全 文 ：华西药学杂志
W C J P S　2007, 22(2):212 ～ 214 　　
作者简介:李文霞(1982 -),女 , 山东临沂 ,正攻读天然药物化学专业的硕士学位。
*通讯作者(Correspondent author)
柱色谱 -分光光度法测定菝葜中总黄酮的含量
李文霞 1 , 颜　彦 2 ,陈忠光 2 ,从仁怀 2 ,叶晓川2* ,杨祥良 2
(1.华中科技大学化学系 , 湖北 武汉 430074;2. 华中科技大学生命科学与技术学院 , 湖北 武汉 430074)
摘要:目的　建立测定菝葜中总黄酮含量的方法。方法　测定波长 500 nm ,以芦丁为对照品 ,采用柱色谱 -分光光度法测定
不同产地菝葜中总黄酮的含量。结果　芦丁在 8. 02 ～ 48. 12 μg m l- 1范围内线性关系良好 ( r=0. 9996), 平均回收率为
96.70%, RSD =1. 24%。结论　所建方法操作简便 、结果准确 、重复性好 , 可用于药材的质量控制。
关键词:菝葜;总黄酮;含量测定;柱色谱 -分光光度法
中图分类号:R927　 　文献标识码:A　 　文章编号:1006 -0103(2007)02 - 0212 - 03
Determ ination of tota l flavones in Sm ilax China L. from d ifferent hab itats by column chro-
matogram - spectrophotom etry
LIWen - x ia
1 , YAN Yan2 , CHEN Zhong - guang2 , CONG Ren - hua i2 , YE X iao - chuan2* , YANG X iang - liang2
(1. D epartm ent of Chem istry, Huazhong University of S cience and Technology, Wuhan 430074, China;2. College of L ife S cience and
Technology, Huazhong Un iversity of Science and Technology, Wuhan 430074, China)
Abstrac t:OBJECTIVE　To estab lish am ethod for the de te rm ina tion of to tal flavones in Sm ilax China L. METHODS　The conten t
o f to ta l flavones in Sm ilax ch ina L. w as de term ined at 500 nm by co lum n chrom atogram - spectropho tom e try w ith rutin as standard con-
tro.l RESULTS　Ru tin showed a good linea r curve in the range of 8. 02 - 48. 12 μg m l- 1(r=0. 9996) . The recovery of to tal fla-
vone s wa s 96. 70% w ith RSD o f 1. 24%. CONCLUSION　Them e thod is simp le, rap id and accu ra te. It can be used fo r de term ining
the content of tota l flavone s in Sm ilax Ch ina L. .
K ey words:Sm ilax China L. ;To ta l flavone s;Quantita tive de te rm ina tion;Co lum n ch rom a tog ram - spec tropho tome try
CLC num ber:R917　 D ocum ent code:A Artic le ID:1006 - 0103(2007)02 -0212 - 03
　　中药菝葜为百合科植物菝葜 Sm ilax China L.的
根茎 ,具有消肿止痛 、祛风利湿 、活血化淤及抗肿瘤
等作用 [ 1 ～ 3] 。本属植物含有皂苷类 、黄酮类 、甾醇类
和一些烯 、醇 、酚 、酸 、酯 、酮 、砜等成分 [ 3] ,其中黄酮
类主要有槲皮素 4′-O - β -D -葡萄糖苷 、二氢山
柰酚等 。菝葜中含有较多的黄酮类化合物 ,有关菝
葜中总黄酮的含量测定方法尚未见报道。现采用柱
