全 文 ：时 ,发生同型半胱氨酸代谢障碍 ,则引起血中同型半
胱氨酸水平升高;补充叶酸则能降低血中同型半胱
氨酸水平。本实验发现 ,大蒜素降低血清同型半胱
氨酸水平较补充叶酸更为显著 ,大蒜素能明显改善
高同型半胱氨酸血症大鼠的自由基代谢 ,而补充叶
酸无此作用 ,提示大蒜素有更多的药理作用 ,在防治
高同型半胱氨酸方面优于单纯补充叶酸。
参考文献:
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[ 收稿日期] 2010-04-14
[ 基金项目] 国家自然科学基金项目(编号:30960503);贵州省科学技术基金(编号:黔科合丁字[ 2008] 2143 号)　[ 作者简介] 韦欣, 男 ,硕士 ,
讲师 ,电话:13765143453 , E-mail:w eixingmc@163.com 　[ 通讯作者] 董立莎 ,女,教授 ,电话:18984079597 , E-mai l:dlsh a1216@yahoo.cn
贵州产菝葜属及肖菝葜属的植物中白藜芦醇分析及镇痛作用的比较
韦欣1 ,任广聪2 ,曲国玉2 ,董凯旋2 ,董立莎2 　(1.贵阳医学院 ,贵州 贵阳 550002;2.贵阳中医学院 , 贵州 贵阳 550002)
[ 摘要] 　目的:采用薄层色谱(TLC)法及高效液相色谱(HPLC)法分析贵州产菝葜属(Smilax L.)、肖菝葜属(Heterosmi la x
K.)8个品种中的活性成分 ———白藜芦醇 ,并通过对 8 个品种间镇痛试验的对比研究 , 对品种间进行药效与质量的评价。方
法:TLC 法用硅胶 G 板 ,以氯仿-丙酮-醋酸-水(4∶4∶0.5∶0.2)为展开剂定性分析。用 HPLC 法分析白藜芦醇 ,色谱条件:依利
特 H ypersil ODS2 色谱柱(4.6 mm×250 mm , 5 μm),流动相为乙腈-0.05%磷酸(24∶76);流速 0.8 m L·min-1 ;检测波长 306
nm ,理论塔板数以白藜芦醇计不得低于4 000。用冰醋酸所致小鼠扭体影响进行镇痛试验。结果:在 TLC 鉴别中 , 8 个品种均
含有白藜芦醇;在选定的色谱条件下 ,白藜芦醇在0.006 2～ 0.200 4μg 范围内与峰面积呈良好线性关系。加样回收率(n=9)
为101.07%, RSD 为1.13%。 8个品种中白藜芦醇含量为0.006 0%～ 0.043 9%,其中以小叶菝葜含量最高。通过镇痛试验 ,
显示 8 个品种均有明显镇痛作用 , 且在相同有效剂量下 , 8 个品种间没有明显差异。结论:本法的 TLC 法重复性好 , 专属性
强;含量测定方法简单易行 ,准确度高 , 可为菝葜属及肖菝葜属新的药用资源开发利用及质量控制提供参考依据。
[ 关键词] 　白藜芦醇;菝葜属;肖菝葜属;薄层色谱法;高效液相色谱法;镇痛试验
[ 中图分类号] R285.6 　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2011)03-0224-03
Research of resveratrol and its analgesic effect compared between plants from Smilax and Heter-
osmilax native in Guizhou province
WEI Xin1 , REN Guang-cong 2 , QU Guo-yu2 , DONG Kai-xuan2 , DONG Li-sha(1.Guiyang Medical Colleg e,
Guizhou Guiy ang 550002 , China;2.Guiyang Colleg e of T r aditional Chinese Medicine , Guizhou Guiyang 550002 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　Established TLC and RP-H PLC methods to analy ze the the active constituents resver atro l contained
in 8 variety fr om S mi la x L.and Heterosmilax K.in Guizhou province.Through out Analge sic experiments to evaluate the an-
alg esic effect and quality between 8 va rietie s.METHODS　The TLC qualita tive analy sis car ried out w ith silica g el G pla te and
with the CHCl3-CH3COCH 3-CH3COOH-H2O(4∶4∶0.5∶0.2)as the developing so lvent.Resvera trol w as dete rmined by RP-
H PLC method , co lumn:elite Hyper sil ODS2(5μm , 4.6×250 mm), mobile pha se:CH 3CN-0.05% H3PO 4(24∶76);flow rate:0.8
·224· 中国医院药学杂志 2011年第 31卷第 3期 Chin H osp Ph arm J , 2011 Feb , Vol 31 , No.03
mL·min-1 ;detection w aveleng th:306 nm , The theo retical pla te number of re sve ratro l canno t be less than 4 , 000.Acetic acid-in-
duced w rithing test analge sic effects.RESULTS　In the TLC identification , 8 varie ties contain resv erat rol;in the selected chro-
matog raphic condition , the r esv eratr ol show ed good linear relationships with the peak area in the r ange of 6.3 - 200.4 μg.The
recovery ra te o f resvera tro l (n = 9) was 101.07%, RSD = 1.13%.8 species re sv eratr ol content r ange was 0.006 0%-
0.043 9%, o f which the highe st content w as S .microphy lla.Through analgesic study , all o f the 8 va rietie s had significant anal-
gesic effects , and ther e was no significant diffe rence among varieties at the same effective dose.CONCLUSION　The TLC
method in this study is high accuracy and reproducible and the RP-H PLC method is simple , specific , they can pro vide some ref-
erence fo r new medicinal resources development and quality contro l o f Smila x and Heterosmi la x plants.
