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菝葜提取物对 Hut-78 细胞 Bcl-2 基因转录水平的影响*
高 莉1，彭晓明1，霍仕霞1，赵 茉2，唐晓琴1，闫 明1
(1．新疆维吾尔医药研究所，乌鲁木齐 830049;2．石河子大学生命科学学院，832003)
［摘 要］ 目的 探讨菝葜提取物对 Hut-78 细胞 Bcl-2 基因转录水平的影响。方法 利用半定量逆转录-聚合酶
链反应(RT-PCR)测定给药后各组的吸光度值，计算各组的 Bcl-2 /GAPDH 值，从而分析 Bcl-2 基因转录水平的变化。结
果 菝葜提取物对 Bcl-2 基因的转录水平具有下调作用，药物浓度在 8 μg·mL-1时的效果最为明显。结论 该菝葜提取
物可降低 Hut-78 细胞的 Bcl-2 基因的转录。
［关键词］ 菝葜;Hut-78 细胞;Bcl-2 基因
［中图分类号］ R285． 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1004 － 0781(2010)08 － 0993 － 03
The Effect of Extraction of Smilax china L． on Transcription Level of Bcl-2 Gene in Hut-
78 Cells
GAO Li1，PENG Xiao-ming1，HUO Shi-xia1，ZHAO Mo2，TANG Xiao-qin1，YAN Ming1(1． Uighur Traditional
Medical Institution of Xinjiang，Urumqi 830049，China;2． Life Science College of Shihezi University，Shihezi
832003，China)
ABSTRACT Objective To investigate the effect of Smilax china L． extraction on the transcription level of Bcl-2 gene in
Hut-78 cells． Methods The light density of of each group by semi-quantitative RT-PCR was measured after being treated，to
analyze the change of the transcription level of Bcl-2 gene by calculating Bcl-2 /GAPDH． Results The extraction of Smilax
china L inhibited the transcription level of Bcl-2 gene，and showed the best at a concentration of 8 μg·mL-1 ． Conclusion
The extraction of Smilax china L could reduce the transcription level of Bcl-2 gene in Hut-78 cells．
KEY WORDS Smilax china L;Hut-78 cell;Bcl-2 gene
菝葜(Smilax china L．)是百合科菝葜属的一种多
年生落叶攀援灌木，其药用根茎具有消肿镇痛、祛风利
湿、活血化瘀及抗肿瘤等作用［1］。维吾尔医在对银屑病
患者的治疗中，菝葜被作为临床最常用药物之一使用，
经过多年临床实践用药证明其治疗效果十分显著。已
有研究报道认为，菝葜还具有治疗免疫性疾病、参与体
·399·医药导报 2010 年 8 月第 29 卷第 8 期
内免疫活动调节的活性［2-3］。笔者在本研究中通过研究
菝葜提取物对人 T 淋巴细胞株—Hut-78 细胞 Bcl-2 基
因转录水平的影响，为进一步揭示菝葜该提取部位对
Hut-78细胞增殖影响与 Bcl-2 基因转录水平之间的相
关性以及菝葜在银屑病治疗中的药效学和作用机制奠
定基础。
1 材料
1． 1 细胞培养 Hut-78 细胞系购自中国科学院细胞
