全 文 ：糙叶败酱总皂甙的提取纯化和含量测定
王学习 1 ,陈　茹1 ,李世刚 1 ,沈　薇 2 ,程卫东1 ,赵健雄 1
(1.兰州大学中西医结合研究所;2.兰州大学附属肿瘤研究中心 ,甘肃兰州 730000)
　　摘要　目的:研究超声波提取糙叶败酱总皂甙的提取工艺。方法:将正交试验法与超声波提取相结合 , 研究糙
叶败酱总皂甙的最佳提取工艺。结果:糙叶败酱总皂甙的最佳提取工艺为:乙醇浓度 65%,超声提取时间 40 m in,
超声提取温度 55℃, 超声功率 210W。结论:超声波提取糙叶败酱总皂甙是一种简单 、快捷 、高效的提取方法。
关键词　糙叶败酱;正交试验;总皂甙;提取工艺
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)05-0595-03
Studies on Extraction P rocessO ptmi ization ofPatrin ia scabra Bunge Sapon ins
WANG Xue-x i1 , CHEN Ru1 , LI Sh i-gang1 , SHEN W ei2 , CHENG W ei-dong1 , ZHAO Jian-x iong1
( Institute of Integrated T raditiona l Chinese andW estern M edicine, Lanzhou University, Lanzhou 730000, Ch ina)
Abstrac t　Objec tive:To op tim ize the conditions for the extraction o fPatrin ia scabra Bunge saponins. M ethods:O rthogona l expe r-
im enta l design and u ltrason icme thod we re em ployed to exam ine the conditions fo r the ex traction by dete rm ina tion of saponins. Results:
The optim un condition for the ex traction o fPatrin ia scabra Bunge saponins was a s fo llow s:65% e thano l for 40 m inutes, 55℃ and 210
w att of ultra son ic e fficinecy. Conc lusion:The extraction m e thod o fPa trin ia scabra Bunge sponins is simp le and effic ient.
K ey words　Pa trin ia scabra Bunge;O rthogonal expe rim ent;Saponins;Ex traction p rocess
基金项目:国家中药管理局课题(04-057ZP61);甘肃省科技攻关项目(2GS042-A43-014-15)作者简介:王学习 , Tel:0931-8915184, E-m ail:w xx 0804@126. com。
　　糙叶败酱(Patrin ia scabra Bunge)为败酱科败酱
属植物 , 常与其同属植物异叶败酱 (Rheterophy lla
Bunge)混用 ,俗称墓头回。该药性温味苦 ,微酸涩 ,
药用其根茎和全草 ,成分主要为挥发油和皂甙 〔1 ～ 3〕。
据报道 ,其总皂甙主要是以齐墩果酸甙元等组成的
三萜皂甙 ,具有提高机体免疫功能和体内外抗肿瘤
等作用 〔4 ～ 7〕。本文旨在用正交试验法研究超声提取
糙叶败酱根部总皂甙的最佳工艺。
1 　材料与方法
1.1 　材料　糙叶败酱 ,直接从产地收集 ,由甘肃省
肿瘤医院石长栓教授鉴定。齐墩果酸 ,中国药品生
物制品检定所 ,批号 110709-200304。 D101净品大
孔吸附树脂 ,比表面积≥400m2 /g,兰州四方医药开
发公司 。
BP-221S分析天平 ,德国 Sartorius。 760-CRT型
双光束紫外可见分光光度计 ,上海精密科学仪器公
司 。KQ-300VDE型超声波清洗器 ,昆山市超声仪器
有限公司。
1.2 　糙叶败酱总皂甙的提取　精密称取干燥恒重
的糙叶败酱粉末 (40目)2.00 g于 50m l醇中 ,按不
同乙醇浓度 、超声时间 、超声温度 、超声功率进行超