色谱 -分光光度法测定了不同产地菝葜中总黄酮的
含量 ,为菝葜原药材的质量控制提供了依据。
1　实验部分
1. 1　仪器与试药
UV - 2102 PC型紫外可见分光光度计 (尤尼柯
上海有限公司);超声振荡仪 (昆山超声仪器有限公
司 )。 9种不同产地的菝葜药材(湖北中医学院及湖
北福人药业股份有限公司 );柱层析用聚酰胺 (60 ～
80目 );芦丁对照品 (中国药品生物制品检定所);其
余试剂均为分析纯。
1. 2　方法与结果
1. 2. 1　测定波长的确定　取对照品和供试品溶液
各 2m l,分别置 25 m l量瓶中 ,定容 ,摇匀后分别于
200 ～ 700 nm扫描 ,两种溶液在 500 nm 处无吸收
峰。另取对照品和供试品溶液各 2 m l, 显色后在
200 ～ 700 nm 处用紫外 -可见分光光度计扫描 ,结
果发现在 500 nm处有较强吸收峰。另取 2 m l蒸馏
水代替对照品 ,同法显色后作为阴性对照溶液 ,在
200 ～ 700 nm扫描 ,溶液在 500 nm处无吸收峰 ,不
影响测定 ,故选择测定波长为 500 nm。
1. 2. 2　标准曲线的绘制　精密称取 P2O 5干燥 24 h
的芦丁对照品 20. 05 mg,置 100 m l量瓶中 , 加入
70%乙醇 50 m l, 置温水中加热使溶解 , 放冷 , 加
70%乙醇定容 ,摇匀 ,即得 200. 5 μg m l-1对照品溶
液。精密吸取对照品溶液 1、2、3、4、5、6m l,置 25m l
量瓶中 ,分别加蒸馏水至 6 m l,加入 5%亚硝酸钠 1
m l,摇匀 ,放置 6m in;加入 10%硝酸铝 1 m l,摇匀 ,
放置 6 m in;加入 4%氢氧化钠 10 m l,加水定容 ,摇
匀 ,放置 15 m in, 500 nm 测吸光度。以吸光度为纵
DOI牶牨牥牣牨牫牫牱牭牤j牣cnki牣wcjps牣牪牥牥牱牣牥牪牣牥牫牳
坐标 、浓度为横坐标绘制标准曲线 , 回归方程为:
Y =11.006X - 0. 006(r=0. 9996)。在 8. 02 ～ 48. 12
μg m l-1范围内 ,浓度与吸光度间具有良好线性 。
1. 2. 3　药材的提取　取菝葜粉末 (过三号筛 )2 g,
精密称定 ,置 100m l烧瓶中 , 精密加入甲醇 50 m l,
密塞 ,称重 ,水浴回流提取 2 h,取出 ,放冷 ,再称重 ,
以甲醇补足损失的重量 ,摇匀 ,过滤 ,取续滤液备用 。
1. 2. 4　聚酰胺用量比例的考察　精密吸取 “1. 2.
3”项下溶液 2m l,分别加入 0. 25 、0. 50、1. 00 g聚酰
胺中 ,于 60℃挥干溶剂 ,加至聚酰胺柱上 (分别为
1.75、1. 5、1. 0 g,内径 1. 5 cm ,湿法装柱),以 100m l
70%乙醇洗脱 ,洗脱液水浴挥干 ,用 70%乙醇溶解
并转移至 10m l量瓶中 ,按 “ 1. 2. 2”项下方法操作 ,
测定吸光度 ,计算总黄酮的含量 。结果表明:不同的
聚酰胺用量对菝葜中的总黄酮含量测定影响较小 ,
考虑实际操作的方便 ,选取 0.5：1.5进行实验。
1. 2. 5　洗脱溶媒的选择 　精密吸取 “ 1. 2. 3”项下
溶液 2m l,加入 0. 5 g聚酰胺中 ,于 60℃挥干溶剂 ,
加至聚酰胺柱 (1.5 g,内径 1. 5 cm ,湿法装柱 )上 ,
分别以 30%、50%、70%、95%乙醇及甲醇各 100 m l
洗脱 ,洗脱液水浴挥干 ,分别用 70%乙醇溶解并转
移至 10m l量瓶中。按 “1. 2. 2”项下方法操作 ,测定
吸光度 ,计算总黄酮的含量 (图 1)。结果表明 ,不同
的洗脱溶媒对菝葜中总黄酮的含量测定影响较大 ,
考虑其洗脱效果 ,选取 70%乙醇为最佳洗脱溶媒 。
图 1　洗脱溶媒的选择
F ig 1　The effects of differen t developing solutions
1. 2. 6　供试品溶液的制备　精密吸取 “ 1. 2. 3”项
下溶液 2 m l加入 0. 5 g聚酰胺中 ,于 60℃挥干溶
剂 ,加至聚酰胺柱 (1. 5 g,内径 1. 5 cm ,湿法装柱 )
上 ,以 100 m l 70%乙醇洗脱 ,洗脱液水浴挥干 , 70%
乙醇溶解并转至 10 m l量瓶中 ,即得供试品溶液。
1. 2. 7　精密度试验　精密吸取 2 m l供试品溶液 ,
按 “1. 2. 2”项下方法操作 ,连续测定 6次 ,测定吸光
度 , RSD =0. 58%(n=6),表明仪器的精密度良好 。
1. 2. 8　稳定性试验　取同一供试品溶液 ,按 “ 1. 2.
