全 文 ：亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific Traditional Medicine
Vol. 5 No. 11%
Nov. 2009
第 5 卷 第 11 期
2009 年 11 月
收稿日期：2009－08－17
基金项目：科技重大专项“十一五”计划（2009ZX09103-354）
作者简介：王莹（1982-），女，内蒙古通辽人，辽宁中医药大学硕士研究生，研究方向为生药学；孟宪生（1964-），男，博士，辽宁中
医药大学副教授，研究方向为中药组分配伍、代谢组学及药品质量分析。
白茅根多糖提取工艺优化及含量测定
王 莹 1，2，孟宪生 1*，包永睿 1，郭小瑞 1
（1.辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 l16600；2.通辽市职业学院 药学系，内蒙古 通辽 028000）
摘 要：目的：筛选白茅根中多糖类化合物的最佳提取工艺，并建立白茅根多糖含量测定的方法。方法：通过正
交试验设计考察了白茅根多糖水提醇沉的工艺条件；以葡萄糖标准液作为考察指标，绘制标准曲线，用苯酚—
硫酸比色法测定白茅根总多糖的含量。 结果：白茅根多糖的最佳提取工艺为100℃，提取3次，每次2.5h，料液比
为1：10，醇沉时最佳乙醇终浓度为80％，测定白茅根多糖含量达到0.807％。 结论：筛选出最佳提取工艺条件，并
确立了含量测定的方法，该方法准确、简便，具有良好的重现性。
关键词：白茅根；多糖类化合物；提取；含量测定
中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1673－2197（2009）11－0024－03
白茅根为禾本科植物白茅 Imperata cylindrical Bcauv.
Var.major（Nees）C.E.Hubb.的干燥根茎 ，又名兰根 、地筋 、
白花茅根、茅草根、甜草根等，广泛分布于全国各地，为中
医传统常用中药。其具有凉血止血、清热利尿之功效，用于
治疗热病烦渴、吐血、尿血、热淋涩痛、小便不利、水肿和黄
疸等症。 白茅根主要化学成分为三萜类和糖类化合物 ［1］。
据文献记载白茅根多糖具有免疫调节作用 ［2、3］，但有关白
茅根多糖及其制品中多糖的检测方法及含量的影响因素，
笔者至今尚未见有国内外文献报道。本实验采用正交试验
法对白茅根中多糖提取工艺条件进行了优选，并建立了白
茅根多糖含量测定的方法，为白茅根的进一步开发利用及
其多糖的生物活性研究奠定基础。
1 仪器与试药
1.1 仪器
日立 U－3010 型紫外可见双光束扫描分光光度计 ，
RE－52C 型旋转蒸发仪（巩义市予华仪器有限责任公司），
SHZ－D型循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂），Sar-
itorius CP225D 型电子天平；FW－80高速万能粉碎机（北京
市永光明医疗器械仪器厂）。
1.2 试药
白茅根药材（批号：20070601）产于河北省，购买于大
连同仁堂药店 ， 经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为
Rhizoma Imperatae；葡萄糖（天津市科密欧化学试剂有限公
司）为分析纯，乙醇、浓硫酸、苯酚均为分析纯（天津市凯信
化学工业有限公司）。
2 方法
2.1 白茅根多糖提取工艺的优化
2.1.1 正交试验提取白茅根多糖
将白茅根药材粉碎过 10 目筛， 准确称取白茅根粉末
500g，加入 8 倍量 95％乙醇回流脱脂 2 次，每次 2h。 将乙
醇提取后的药渣挥干至无醇味，称重，将药渣平均分成 10
等份，即每份相当于 50g白茅根药材生药量。取其中 9份，
加适量的水提取，抽滤，滤液冷却后浓缩至约 100mL。向浓
缩后的滤液加入适量的乙醇， 使乙醇的最终体积分数为
80％，4℃静置 24h。 醇沉的沉淀用布氏漏斗抽滤，40℃减压
干燥至恒重，得白茅根粗多糖。经预实验，最终确定提取温
度（A），提取时间（B），提取次数（C），料液比（D）4 个因素
为最终因素进行考察，每个因素 3 水平，选用 L9（34）正交
试验设计方案，以白茅根多糖百分含量为考察指标，确定
最佳提取条件。 因素水平见表 1。
表 1 白茅根正交试验因素水平
因素
水平
A
提取温度℃
B
提取时间 h
C