KEY WORDS:resv erat rol;S mila x;Heterosmilax;TLC;RP-H PLC;analg esic test
　　百合科菝葜属(Sm ilax L.)及肖菝葜属(Het-
erosmilax K.)中多种药用植物的根及根茎在贵州
省均为苗族民间用药 ,蕴藏量较大[ 1] 。本类植物中
活性成分之一的白藜芦醇具有明显抗炎 、镇痛作用 ,
近年研究表明白藜芦醇还具有多种生物活性 ,如抗
癌 、抗血小板聚集 、保护肝脏等[ 2-3] 。但本类品种在
应用上多样化 ,研究基础也较薄弱[ 4] ,尤其是贵州产
的 8种常用药用植物的研究未见相关报道 。本实验
以该类药用植物中活性成分白藜芦醇为指标 ,对其
8个品种中白藜芦醇的有无及含量进行分析研究 ,
并通过镇痛试验为主要药效指标来进行相关的评
价 。
1　材料
美国惠普 Agilent 1100高效液相色谱仪:四元
泵 、在线脱气机 、柱温箱 、自动进样器 、G1315B DAD
检测器(美国 Ag ilent公司);依利特 Hypersil ODS2
色谱柱(4.6 mm×250 mm , 5 μm),大连依利特分
析仪器有限公司;SK8310LHC 型恒温超声波提取
器(500W , 50/60 Hz , 上海科导超声仪器有限公
司);紫外分析仪(WD-9403C 型 ,北京市六一仪器
厂);薄层照相系统(CAMAG REPROSTA R 3)。
阿司匹林肠溶片(规格:每片 50 mg ,江苏平光制药
有限责任公司 ,批号 081009);白藜芦醇对照品(中
国药品生物制品鉴定所 , 批号 111535-200502;菝
葜属及肖菝葜属 8种药用植物全株由作者在贵州各
地采集 ,并经贵阳中医学院药学系生药教研室董立
莎教授鉴定为小叶菝葜(S .microphy lla)、黑叶菝葜
(S .nigrescens)、短梗菝葜(S .scobinincaulis)、菝葜
(S .china)、托柄菝葜(S.discotis)、光叶菝葜(土茯
苓 S .g labra)、柔毛菝葜(S.chingi i)及短柱肖菝葜
(H.yunnanensis), 除去地上部分后 ,根茎及根洗
净 ,切片 ,阴干备用;试剂均为分析纯;硅胶 G 板(青
岛海洋化工厂 ,规格:20 mm×20 cm);水为纯化水;
昆明种小鼠 ,一级 , 6 ～ 8周龄 ,体质量(20.0±2.0)
g , ♀♂各半[贵阳医学院实验动物中心 ,动物质量合
格证:SCXK(黔)2008-0001] 。
2　方法
2.1　薄层鉴别
2.1.1　对照品制备　精密称取白藜芦醇 5 mg 于
10 mL 量瓶中 ,用甲醇定容 ,配制0.50 g· L -1的对
照品溶液。
2.1.2　供试品溶液制备　分别精密称取 8 个品种
的根茎及根(过 24目筛)粗粉各 1 g ,于 25 mL 量瓶
中 ,加甲醇 20 mL ,超声(频率 59 kHz ,功率 500 W)
提取 20 min ,放冷 ,过滤 ,滤液浓缩至 1 mL 作为供
试品溶液(生药浓度为 1 g·mL-1)。
2.1.3　薄层色谱条件　对照品溶液点样量为 4
μL , 样品溶液为 10 μL ,分别点于同一硅胶 G 薄层
板上 ,以氯仿-丙酮-醋酸-水(4∶4∶0.5∶0.2)为展开
剂 ,上行展开 15 cm ,取出 ,晾干 ,在 365 nm 紫外灯
下观察荧光斑点 。结果 ,各样品在与对照品相应的
位置上出现相同亮蓝色斑点 ,表明贵州产 8 个品种
中均含有白藜芦醇。
2.2　高效液相色谱法测定
2.2.1　色谱条件与系统适应性试验　依利特 Hy-
persil ODS2 色谱柱(4.6 mm ×250 mm , 5 μm),流
动相:乙腈-0.05%磷酸(24∶76), 流速:0.8 mL·
