全 文 ：藏药五脉绿绒蒿对小白鼠实验性肝损伤保护作用的研究
丁　莉 ,李锦萍
(青海师范大学生命与地理科学学院 ,西宁 ,810008)
　　　　摘　要:为了探讨五脉绿绒蒿对小鼠实验性肝损伤的保护作用 ,采用一次性腹腔注射四氯化碳花生油(0.12%)方法
制作染毒小鼠模型 ,醋氨酚造成小鼠肝坏死模型;分别给予不同剂量五脉绿绒蒿剂对模型动物进行干预性保护 , 测定不
同实验组小鼠的血液生化指标 , 并观察醋氨酚中毒对小鼠生存率的影响。 结果表明:五脉绿绒蒿剂能降低模型小鼠
ALT、AST活性 , 并能提高醋氨酚中毒的小鼠生存率 ,对模型小鼠实验性肝损伤具有一定的保护作用。
关键词:五脉绿绒蒿;四氯化碳;肝损伤
中图分类号:S853.72　　　　　　文献标识码:A　　　　　　文章编号:1003-7950(2007)04-0007-02
Study on Protective Effect of Meconopsis quintuplinervia Regel on Experimental Hepatic Injury in Micl
DING Li et al
(College of Biology and Geography Sciencls ,Qinghai Normal University ,Xining ,810008)
　　Abstract:The toxic model of micl was producted by means of peritoneal injection using earthnut oil with 0.12% carbon
tetrachloride and the hepatic necrosis model of micl was producted using p-acltaminophenol to study the protective effect of
Moconopsis quintuplinervia Regel on the experimental hepatc injury in micl.The Meconopsis quintuplinervia Regel qiven in
defferent dose to conducl the interfering protection to the model micl.The blood biochemical indexes of micl in defferent
experimental groups were measured.The effect of p-acetaminophenol in toxication on the survival rate was observed.The results
showed that the activity of ALT and AST in serum of model micl was dicreased and the survival rate of micl with p-
acetaminophenol intoxication was increased , suggesting Meconopsis quintuplinervia Regel has the prolective effect to a certain
degree on the experimental hepatic injury in model micl.
Key words:Meconopsis quintuplinervia Regel;Carbon tetrachloride;Hepatic injuty
　　五脉绿绒蒿(Meconopsis Quintupinenia Regels)属罂粟科植物 ,分布于我国西藏 、陕西 、甘肃 、青海 、四川等地 ,其干燥全药是传统的藏药 ,有清热解毒 、镇痛 ,消炎
利尿的功效〔1〕其花入药 ,具有镇痛息风 、定喘 ,用于治疗肝炎 ,胆囊炎 ,肺炎 ,肺结核 ,胃溃疡 ,小儿惊风咳喘
等〔1〕 ,具有广阔的应用前景。本实验研究五脉绿绒蒿对小鼠血清转氨酶含量及对醋氨酚中毒的小鼠生存率的影响 ,探讨五脉绿绒蒿的肝保护作用 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　动物　昆明种小白鼠雌雄各半 ,体重 16 ～ 20g(由兰州生物制品厂提供)
1.1.2　主要药品和试剂　醇提取的五脉绿绒蒿浸膏;四氯化碳试剂(分析纯 ,用花生油配制成含 CCl40.12%
的试剂 ,由广东西陇化工厂生产);食用鲁花花生油;吐温80;谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)试剂盒(由南京建成生物工程研究所提供)。
1.1.3　主要仪器和设备 721分光光度计;高速冷冻离心机;匀浆机;低温冰箱;电热恒温水浴锅等。
1.2　方法