提取次数
D
料液比 m/v
1 80 1.5 1 1：8
2 90 2 2 1：10
3 100 2.5 3 1：12
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2.1.2 醇沉浓度的考察
取 4份白茅根样品 50g，分别用 8倍量乙醇脱脂 2次，
每次 2h， 药渣挥干至无醇味， 分别加入 10 倍量的水，在
100℃水浴中提取 2次，每次 2.5h，抽滤，浓缩。 浓缩液分别
用 70％、75％、80％、85％乙醇醇沉，于 4℃静置 24h。
2.2 白茅根多糖的含量测定及方法学考察
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称定 105℃干燥至恒重的葡萄糖 0.10212mg，置
于 100mL 容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容至刻度，再从中
吸取 10mL置于 100mL容量瓶中，加蒸馏水使溶解并稀释
至刻度，摇匀，即得。
2.2.2 最大吸收波长的选择
采用苯酚—硫酸比色法， 精密吸取 0.5mL 对照品溶
液，加蒸馏水至 1mL，加入 5℅苯酚溶液 1mL，迅速贴壁加
入浓硫酸 5mL，摇匀，静置 30min。 同法得空白溶液。 在紫
外分光光度计 200～600nm 波长范围内测定吸光度。 结果
表明，最大吸收波长为 488nm。
2.2.3 标准曲线的制作
精密吸取对照品试液 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8mL
于 15mL 试管中，另以水作为空白，分别加入现配置的 5％
苯酚溶液 1mL 后， 再迅速贴试管壁加入 5mL 浓硫酸，摇
匀，静置 30min，测定吸光度。 以葡萄糖对照品浓度为横坐
标，吸光度为纵坐标，根据葡萄糖溶液吸光度的实际计算
值绘制标准曲线，并建立标准曲线的回归方程。
2.2.4 精密度试验
取同一对照品溶液，分别测定 6 次，计算的吸光度值
相对标准偏差为 0.40％。
2.2.5 重复性试验
取同一样品，平行处理 6 份，测定吸光值，计算得样品
含量的相对标准偏差为 0.52％。
2.2.6 稳定性试验
取同一样品溶液，每隔 0.5h 测定一次吸光值，共测 6
次，相对标准偏差为 0.77％，表明样品在 3h 内具有良好的
稳定性。
2.2.7 回收率试验
采用加样回收法，精密称取 6 份已知多糖含量的样品
10mg，置于 100mL 容量瓶中，加入已知浓度葡萄糖对照品
溶液 20mL， 用蒸馏水定容。 分别从 6 份样品中量取 1mL
置于 15mL 刻度试管中，按上述标准曲线项下苯酚—硫酸
法分别测定吸光度，根据葡萄糖的检出量计算回收率。
2.2.8 白茅根多糖含量测定
准确称量白茅根粉末 80g， 用乙醇脱脂， 回流提取 2
次，每次 2h，药渣自然挥干至无醇味。 根据正交试验及醇
沉浓度考察， 以最佳提取条件对醇提后的白茅根进行提
取，经醇沉、减压干燥，得白茅根粗多糖。 精密称取白茅根
粗多糖 10mg，置于 100mL 容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀
释至刻度即得供试品溶液。取溶液 1mL置于 15mL刻度试
管中，按上述苯酚—硫酸比色法操作，测定吸光度，并计算
白茅根总多糖的含量。
3 结果
3.1 各因素对提取白茅根多糖的影响
经过水提、过滤，滤液进行浓缩（60℃以下）后醇沉，醇
析，离心并减压干燥至恒重，得棕黄色粗多糖。取粗多糖质
量分数为指标得正交试验结果见表 2，方差分析结果见表
3，醇沉时最佳乙醇体积分数见图 1。
表 2 正交试验结果
因素
水平
A
提取温度℃
B
提取时间 h
C
提取次数
D
料液比 m/v
试验指标
粗多糖含量%
1 1 1 1 1 0.257
2 1 2 2 2 0.361
3 1 3 3 3 0.563
4 2 1 2 3 0.492
5 2 2 3 1 0.641
6 2 3 1 2 0.623
7 3 1 3 2 0.718
8 3 2 1 3 0.508
9 3 3 2 1 0.751
K1 1.181 1.467 1.388 1.649
K2 1.756 1.510 1.604 1.702
K3 1.977 1.937 1.922 1.563
R 0.769 0.470 0.178 0.139