声提取 ,超声频率为 28、45、100 kHz每 20 s交替 1
次 。取超声提取液过滤 , 4000 r /m in, 10 m in离心 ,
取上清液减压回收蒸干 ,加水 10 m l溶解 ,进行纯化
处理 ,甲醇定容至 10 m l。
1.3　纯化方法的选择
1.3.1　溶剂萃取法:取上述水溶粗品 ,以乙醚脱脂
2次 ,每次 20 m l,合并乙醚液并用 10 m l水洗涤 ,弃
去醚层 ,将洗液与水层合并 ,用水饱和过的正丁醇萃
取 3次 ,每次 20m l,合并萃取液 ,用正丁醇饱和过的
水 20 m l洗涤 ,挥去正丁醇后以甲醇溶解并定容至
10m l。
1.3.2 　大孔吸附树脂柱层析法:精密量取上述水
溶粗品液 10m l进行大孔吸附树脂柱层析 ,水洗涤
除糖 ,再以 65%乙醇洗脱 ,收集洗脱液至薄层显色
无紫色斑点出现为止 ,减压回收 ,甲醇溶解并定容至
10m l。
1.4　糙叶败酱总皂甙含量的测定 〔8、9〕
1.4.1 　标准曲线的制作:精密称取干燥至恒重的
齐墩果酸对照品 10.00 mg置于 10 m l量瓶中 ,加甲
醇 5m l超声处理 5 m in,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,
得浓度为 1 mg /m l的对照品储备液 。
吸取齐墩果酸对照品溶液 0.00、 25、 50、 75、
100、125μl,置具塞试管中 ,挥去甲醇 ,加入新鲜配
制的 5%香草醛-冰醋酸溶液 0.2m l,高氯酸 0.8 m l,
加塞 ,摇匀 ,于 65℃水浴中加热 15 m in,取出 ,冷水
冷却至室温后 ,加入冰醋酸 5 m l,摇匀 ,以 0.00 μl
齐墩果酸对照品溶液为空白 , 558 nm比色 ,测定吸
595 中药材　Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 5期 2007年 5月DOI牶牨牥牣牨牫牳牰牫牤j牣issn牨牥牥牨牠牬牬牭牬牣牪牥牥牱牣牥牭牣牥牫牬
光度值 。对吸光度与齐墩果酸含量 (μg)进行线性
回归 ,求回归方程 。
1.4.2　精密度考察:精确称取糙叶败酱叶燥粉末
2.00 g样品 6份 ,照供试品选定条件进行提取 、纯
化 。各取提取液 50 μl,测定其吸光度 , 计算 RSD
值 。
1.4.3　回收率试验:精密称取糙叶败酱干燥粉末
1.000 g共 9份 ,其中 2份加入齐墩果酸对照品 1.00
mg, 2份加入 0.75 mg, 2份加入 0.50 mg,另 3份为
单纯样品。照供试品选定条件进行提取 、纯化皂甙 ,
测定其吸光度 ,计算回收率 。
1.4.4　样品总皂甙含量的测定:称取甘肃省榆中
县 、庆阳县 、甘南地区产糙叶败酱粉末 2.000 g,各 8
份 ,按最佳工艺提取 、纯化处理 ,显色 ,测吸光度值 。
根据回归方程求总皂甙的含量 。
2 　结果
2.1 　回归方程及精密度和回收率考察　以 0.00
μl齐墩果酸对照品溶液为空白 ,测定标准液在 558
nm 处的吸光度值 , 得回归方程 Y =0.01284X-
0.03484, r =0.9980。 精密 度考 察 RSD 值为
2.14%,表明该方法重现性较好。
回收率试验结果 , 3批样品回收率分别为
97.3%、94.5%、96.9%,平均回收率为 96.2%, RSD
值为 1.2%。
2.2 　总皂甙纯化方法的选择　根据溶剂萃取法和
大孔吸附树脂柱层析法纯化所得皂甙含量和两种纯
化方法的可操作性 、安全性 、经济性等因素综合考
虑 ,选择大孔吸附树脂柱层析法纯化总皂甙。
2.2.1　糙叶败酱总皂甙超声提取单因素试验:选
取乙醇浓度 、超声提取时间 、超声提取温度 、超声功
率 4个单因素 ,确定其适宜的范围。
2.2.1.1　乙醇浓度对糙叶败酱总皂甙提取率的影
响:见图 1。试验采用 45%、55%、65%、75%、85%、
95%6个不同浓度的乙醇溶液来提取糙叶败酱总皂
甙 。结果表明 ,当乙醇浓度为 65%时 ,总皂甙含量
最高。当乙醇浓度再增加时 ,总皂甙含量有下降的
趋势 ,故选择 65%的乙醇溶液比较适宜 。
图 1　乙醇浓度对总皂甙产率的影响
2.2.1. 2　超声提取时间对糙叶败酱总皂甙提取率
的影响:见图 2。试验分别采用 10、20、30、40、50、60
m in提取糙叶败酱总皂甙 。结果表明 ,在 10 ～ 40
m in,总皂甙含量增加迅速;随后随时间的延长 ,总皂