min-1 ,检测波长:306 nm ,柱温 30℃, 进样量:10
μL ,采集时间:20 min ,理论踏板数以白藜芦醇峰面
积计不得低于4 000 ,在此条件下 ,供试品(生药浓度
0.02 g·mL-1)中白藜芦醇峰能与其他组份达到完
全基线分离 ,分离度大于1.5 ,且峰形较好 。结果见
图 1。
2.2.2　对照品溶液制备　精密称取白藜芦醇对照
品10.02 mg 于 10 mL 量瓶中 ,加乙腈溶解并定容 ,
配制成1.002 g·L-1的对照品溶液。
2.2.3　供试品溶液制备　分别精密称取菝葜类上
述“2.1.2”项下药材粗粉各0.5 g ,于 25 mL 量瓶中 ,
加甲醇 20 mL ,超声(频率 59 kHz ,功率 500 W)提
取 20 min ,放冷 ,定容至刻度线 ,摇匀滤过 ,滤液过
0.45 μm 微孔滤膜作为供试品溶液(生药浓度0.02
g·mL-1)。
·225·中国医院药学杂志 2011年第 31卷第 3期 C hin Hosp Pharm J , 2011 Feb , Vol 31 , No.03
图 1　白藜芦醇高效液相色谱图
a.对照品;b.菝葜;c.小叶菝葜;1-白藜芦醇
Fig 1　Resverat rol HPLC chart
a.reference subs tance;b.Smi lax;c.S.microph yl la;1- res verat rol
2.2.4　线性范围考察　分别精密移取白藜芦醇标准
品母液(1.002 g·L-1)0.5 mL于 20 mL 量瓶中 ,加乙
腈定容至刻度线 ,配制成质量浓度为0.0250 g·L-1的
储备液 ,精密吸取0.0250 g·L-1的对照品储备液各
0.25 ,0.5 ,1.0 ,2.0 ,4.0 ,8.0 mL 于 10 mL 量瓶中 ,加
乙腈定容至刻度线 , 得到 0.63 , 1.25 , 2.50 , 5.01 ,
10.20 ,20.04 mg·L-1一系列浓度的对照品溶液 ,分别
吸取对照品溶液各 10 μL ,注入液相色谱仪 ,记录色
谱 ,以对照品量 C(μg)对峰面积 A进行线性回归 ,得
线性回归方程:C=1.234 5×10-5 A+0.009 8(r=
0.999 9),结果表明:白藜芦醇进样量在 0.006 3 ～
0.200 4 μg 范围内与峰面积有良好的线性关系。
2.2.5　精密度试验　精密吸取供试品溶液制备项
下的土茯苓样品溶液(生药浓度0.02 g·mL-1)10
μL ,重复进样 6次 ,白藜芦醇峰面积值的 RSD 为
0.953 5%(n=6),结果表明 ,本方法精密度良好。
2.2.6　重复性试验　精密称取土茯苓过 24目筛的
粗粉各 6份 ,按“2.2.3”项下方法制备 。分别吸取上
述各溶液 10 μL 进样 ,结果 , RSD为2.02%(n=6),
故重复性良好 。
2.2.7　稳定性试验　取上述供试品溶液 10 μL ,分
别在 0 ,1 , 2 , 3 , 4 , 5 ,6 ,7 , 8 h 进样 ,测得白藜芦醇含
量的 RSD为1.75%(n=9),表明供试品溶液在 8 h
内稳定 。
2.2.8　加样回收率试验　精密称取稳定性试验样
品(土茯苓药材中白藜芦醇含量0.004 5%)9 份于
25 mL 量瓶中 ,加甲醇 20 mL ,其中 1 ～ 3份加入相
当于样品含量的 80%对照品 , 4 ～ 6份加入相当于样
品含量 100%的对照品 , 7 ～ 9份加入相当于样品含
量 120%的对照品。按“2.2.3”项下方法制备。记
录色谱 。结果 ,白藜芦醇平均加样回收率(n=9)为
101.07%, RSD为1.12%。
2.2.9　样品含量测定　按“2.2.3”项下方法 ,每个
样品平行制备 2 份供试品溶液。在上述色谱条件