2”项下方法操作 ,分别在 0、5、10、15、20、25、30、35、
40、60、90、120m in测定其吸光度。显色后溶液吸光
度在 15 ～ 30m in时变化较小 , RSD =3.84%。因此
溶液应在显色后 15 ～ 30m in测定 。
1. 2. 9　重复性试验　取同一批菝葜粉末 6份 ,按
“1. 2. 3”“1. 2. 6”项下方法制备供试溶液 ,按 “1. 2.
2”项下方法测定含量。测得总黄酮的平均含量为
2. 21%, RSD =2. 59%(n =6),表明方法重复性良
好。
1. 2. 10　回收率试验　精密称取已测知含量的菝葜
粉末 9份 ,分别精密加入 10. 003 mg m l- 1的对照品
溶液 0. 5、1. 0、2 . 0m l,按 “1.2.3”及 “1.2.6”项下方
法制备供试品溶液 , 按 “1. 2. 2”项下方法测定含量 ,
并计算其回收率 。平均回收率为 96. 70%, RSD =
1.24%(n=9)。
1. 2. 11　不同产地样品的测定　对 9种来自不同产
地的样品进行了测定 ,结果见表 1。
表 1　不同产地菝葜药材中总黄酮的含量测定结果
Tab le 1　To tal flavones o fSm ilax China L. co llected from d ifferent
hab ita ts
H ab itat Total flavones /%
H ubei Tongch eng(GAP bases) 2. 22
H ubei Tongch eng(GAP bases, one year) 0. 71
An’ hu i Fen tian shan 0. 69
Fu jian X ianyou 2. 32
G uangdong Conghua 2. 07
Jiangxi Jiu jiang 1. 69
G uangxi B inyang 2. 63
ZhejiangW enzhou 1. 83
Chongq ing 1. 77
2　讨论
曾对提取方法和提取溶媒分别进行了考察。结
果表明 ,回流提取法比超声提取法提取效率高 ,甲醇
比 30%、50%、70%、95%乙醇的提取效率高 ,故以
甲醇为提取溶媒 ,回流提取法提取菝葜中的总黄酮。
实验还考察了洗脱溶媒的用量 ,结果表明以 70%乙
醇 100m l洗脱后 ,再加 30m l洗脱 ,已检测不到总黄
酮 ,故洗脱溶媒的用量为 100m l。
　　黄酮类化合物含量测定方法有比色法 、紫外分
光法等。很多药材中总黄酮的含量测定均直接以
NaNO2 -A l(NO3)3 -N aOH为显色剂测定提取液。
文献 [ 4]选择了一些黄酮类成分和非黄酮类成分 ,在
400 ～ 700 nm范围扫描测定 ,结果表明 ,有些黄酮类
物质在 500 nm处无最大吸收或吸收很弱 ,而有些非
黄酮类物质在 500 nm处有最大吸收或有较强吸收。
因此 ,总黄酮含量测定常出现假阳性现象 ,即药材总
黄酮含量测定值偏高。文中采用聚酰胺对药材样品
液进行除杂处理后 ,能有效地去除样品液中非黄酮
213第 2期 李文霞 , 等。柱色谱 -分光光度法测定菝葜中总黄酮的含量 　　　
华西药学杂志
W C J P S　2007, 22(2):214 ～ 215 　　
类成分的干扰 ,从而使测定结果更为准确 。
文中测定了中国 9个不同产地菝葜中总黄酮的
含量 ,由于产地和采集年限不同 ,差异较大 。广西宾
阳 、福建仙游 、湖北通城 GAP种植基地及广东从化
县江浦镇的样品具有较高的总黄酮含量 ,均达 2%
以上;浙江温州上塘镇 、重庆马脚令山及江西九江都
昌蔡岭镇的样品总黄酮含量相近;安徽坟天山的样
品总黄酮含量最低 ,不足 1%。可能与药材产地有
关 ,其产地不同次生代谢物累积量不同。菝葜的采
收年限一般在 5年以上 ,湖北通城 GAP种植基地的
两份样品总黄酮含量差异很大 ,可能是因为其中一
份样品未达采收年限 (1年生 ),根茎较细 ,次生代谢
物累积量较少 。
参考文献:
[ 1] 　 王学江 ,文朝阳 ,丰平 ,等.复方菝葜的抑瘤机理 [ J] . 中国病
理生理杂志 , 1996, 12(4):614 - 615.