库。将 Hut-78 细 胞 接 种 于 含 10% 胎 牛 血 清、
100 U·mL-1 青 霉 素 和 100 U · mL-1 链 霉 素 的
RPMI1640 培养基中，置于 37 ℃，体积分数 5%的二氧
化碳培养箱中培养。
1． 2 主要试剂 RPMI1640 培养基为 GIBCO产品，胎
牛血清购于杭州四季青生物工程科技有限公司，噻唑
蓝(MTT)、ConA(刀豆蛋白)购自 Sigma 公司，氨苄西
林和硫酸链霉素购自 Amersco公司，TIANScript RT Kit
TIANScript cDNA 第一链合成试剂盒，Marker，PCR
Master Mix，Taq 酶购自北京天根生物科技有限公司，
TRIpure LS Reagent总 RNA抽提试剂购自北京百泰克
生物科技有限公司。
1． 3 引物 GAPDH 引物:上游 5 ＇-GACCACAGT-
CCATGCCATCAC -3 ＇，下游 5 ＇- TGAGGTCCACCACC-
CTGTTGC-3 ＇;Bcl-2 引物:上游 5 ＇-CTCGTCGCTACC-
GTCGTGACTTCG-3 ＇，下游 5 ＇- CAGATGCCGGTTCAG
GTACTCAGTC-3＇，以上引物均由上海生工生物工程有
限公司合成。
1． 4 实验用药物 菝葜药材购自新疆本草堂中药饮
片有限公司，经新疆维吾尔医药研究所斯拉甫·艾白
主任药师鉴定，确为百合科菝葜属植物菝葜。并由新
疆维吾尔医药研究所基础医学研究室制备药材提取
物。药物制备方法:菝葜粗粉，加入 10 倍量石油醚，回
流提取 2 次，每次 2 h。提取液浓缩，冷冻干燥至浸膏。
2 方法
2． 1 Hut-78 细胞给药 称取菝葜提取物浸膏 0． 2 g，
［收稿日期］ 2009 － 12 － 28 ［修回日期］ 2010 － 02 － 05
［基金项目］ * 新疆维吾尔自治区自然科学基金项目(基金
编号:2009211B38) ，国家科技支撑计划项目(基金编号:
2007BAI48B06)
［作者简介］ 高 莉(1981 －) ，女，新疆乌鲁木齐人，助理
研究员，在读博士，研究方向:分子药理。电话:0991 －
2565663，E-mail:gaoli_535@ 163． com
［通讯作者］ 闫 明(1959 －) ，男，陕西西安人，研究员，硕
士，从事新药研究工作。电话:0991 － 2574309，E-mail:
yanming21cn@ 163． com。
加入二甲亚砜(DMSO)1 mL 超声溶解，0． 22 μm 的有
机微孔滤头过滤除菌除杂质。根据笔者前期在菝葜提
取物 对 Hut-78 细 胞 增 殖 作 用 的 研 究 中 发 现，
200 μg·mL-1(相当于生药量 41． 667 mg·mL-1)的菝
葜石 油 醚 提 取 物 可 将 Hut-78 细 胞 全 部 杀 死，
8 μg·mL-1的药物对 Hut-78 细胞的抑制作用最为明
显，故细胞给药药物浓度设定为 16，8 和 4 μg·mL-1
(相当于生药量 3． 333，1． 667，0． 833 mg·mL-1)。离
心收集细胞，调节细胞浓度至每毫升 1 × 106 ～ 10 × 106
个，转入 6 孔板(每孔2 mL) ，加入药液(终浓度为 16，8
和4 μg·mL-1)200 μL和 ConA(终浓度为 5 mg·L-1)
400 μL。于 37 ℃的二氧化碳培养箱中培养 48 h。
2． 2 给药后 Hut-78 细胞的 Bcl2 基因转录水平的变
化 根据 TRIpure LS Reagent 总 RNA 抽提试剂说明
书，提取给药后 Hut-78 细胞总 RNA，测定 RNA 浓度，
并将各组 RNA 浓度调节一致。按 TIANScript RT Kit
TIANScript cDNA第一链合成试剂盒说明书进行 RT-
PCR。PCR反应条件为:94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s，55 ℃
45 s，72 ℃ 45 s，30 个循环后 72 ℃延伸 10 min，然后冷
却至 4 ℃。吸取 10 μL PCR产物于 1%的琼脂糖凝胶
