全 文 ：虎耳草中总黄酮提取工艺的研究
徐应淑，李留伟 (遵义医学院药学院，贵州遵义 563003)
摘要 ［目的］对虎耳草中总黄酮的提取工艺进行优化。［方法］用乙醇提取虎耳草中的总黄酮，考察液料比(A)、乙醇浓度(B)、提取时
间(C)、提取次数(D)4个因素对总黄酮得率的影响。通过正交试验，确定提取的最佳工艺条件。以芦丁为对照品，采用紫外分光光度
法，在 368 nm波长处测定提取液中总黄酮的含量。［结果］芦丁在 5 ×10 －3 ～ 25 ×10 －3mg /ml具有良好的线性关系，R2 = 0． 999 9，平均回
收率为 101． 71%，RSD为 1． 53%。［结论］乙醇提取虎耳草中总黄酮的最佳工艺为 A3B1C2D3。
关键词 虎耳草;总黄酮;正交试验;紫外分光光度法
中图分类号 R917 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2011)26 －15993 －02
Study of Total Flavonoids Extraction from Saxifraga stolonifera Curt
XU Ying-shu et al (Department of Pharmacy，Zunyi Medical College，Zunyi，Guizhou 563003)
Abstract ［Objective］The researth aimed to optimize the extraction technology of total flavonoids from Saxifraga stolonifera Curt by ethanol ex-
tract method． ［Method］Total flavonoids was extracted from Saxifraga stolonifera Curt by ethanol extract method． The effects of four factors inclu-
ding liquid-solid ratio(A)，ethanol concentration(B)，extraction time(C)，extraction times(D)on the yield of total flavonoids were investigated．
The optimum technological conditions of total flavonoids exaction were confirmed through the orthogonal test． The contrast sample of UV spectro-
photometry was Rutin and the analyzed wavelength was 368 nm． ［Result］With UV spectrophotometry at 368 nm，good linearity of rutin concentra-
tion was found in the range of 5 ×10 －3 － 25 ×10 －3mg /ml(R2 = 0． 999 9)with the average recovery rate of 101． 71% and RSD of 1． 53%，［Con-
clusion］The optimal extraction process was A3B1C2D3 ．
Key words Saxifraga stolonifera Curt．;Total flavonoids;Orthogonal test;UV spectrophotometry
基金项目 遵义医学院硕士启动基金项目(F-302) :贵州省卫生厅科学
技术基金项目(gzwkj2009-1-017)。
作者简介 徐应淑(1976 － ) ，女，贵州湄潭人，副教授，硕士，从事天然
药物化学、药学方面的研究，E-mail:xuyingshu1976 @ 126．
com。
收稿日期 2011-06-01
虎耳草系虎耳草科植物虎耳草(Saxifraga stolonifera
Meerb．)的全草，为常用中草药，在我国南北地区均有分布。
它具有清热、凉血解毒以及治风热咳嗽、风火牙痛、风疹瘙
痒、痔疮肿痛、毒虫咬伤、外伤出血、急性中耳炎、风热咳嗽等
功效［1］。现代研究表明，虎耳草提取物对抑制前列腺癌细胞
有明显的作用［2 －3］，所含的黄酮类化台物具有降低血管脆
性、降血脂、抗炎、抗过敏、抗病毒、抗自由基、抗肿瘤、抗氧
化、抗菌等作用［4 －6］。为寻求用乙醇提取虎耳草中总黄酮的
最佳工艺，笔者采用正交试验优选提取条件，为虎耳草的开
发研究和临床应用提供依据。
1 材料与方法
1． 1 仪器 循环水式多用真空泵(SHB-Ⅲ型，郑州长城科工
贸有限公司) ，旋转蒸发器(RE-52AA 型，上海亚荣生化仪器
厂) ，电子天平(BS224S 型，北京赛多利斯仪器系统有限公
司) ，真空干燥箱(DZF-2 型，北京市永光明医疗仪器厂) ，
TU1900型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责
任公司)。
1． 2 试药 样品野生虎耳草全草由笔者亲自采集于贵州湄
潭郊区的山坡上，由医学院生药学教研室杨建文教授鉴定为
虎耳草科植物虎耳草的全草。芦丁对照品(批号:0081-9904，
中国药品生物制品鉴定所) ，其他试剂均为分析纯。
1． 3 对照品溶液的制备 精密称取 120 ℃干燥至恒重的芦
丁对照品 0． 021 3 g，用浓度 95%乙醇定容至 100 ml，稀释 1
倍，浓度为 0． 115 mg /ml，备用。
1． 4 样品中总黄酮的提取 称取虎耳草粉末约 20 g，用乙
醇为溶剂，在不同条件(表 1)下提取，提取完成后，趁热抽
滤，浓缩至提取液体积小于 100 ml，用浓度 95%乙醇定容至
100 ml。
2 结果与分析
2． 1 测定波长的选择 用紫外分光光度计对芦丁对照品溶
液在 190 ～500 nm范围的波谱扫描。由图 1 可知，将 368 nm
定为测定总黄酮含量的吸收波长。
表 1 试验条件
Table 1 Experimental conditions
编号
No．
样品质量
Weight of
samples∥g
溶剂体积(A)
Volume of
solvent∥ml
浓度(B)
Concentration
%
时间(C)
Time
h
次数(D)
Times
次
1 20． 21 200 40 1 1
2 20． 33 200 60 2 2
3 20． 01 200 80 3 3