下 ,分别精密吸取对照品溶液(0.010 0 g·L-1)与供
试品溶液各 10 μL ,注入液相色谱仪 ,测定峰面积 ,
按外标一点法计算含量。结果见表 1 。
表 1　贵州产 8个品种中白藜芦醇的含量(n=4)
Tab 1　Resver atro l content of 8 species in Guizhou(n=4)
品种来源 产地 白藜芦醇含量/ %
小叶菝葜(S.microph yl la) 贵州平坝 0.043 9
黑叶菝葜(S.nig rescens) 贵州贵定 0.043 7
短梗菝葜(S.scobinincaul is) 贵州贵阳 0.028 6
菝葜(S.ch ina) 贵州安龙 0.010 6
托柄菝葜(S.discoti s) 贵州大方 0.009 6
土茯苓(S.g labra) 贵阳清镇 0.006 4
柔毛菝葜(S.ch ing ii) 贵阳水田 0.006 0
短柱肖菝葜(H.yunnanensis) 贵州兴义 0.0038 2
注:上述品种已测定水分 ,均以干燥品计算
2.3　小鼠扭体法镇痛试验
2.3.1　受试药物　8个品种根茎及根的 70%乙醇
提取浸膏粉 。实验前分别精密称取 8个品种的浸膏
粉2.5 g , 加0.2 mL 聚山梨酯 80 作为助溶剂 ,酌加
少量纯化水研磨溶解后 ,加纯化水稀释配制成生药
浓度0.25 g·mL -1的混悬液 。
2.3.2　阳性对照药物　实验前将阿司匹林肠溶片
捣碎 、酌加少量纯化水研磨溶解后 ,加量适纯化水稀
释制备成为一定浓度的混悬液供用 。
2.3.3　分组及药物剂量　取昆明种小鼠 140只 , ♀
♂各半 ,分别称量后用苦味酸标记小鼠 ,再按随机分
组的原则 ,将其平均分为 10组 ,分别作为空白对照
(生理盐水)组 、阿司匹林组 、菝葜组 、土茯苓组 、柔毛
菝葜组 、托柄菝葜组 、短梗菝葜组 、小叶菝葜组 、黑叶
菝葜组及肖菝葜组 ,每组 14 只 。每天灌喂给药一
次 ,连续 5 d ,给药体积0.2 mL·(10g)-1 。
2.3.4　小鼠扭体反应测定[ 5] 　末次给药后 1 h ,各
组小鼠再腹腔注射0.7%冰醋酸溶液0.2 mL/只 ,观
察 15 min 内(从第 1次扭体开始计时)出现扭体反
应的次数。
2.3.5　镇痛百分率计算公式　镇痛百分率(%)=
[(空白对照组扭体反应次数-空白给药组扭体反应
次数)/空白对照组扭体反应次数] ×100%
2.3.6　统计学处理　数据采用 SPSS10.0 for Win-
dow s统计分析软件分析处理 ,数据采用 x ±s表示 ,
2组之间的比较用 Dunnet t t 检验 。
2.4　试验结果　结果见表 2。
3　讨论
本研究以超声提取时间(10 ,20 , 30 , 40 min)对
白藜芦醇含量是否有影响进行了考察 ,结果超声提
取 20 min白藜芦醇的含量最高 ,提取 20 min 作为
最佳提取时间。
(下转第 260页)
·226· 中国医院药学杂志 2011年第 31卷第 3期 Chin H osp Ph arm J , 2011 Feb , Vol 31 , No.03
　　从不同年龄段分析 362 例报告资料中 ADR发生率 , 患
者在 50 岁以上的有 186 例 , 占总数的 51.38%。由此可见 ,
老年患者为 ADR易发人群 , 可能原因在于老年患者肝肾及
其他组织器官生理功能减退等。同时研究表明我院引起
ADR的给药途径以静脉注射最为常见 , 这与其他医院的报
道一致[ 2] 。由于静脉注射液的 pH 值 、渗透压 、微粒 、内毒素
等均可能引发 ADR , 因此建议临床用药时应注意选择合适
的给药方式 , 减少静脉用药的机会以降低 ADR 发生率。从
ADR的临床表现来看 ,以皮肤及其附件损害最常见 ,占总数