表 3 方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F 显著性
A 0.113 2 0.0565 37.667 *
B 0.045 2 0.0225 15.000
C 0.048 2 0.024 16.000
D 0.033 2 0.0165
注：F0.05（2，2）＝19.0。
图 1 醇沉浓度考察
由表 2、 表 3 可知，A 因素对提取工艺有显著性影响
（P＜0.05），且影响多糖得率的因素主次顺序为 A＞C＞B＞D，
各因素的最佳水平依次为 A3B3C3D2， 即最佳工艺条件为：
100℃，10 倍量的水，提取 3 次，每次 2.5h；醇沉时，乙醇体
积分数达到 80％时多糖的质量分数最高。
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3.2 葡萄糖标准曲线
葡萄糖在 20～80μg·mL－1之间与吸光值 A488有良好的
线性关系。 计算出的回归直线方程为：Y＝8.463X－0.017，r＝
0.999。
3.3 加样回收试验
计算结果见表 4。
表 4 加样回收试验结果
样品号 样品量 m/μg 加入量 m/μg 测得值 m/μg 回收率(％)
平均回收
率(％)
RSD(％)
1 47.59 20.42 67.68 98.38
2 46.88 20.42 67.53 101.13
3 49.35 20.42 68.96 96.02 98.06 2.42
4 46.75 20.42 66.32 95.84
5 47.12 20.42 66.79 96.33
6 48.32 20.42 68.87 100.64
3.4 白茅根多糖的含量
结果见表 5。
粗多糖净含量（g）＝C×N×G ／M
C 为由回归直线方程求得的浓度（mg ／ mL）；N 为稀释
倍数；G 为减压干燥所得粗多糖的质量；M 为从干燥后所
得粗多糖中称取的质量。
表 5 白茅根多糖含量测定结果
序号 吸光度 A 浓度 C（μg/mL） 含量 平均含量
1 0.418 50.33 0.79％
2 0.415 49.98 0.80％ 0.807％
3 0.451 50.91 0.83％
4 讨论
（1）多糖是一类天然大分子化合物，由 10 个以上至上
千个单糖脱水而形成的天然高分子聚合物，是构成生命的
分子基础之一。多糖易溶于水，不溶于乙醇等有机溶剂，最
常见的提取方法是水提醇沉，沉淀干燥后即为粗多糖。 大
量的药理及临床研究表明，多糖具有抗癌、增强免疫力等
功效 ［4］，对于预防和治疗包括癌症在内的多种疾病都具有
巨大的潜力。 因此多糖的研究成为了关注的焦点，促进了
多糖研究的进展。
（2）提取条件的优选。 本实验采取 4 因素 3 水平正交
试验方案，对白茅根多糖的提取条件进行了优化。 由正交
试验的直观分析及方差分析结果可知，在该多糖提取中温
度是最主要的影响因素，具有显著性差异，其次为提取次
数、提取时间、料液比，影响均不显著。因此，在提取白茅根
多糖时应注意控制提取温度。本实验同时又考察了醇沉浓
度，结果表明多糖在 80％乙醇中的溶解度最小。 该工艺条
件简单，稳定可行，为有效开发利用白茅根多糖奠定了基
础。
（3）含量测定。 采用苯酚—硫酸法测定白茅根多糖的
含量，通过 95％乙醇脱脂去除单糖、低聚糖等醇溶性成分，
再以 80％乙醇醇沉分离多糖成分。通过稳定性实验和加样
回收率实验可知，本法所测定白茅根多糖的含量，简单可
靠，重复性好，显色稳定。实验结果表明白茅根中多糖的含
量为 0.807％。
综上所述，白茅根多糖尚待进一步研究，通过基础的
最佳提取方法确定和含量测定，为进一步研究多糖的纯化
方法及药理活性奠定基础。
参考文献：
［1］ 黄泰康．现代本草纲目［M］．北京：中国医药科技出版社，2001：
828-829．
［2］ 吕世静，黄槐莲，袁汉尧，等．白茅根多糖对人T淋巴细胞免疫调
节效应的研究［J］．中国新药杂志，2004，13（9）：834-835．
［3］ 吕世辞， 黄槐莲． 白茅根对IL-2和T细胞亚群变化的调节作用
［J］．中国中药杂志，1996，21（8）：488-489．
［4］ 张作法，金洁，时连根．桑枝多糖的含量测定方法［J］．中国中药
杂志，2008，33（4）：462-464．
（责任编辑：姜付平）
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