氨酸；10-2M硫酸亚铁；20%三氯
醋酸(TCA)；0.67％硫代巴比妥酸（TBA）（上海化学试
剂公司）；0.1M磷酸缓冲液（PBS）（PH=7.4）；标准品
10-4M四乙基甲烷（TEP）；Fe2+天津市天河化学试剂
厂生产（分析纯）；95%乙醇均为分析纯。
仪器：GL-20A湘仪全自动高速冷冻离心机（湖
南仪器仪表总厂离心机厂）；LXJ-Ⅱ型低速离心沉
淀机（上海医用分析仪器厂）；酶标仪（日本B10-
ROD550）；D40-1型电动匀浆器（浙江杭州仪表电机
厂）；电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂）；SWX-
DH电热恒温水浴箱（汕头市第二医疗器械厂）。RE-
53A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；CHB-Ⅲ
型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公
司）；AB-8型大孔吸附树脂（天津南开大学化工厂产
品）；AB104-N型电子天平（Mettler -Toledo Instr．
ShangHai Ltd．）。
1.3 样品制备
取景天通脉方传统水煎剂，水温80℃浓缩，得稠
浸膏1.85kg，留20mL稠浸膏晾干，得干燥浸膏样品
2.09g（Z1）。余稠浸膏用水溶解，过滤，上AB-8型大
孔吸附树脂：大孔树脂水洗脱（Z2）、20％乙醇洗脱
（Z3）、50％乙醇洗脱（Z4）、75％乙醇洗脱（Z5）、95%
乙醇洗脱（Z6）分离所得各部分浸膏预留干燥样品
为3.16g、13.31g、3.30g、0.66g、0.26g。
1.4 微粒体的制备[1]
动物禁食24h，断头处死，迅速解剖，取出肝脏，用
预冷的生理盐水洗净，滤纸拭干，称重后，用眼科用剪
刀剪成小碎块，按1∶4加入匀浆缓冲液（50mmol/LTris，
1.15％KCL，PH7.4) 制成肝匀浆，在10000×g低温离心
20min，弃去沉淀，将上清液转移至超速离心管内，在
105000×g离心60min，沉淀为微粒体。
1.5 实验方法
将景天通脉方中剂量组传统水煎备用份提取、
分离所得各部分浸膏预留样品（6份），每一份样品
设定4个终反应浓度，每个浓度重复试验3次，试验
操作过程如下。
总体积为1mL，37℃保温15min，立即加入20％
TCA1mL（终止反应），3000rpm离心10min后，取上清
1mL，加入1mL0.67％TBA，在100℃沸水浴保温
10min，在532nm处，测定OD值。
景天通脉方抗氧化作用的试验研究
赵翠霞1，热娜·卡斯木2
（1.新疆医科大学附属中医医院，新疆 乌鲁木齐 830000；2.新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830054）
摘 要 目的：探讨景天通脉方的抗氧化作用。方法：通过大鼠肝微粒体的提取，制备Fe2+-半胱氨酸诱导的脂
质过氧化损伤模型，检测景天通脉方水溶性部分的样品对丙二醛(MDA)的抑制作用的影响，观察它的抗氧化作用。
结果：在Fe2+-半胱氨酸诱导的微粒体脂质过氧化模型中，大孔树脂75％乙醇分离浸膏样品（Z5）、大孔树脂95％乙醇
分离浸膏样品（Z6）对MDA抑制率和IC50值均大于50％，并且反应浓度在100μg／mL和50μg／mL时，样品对MDA抑制作
用明显。结论：景天通脉方具有抗氧化作用，且浓度较高作用较明显。
关键词 景天通脉方；微粒体；丙二醛
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国卫生部药
品标准—维吾尔药分册[S].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，
1999：47，50.
[2] 韩可勤，杨静化，刘晓东.药学应用概率统计[M].南京：东南大学
出版社，2000：130.
（收稿日期：2008- 08- 18）
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
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