4 20． 16 300 40 2 3
5 20． 10 300 60 3 1
6 20． 06 300 80 1 2
7 20． 25 400 40 3 2
8 20． 03 400 60 1 3
9 20． 02 400 80 2 1
图 1 芦丁对照品的波谱扫描
Fig． 1 Spectral scan of rutin reference substance
2． 2 标准曲线的绘制 分别精密吸取对照品溶液 0、1． 0、
2． 0、3． 0、4． 0、5． 0、6． 0 ml 于 25 ml 容量瓶中，浓度 95%乙醇
定容至刻度，用紫外分光光度计于 368 nm处测定其吸光度，
以吸光度(A)为纵坐标，芦丁对照品溶液质量浓度(C)为横
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2011，39(26):15993 － 15994 责任编辑 刘月娟 责任校对 李岩
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2011.26.118
坐标绘制标准曲线，回归方程为:A = 0． 028 2 C + 0． 002 4，R2
= 0． 999 9。结果表明，芦丁在 5 × 10 －3 ～ 25 × 10 －3 mg /ml 内
具有良好的线性关系。
2． 3 供试品黄酮含量的测定 分别取对照品溶液 1 ～ 9 各
0． 2 ml至 25 ml 容量瓶中，以浓度 95%乙醇定容至刻度，于
368 nm处测定其吸光度，然后根据标准曲线计算出虎耳草中
的总黄酮含量(表 2)。
表 2供试品总黄酮含量
Table 2 Determination of total flavonoids in test sample
编号
No．
吸光度
Absorbance
浓度
Concentration
×10 －3mg /ml
黄酮质量
Weight of
flavonoids∥mg
含量
Content
mg /g
1 0． 219 7． 68 96． 01 4． 75
2 0． 462 16． 30 203． 72 10． 02
3 0． 524 18． 50 231． 21 11． 55
4 0． 698 24． 67 308． 33 15． 29
5 0． 320 11． 26 140． 78 7． 00
6 0． 474 16． 72 209． 04 10． 42
7 0． 566 19． 99 249． 82 12． 34
8 0． 562 19． 84 248． 05 12． 38
9 0． 373 13． 14 164． 27 8． 21
2． 4 精密度试验 精密吸取对照品溶液 4 ml，置 25 ml容量
瓶中，浓度 95%乙醇定容至刻度，368 nm 处测定吸光度，重
复测定 6 次。结果表明，RSD = 0． 82%，说明仪器精密度
良好。
2． 5 稳定性试验 精密吸取 7号供试品 0． 2 ml，置 25 ml容
量瓶中，浓度 95%乙醇定容至刻度，用紫外可见分光光度计
在 368 nm波长下测定在 10、20、30、40、50、60 min时吸光度，
RSD =0． 86%，表明提取液在 60 min内较为稳定。
2． 6 重现性试验 精密吸取 7 号供试品 0． 2 ml 6 份，分别
于 25 ml容量瓶中，浓度 95%乙醇定容至刻度，于 368 nm处
测定吸光度，RSD =1． 42%，说明该方法重现性良好。
2． 7 加样回收率试验 把芦丁对照品溶液加入 1号供试品
溶液中做回收率试验，分别加入芦丁对照品 1 ～ 6 ml，分别与
0． 1 ml供试品相混合，分别用浓度 95%乙醇定容至 25 ml容
量瓶中，于 368 nm处测定其吸光度。根据标准曲线计算黄
酮总量，然后计算回收率(表 3)。RSD =1． 53%，说明该方法
准确度良好。
对测定结果进行直观分析和方差分析，直观分析因素主
次由极差大小决定，D ＞ A ＞ C ＞ B。方差分析结果表明，提取
次数(D)的影响在 0． 05水平显著。结合实际情况，选取较佳
的工艺条件为 A3B1C2D3，即加 20 倍量溶剂，用浓度 40%乙
醇提取，每次提取 2 h，共提取 3次。
表 3 加样回收率
Table 3 Average recovery
序号
No．
加入量
Addition
amount∥mg
样品量
Sample
amount∥mg
测定量
Determined
amount∥mg
回收率
Recovery
%
1 0． 106 5 0． 096 1 0． 215 0 106． 12
2 0． 213 0 0． 096 1 0． 307 2 99． 39
3 0． 319 5 0． 096 1 0． 421 6 101． 44
4 0． 426 0 0． 096 1 0． 523 6 100． 29
5 0． 532 5 0． 0 96 1 0． 635 2 101． 05
6 0． 639 0 0． 096 1 0． 749 6 101． 97
3 结论与讨论
正交试验用于提取工艺优化，减少了试验次数，节约了
试验成本，是天然产物有效成分提取工艺优化试验较好的方
法之一。由于大多数黄酮类化合物分子中存在肉桂酰基和
苯甲酰基组成的交叉共轭体系，其 MeOH谱 200 ～ 400 nm的
区域内存在 2个主要的紫外吸收带。该研究不使用显色剂，
直接在其特征吸收峰处对供试样进行测定。研究表明，该法
能快速且稳定地测定虎耳草中总黄酮的含量，适合检测生产
工艺过程的中间产品含量。
参考文献
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241 －246．
(上接第 15992 页)
作用。由表 3可知，3种野生中药材中 Fe的含量在 969． 32 ～
2 147． 52 μg /g，艾草中含量最高，萹蓄中含量最低。
3 结论与讨论
该研究采用湿法处理样品，以火焰原子吸收光谱法测定
其中 9种无机元素。所测定的微量元素含量与文献［1 － 5］
中提供的数据相比，各元素含量差异较大，这种差异可能与
野生中药材的产地、采收季节、提取方式等因素有关，且天津
土壤中各种无机元素含量高于全国平均含量［7］。3 种中药
材中，萹蓄中各种检测的无机元素含量均较低，艾草中无机
元素含量较高。中药材中各种无机元素是其重要组成成分，
其疗效不仅与其有机化合物有关，还与其所含的无机元素种
类及含量有着密切的关系，其药性和无机元素的关系有待进
一步研究。
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49951 安徽农业科学 2011 年