进行电泳。紫外透射仪下观察结果并摄像，通过
Tannon凝胶成像系统测定条带吸光度值。计算 Bcl-
2 /GAPDH比值，并利用 Excel2003 处理数据。
3 结果
3． 1 Hut-78 细胞总 RNA 的完整性检测 提取的总
RNA经 1%的琼脂糖凝胶电泳，于凝胶成像系统中观
察后，发现均可见清晰的 3 条带，分别为 28 s，18 s 和
5 s RNA(图 1) ，表明从 Hut-78 细胞中提取的总 RNA
无明显降解，可以进行下一步的 RT。
3． 2 给药后 Bcl-2 基因转录水平的变化 Bcl-2 基因
RT-PCR的电泳结果见图 2。菝葜低、中、高剂量组、A
值分别为(0． 576 6 ± 0． 038 8) ，(0． 523 1 ± 0． 036 9) ，
(0． 612 8 ± 0． 047 8) ，正常对照组 A 值为(0． 619 2 ±
0． 047 1)。与正常对照组比较，3 个剂量给药组的 Bcl-
2 基因转录水平均下降。且中剂量给药组对该基因的
转录影响最为明显(P ＜ 0． 01) ，这与笔者前期实验中
MTT法测定给药后 Hut-78 细胞增殖表现为显著抑制
的结果是一致。同时，高剂量和低剂量给药组的 Bcl-2
基因转录水平也出现了不同程度的下降(P ＜ 0． 05) ，
且给药剂量与该基因的转录水平下降程度并不存在正
负相关性。
4 讨论
细胞增殖变化主要通过其分裂速度和凋亡速度调
节。当细胞在外界药物和环境的作用下，细胞分裂的
·499· Herald of Medicine Vol. 29 No. 8 August 2010
图 1 Hut-78 细胞总 RNA电泳图
1． CK;2． 4 μg·mL-1;3． 8 μg·mL-1;4． 16 μg·mL-1
Fig． 1 Electrophoretogram of total RNA in Hut-78 cell
1． CK;2． 4 μg·mL-1;3． 8 μg·mL-1;4． 16 μg·mL-1
图 2 给药后各组 Bcl-2 转录水平的变化
1 ～ 3． CK;4 ～ 6． 4 μg·mL-1;7 ～ 9． 8 μg·mL-1;10 ～ 12． 16
μg·mL-1
Fig． 2 The transcription level change of Bcl-2 gene after
administration
1 ～ 3． CK;4 ～ 6． 4 μg·mL-1;7 ～ 9． 8 μg·mL-1;10 ～ 12． 16
μg·mL-1
速度快于其凋亡的速度时，其细胞外在表现为促进增
殖;反之，则为抑制。细胞凋亡与增殖是生物体内一对
并存的矛盾，正常情况下二者维持动态平衡，因而细胞
凋亡与细胞的增殖变化是紧密相关的。Bcl-2 基因是
与细胞凋亡最为紧密相关的基因之一［4-5］。它是一种
凋亡抑制基因，可以抑制多种因素包括辐射诱导的细
胞凋亡，故也称存活基因，该基因定位于人染色体的
18q21． 3，由 230 kb 组成，含有 3 个外显子，正常情况
下不表达或低表达［6-7］。Bcl-2 是许多生理和病理凋亡
的关键性调节因子，在细胞凋亡调节的共同通道上起
决定作用［8-9］。
笔者在本研究中发现 Hut-78 细胞在给药后，其
Bcl-2 基因转录水平发生下降，这也揭示出菝葜的该提
取物对 Hut-78 细胞增殖抑制可能是由该细胞的凋亡
以及 Bcl-2 基因转录水平下降所引起的。因此，菝葜
在银屑病治疗过程中可能涉及到免疫抑制调节的作
用。T淋巴细胞增殖效果决定了效应淋巴细胞的数量
和机体免疫应答反应的强度，反映了机体的细胞免疫
状态。因而淋巴细胞增殖实验的结果是细胞免疫的一
个测定指标［10］。目前对于银屑病治疗的药物中，有相
当一部分是通过其免疫调节抑制，通过抑制 T 细胞活
化及增殖来达到对银屑病的治疗。因而，本研究为进
一步揭示菝葜该提取部位对 Hut-78 细胞增殖影响与
Bcl-2 基因转录水平之间的相关性以及菝葜在银屑病
治疗中的药效学和作用机制奠定基础。
［DOI］ 10． 3870 /yydb． 2010． 08． 005
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