的40.61%, 临床表现为各种药疹和皮肤瘙痒 , 属于变态反
应。这可能与下述两个原因有关:(1)皮肤反应的临床表现
易于观察和诊断;(2)药疹是变态反应所致 , 目前临床上的一
些常用药物如抗感染药 、解热镇痛药 、中药制剂 、生物制品等
均具有较强的抗原性 , 易引起变态反应[3] 。
本调查涉及的 18 类药品中抗感染药所致 ADR占首位 ,
构成比达21.82%。这与本院喹诺酮类和头孢菌素类抗感染
药物的广泛大量使用有关。由于在应用抗感染药物中存在
无明显指征用药 、预防用药 、联合用药 、用药剂量过大 、疗程
过长等问题 , 因此易造成抗感染药的临床滥用。在抗感染药
所致的 ADR中以喹诺酮类抗生素最多 , 因为该类抗菌药物
抗菌谱广 、无需做皮试 、使用方便 , 故在临床上广泛应用。中
药制剂所致 ADR仅次于抗感染药和抗肿瘤药 , 占总例数的
10.77%。这可能与以下因素[ 5] 有关:(1)中药成分比较复
杂 , 中药制剂质量标准可控性差;(2)中药复方制剂含有的杂
质及抗原 、半抗原易引起过敏反应 、热原反应等。
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[ 收稿日期] 2010-06-12
(上接第 226页)
表 2　对醋酸引起的扭体反应的影响( x±s , n=14)
Tab 2　Acetic acid induced w rithing r eac tion( x±s , n=14)
组别 剂量(g·kg -1)/生药
扭体次数
/次·(15 min)-1
镇痛百分率
/%
空白对照 21.4±10.2
阿司匹林 0.5 6.3±8.4a 70.57
柔毛菝葜 5 13.1±9.7ab 38.80
黑叶菝葜 5 14.4±6.4ab 38.80
菝葜 5 13.6±12.4ab 36.45
托柄菝葜 5 13.6±12.1ab 36.45
短梗菝葜 5 13.8±11.5ab 35.45
土茯苓 5 14.1±10.9ab 33.78
小叶菝葜 5 14.5±10.7ab 32.78
短柱肖菝葜 5 13.1±7.7ab 32.11
注:与对照组比较 , aP<0.05;与菝葜组比较 , bP>0.05
　　在色谱条件的选择中 , 分别考察了甲醇-水 、甲醇-0.05%
磷酸水溶液梯度洗脱 、乙腈-水 、乙腈-0.05%磷酸水溶液等度
洗脱及梯度洗脱 4 个溶剂系统及不同的比例 , 结果 ,以乙腈-
0.05%磷酸水溶液(24∶76)为流动相 , 所得色谱峰形较好 , 分
离效果最佳。
在对不同品牌色谱柱的选择中 ,依利特 Hype rsil ODS2
色谱柱对白藜芦醇的分离度较好。
通过 TLC 法鉴别 , 贵州产菝葜属及肖菝葜属 8 个品种
的根茎及根均含有白藜芦醇 , 在 H PLC 法中也检测到 8 个品
种均含有白藜芦醇 , 且肖菝葜属中短柱肖菝葜中白藜芦醇的
含量最低为0.003 9%, 而菝葜属中小叶菝葜的白藜芦醇含
量相对较高为0.043 9%。所以不同品种间白藜芦醇的含量
有较大差异。此为该类新的药用资源开发及质量控制提供
了参考依据。镇痛试验的研究表明:菝葜属及肖菝葜属 8 个
品种均具有明显的镇痛作用 , 且在相同的有效剂量下 , 8 个品
种间没有明显差异。由此可见 , 8 个品种中白藜芦醇的含量
高低与镇痛作用的强弱不呈正相关 , 说明本类药物的镇痛作
用可能是各品种中多种化学成分多靶点共同作用的结果 , 品
种间其他活性成分含量及其他药效有否关联性尚待进一步
研究。
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[ 收稿日期] 2009-12-28
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