甙增加极少 ,所以从经济的角度考虑 ,以 40 m in为
宜。
图 2　超声提取时间对总皂甙产率的影响
2.2.1. 3　超声提取温度对糙叶败酱总皂甙提取率
的影响:见图 3。试验选取 35、45、55、65、75、85℃进
行超声试验 。温度升高对皂甙含量的变化影响较
小 ,超过 55℃皂甙含量降低 。因此 , 55℃为适宜温
度。
图 3　超声提取温度对总皂甙产率的影响
2.2.1. 4　超声功率对糙叶败酱总皂甙提取率的影
响:见图 4。选取 120、150、180、210、240、300W不同
超声功率进行试验 。结果表明 , 在 120 ～ 210W ,功
率增加总皂甙含量增加迅速;而在 210W 后 ,总皂甙
含量增加缓慢 ,分析原因为超声功率为 210W时 ,总
皂甙已基本提取完全。
图 4　超声功率对总皂甙产率的影响
2.2.2 　糙叶败酱总皂甙超声提取的正交设计试
验:见表 1, 2。根据单因素试验结果 ,分别选择乙醇
浓度 、超声时间 、提取温度和超声功率 4个因素 ,按
596 中药材　Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 5期 2007年 5月
照 L9(34)正交设计 ,确定 9组不同组合试验 ,从中
筛选出最佳的工艺条件和技术参数。
　表 1 　正交试验方案及其结果
处理号 乙醇浓度 /A%
超声时间 /B
m in
提取温度 /C℃
超声功率 /D
W
总皂甙产率%
1 55 30 45 180 1. 43
2 55 40 55 210 2. 03
3 55 50 65 240 1. 56
4 65 30 65 240 1. 89
5 65 40 55 180 1. 79
6 65 50 45 210 2. 01
7 75 30 65 210 1. 69
8 75 40 45 240 1. 56
9 75 50 55 180 1. 20
K1 1.67 1. 67 1. 67 1.47
K2 1.90 1. 79 1. 71 1.91
K3 1.48 1. 59 1. 68 1.67
R 0.41 0. 20 0. 04 0.44
　表 2 　方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 F值 P值 显著性
A 0.26 2 95. 22 0. 010 *
B 0.06 2 23. 36 0. 041 *
C 0.00 2 1. 00 0. 500
D 0.29 2 107. 16 0. 009 **
误差 0.00 2
F0.05(2, 2)=19.00
最佳工艺:A2B2C2D2
　　注:*显著 P<0. 05;**极显著 P<0. 01
　　由正交试验结果综合分析可知 ,糙叶败酱总皂
甙超声提取的最佳工艺为:乙醇浓度 65%,超声提
取时间 40 m in, 超声提取温度 55℃, 超声功率
210W。各种因素对总皂甙提取效果影响的权重依
次为:超声功率 、乙醇浓度 、超声提取时间 、超声提取
温度。
　表 3 　不同产地糙叶败酱总皂甙含量
样品产地 样本数 总皂甙含量(%)
甘肃省榆中县 8 1. 81±0.04
甘肃省庆阳县 8 2. 18±0.09
甘肃省甘南地区 8 1. 99±0.08
2.3　样品总皂甙含量　见表 3。甘肃省庆阳县产
糙叶败酱总皂甙含量 2.18±0.09,含量最高 。
3　讨论
为了充分利用糙叶败酱 ,开发和利用糙叶败酱
总皂甙 ,本试验通过正交试验优化了超声提取糙叶
败酱总皂甙的工艺条件 。单因素试验和正交试验的
结果表明 ,糙叶败酱总皂甙提取的最佳工艺条件为:
乙醇浓度 65%,超声提取时间 40 m in,超声提取温
度 55℃,超声功率 210W 。各因素对总皂甙提取效
果影响的权重依次为:超声功率 、乙醇浓度 、超声提
取时间 、超声提取温度。通过方差分析检验可知 ,除
提取温度外其余三种因素对提取率均有影响 ,差异
有显著性 。
本文比较全面的考察了各种影响超声提取糙叶
败酱总皂甙的因素 ,取得了满意的结果 ,该方法工艺
简单 、快捷 、易行 ,得率较高 ,为糙叶败酱总皂甙的药
理学研究奠定了一定的基础 。
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(2006 - 10 -08收稿)
《中药材》杂志为国家首批公布的可登处方药广告的专业媒体 。
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