[ 2] 　 张玉良 ,陈华庭 ,彭方林, 等.三种提取物对小白鼠角叉菜胶
型关节炎的抗炎作用比较 [ J] .新兴医药 , 1996, 1(6):242 -
243.
[ 3] 　 肖晶 ,魏峰 ,林瑞超. 菝葜属植物的研究进展 [ J] .中国药学
杂志 , 2001, 36(6):297 - 299.
[ 4] 　 郭亚健 ,范莉 , 王晓强 ,等. 关于 N aNO 2 -A l(NO 3)3 - NaOH
比色法测定总黄酮方法的探讨 [ J] . 药物分析杂志 , 2002, 22
(2):97 - 99.
收稿日期:2006 - 08
作者简介:刘冬凌 ,女 ,河南开封 ,主管药师 ,从事医院制剂 、药品检验工作。
*通讯作者(Correspondent author)
HPLC测定速效止泻胶囊中没食子酸的含量
刘冬凌 1 ,胡　波 2 ,熊文碧3*
(1.遂宁市中医院 , 四川 遂宁 629000;2. 四川大学华西药学院 , 四川 成都 610041;3. 四川大学华西基础医学与法医学院 ,
四川 成都 610041)
摘要:目的　建立测定速效止泻胶囊中没食子酸含量的方法。方法　采用 HPLC法。色谱柱为 C
18
;流动相为甲醇 -乙腈 -
0. 1%磷酸溶液(5：6：89);检测波长 270 nm。结果　没食子酸在 0. 1008 ～ 5. 0400μg范围内与峰面积呈很好的线性关系 ,平
均回收率为 99. 41%, RSD =0. 57%(n =6)。结论　所建方法结果准确 、操作简便 ,可用于控制速效止泻胶囊的质量。
关键词:速效止泻胶囊;拳参;没食子酸;高效液相色谱法
中图分类号:R917　 　文献标识码:A　 　文章编号:1006 -0103(2007)02 - 0214 - 02
Determ ination of gallic ac id in Sux iao Zh ix ie capsules byRP -HPLC
LIU Dong - ling
1 , HU Bo2 , XIONG Wen -b i3*
(1. Suining Hospital of T rad itiona l Ch ineseMed icine, Suin ing 629000, China;2. W est China School ofPharmacy, S ichuan University,
Chengdu 610041, Ch ina;3. W est Ch ina School of Preclinica lM edicine and ForensicMed icine, S ichuan University, Chengdu 610041,
China)
Abstrac t:OBJECTIVE　To estab lish am e thod to de term ine ga llic acid in Suxiao Zhix ie capsu le s. METHOD S　An RP - HPLC
m ethod was adopted w ith C18 co lum n(150 mm ×4. 6 mm , 5μm). The mobile phase consisted ofm e thano l - ace tonitrile - 0. 1% phos-
pho ric ac id (5：6：89) w ith de tection wave leng th a t 270 nm. RESULTS　The calibration curve showed a good linearity w ithin the
range o f 0. 1008 - 5. 0400 μg(r=0. 9999). The ave rage recove ry w as 99. 41% w ith RSD of 0. 57%(n =6). CONCLUSION　The
m ethod is accurate, sim ple and re liable fo r the qua lity control o f Sux iao Zh ix ie capsules.
K ey words:Sux iao Zh ix ie capsu le;Rhizom a B istortae;Ga llic ac id;HPLC
CLC num ber:R917　 D ocum ent code:A Artic le ID:1006 - 0103(2007)02 -0214 - 02
　　速效止泻胶囊收载于《卫生部药品标准》中药
成方制剂第十三册 ,由拳参等中药组成 ,具有清热利
湿 、收敛止泻等功效 ,用于治疗赤痢 、热泻 、肠炎等病
症 。原质量标准中未对拳参的质量进行控制 ,现采
用 HPLC法测定拳参中主要成分没食子酸的含量 ,
所用方法操作简便 、结果准确 、专属性好 ,为速效止
泻胶囊的质量标准的改进提供参考。
1　实验部分
1. 1　仪器与试药
LC - 10ATvp液相色谱仪包括 SPD - 10Avp检
测器 , N2010色谱工作站(日本岛津 );BP211D电子