1.2.1　五脉绿绒蒿药物的提取　将该药粉碎称取 1kg加8L食用酒精回馏煮 2h ,滤出提取液 ,再加 8L 的食用酒精重复 3 次合并提取液并浓缩(回收酒精)在
60℃的烘箱里烘干 ,实验时用花生油:吐温 80∶水为 1∶
1∶8配制生药:浓度为 0.47g/ml 、0.18g/ml 、0.06g/ml。
1.2.2　对急性肝损伤小鼠的处理　将 50只小鼠在实验室饲养 2d后 ,按体重随机分为空白对照组 、CCl4 模型组 、低剂量药物组 、中剂量药物组 、高剂量药物组 ,每组 l0只 ,让小鼠自由摄取常规颗粒状饲料和自来水。空白对照组不做任何处理 ,CCl4 模型组用药物助溶剂(花生油∶吐温 80∶水为 l∶l∶8)以 10ml/kg剂量灌胃 7d ,
药物组高 、中 、低三个剂量组分别按 6.4g/kg 、2.1g/kg 、
0.75g/kg体重灌胃给药 7d ,末次给药后 2h ,除空白对照组的小鼠外 ,其它四组均按以 10ml/kg 的剂量按体重一次性腹腔注射 0.12%CC14花生油溶剂 ,禁食不禁
水 ,20h后以眼球摘除法取血 ,分离血清。
1.2.3　对醋氨酚中毒小鼠的处理　小白鼠 40只 ,随机分为 4组 ,对照组 ,高 、中 、低剂量组 ,每组 10只 ,连续灌胃给药 5d ,于末次给药 0.5h后 ,所有均腹腔注射醋氨酚400mg/kg ,观察记录20h内小白鼠的死亡情况。
1.2.4　血清样处理　在 3500r/min离心15min ,取上清液低温保存。
1.2.5　ALT活性测定　参照改良赖氏法测定〔2〕血清中的ALT能与丙氨酸和 a-酮戊二酸反应生成丙酮酸及谷氨酸 ,丙酮酸与 2 ,4-二硝基苯肼生成 2 , 4-二硝基苯腙在碱性液中显棕红色 ,在 505nm处有最大吸收值。先用丙酮酸标准液作一标准曲线 ,然后测定样品的吸光度 ,查阅标准曲线 ,并且乘以血清稀释倍数 , 计算
ALT 的活力。
1.2.6　AST活性测定　参照改良赖氏法测定〔2〕 ,血清中的AST能与Asp和 a-酮戊二酸反应生成草酰乙酸和
谷氨酸 ,前者与 2 ,4-二硝基苯肼生成的 2 , 4-二硝基苯腙在碱性液中显棕红色 ,在505nm 处有最大吸收值 ,同上法计算AST 的活力。
1.2.6　数据处理　所有实验结果用 X ±SE表示采用
t检验。
2　结果
2.1　对四氯化碳所致小白鼠急性肝损伤(血清 ALT和AST的含量)的影响从上表可看出 ,CC14 肝损伤模型组小鼠血清 ALT和AST 的活性明显高于空白对照组;与模型组比较 ,药物组小鼠血清 ALT 和 AST 的活性明显降低 ,且中 、
收稿日期:2007-04-22
7　 青海畜牧兽医杂志 37卷 4期
4 2007 Chinese Qinghai Journal of Animal and Veterinary Sciences Vo1.37 ,No.4
低剂量的效果较好。
表 l 五脉绿绒蒿提取液对 CC14 肝损伤小鼠血清 ALT和 AST的影响
组别 小鼠数量(只) ALT(IU/ L) AST(IU/L)
空白对照组
药物(低剂量)组药物(中剂量)组
药物(高剂量)组模型组(花生油+CC14)
10
10
10
10
10
113.58±25.32
129.14±29.33＊＊
103.7±73.15＊◎
157.45±109.88
656.98±319.52◎◎
112.51±19.27
126.12±48.32＊＊
196.4±22.72＊＊
216.12±129.26＊＊
412.64±151.06◎◎
　　与空白对照组比较:◎p<0.05 ◎◎p<0.01 与模型组比
较:＊p<0.05＊＊p<0.01。
2.2　对醋氨酚中毒的小白鼠致死率的影响:结果见表
2。　　结果显示:对照组致死率达 100%,而给药组随着剂量的增加生存率呈逐渐升高的趋势 ,复方枸杞能提高醋氨酚中毒的小鼠生存率。
表 2 五脉绿绒蒿提取液对醋氨酚中毒小鼠存活率的影响
组别 空白对照组 低剂量药物组 中剂量药物组 高剂量药物组
小鼠数量(只) 10 10 10 10
中毒后小鼠
生存率(%) 0 32 64 75
3　讨论本实验表明 CC14 对小鼠肝组织有损伤作用 ,表现
在血清中 ALT 、AST 的含量比空白对照组的有显著性的增高 。CC14 是一种典型的肝脏毒物 ,经肝脏微粒体
细胞色素 P -450 激活后 , 发生均裂产生自由基(CC13)。一方面 CC13 可以攻击细胞膜上的磷脂分子 ,
引起脂质过氧化 ,并与膜蛋白结合 ,破坏了膜的结构和功能;另一方面 CC14 抑制内质网上的钙离子泵 ,使钙离子升高 ,从而激活肝细胞膜上的磷酸化酶 ,引起脂质
过氧化 ,导致肝细胞膜损伤〔3〕 。当肝细胞受损时 ,由于肝细胞内的转氨酶的浓度比血清中的高 ,胞浆内的
ALT和 AST 因浓度差释放入血 , 造成高血清 ALT 和
AST ,故血清中的 ALT 和 AST 的含量是反映肝受损的敏感指标 ,也能反映肝细胞损伤的程度。CC14 可引起化学性肝损伤 ,导致肝细胞变性 、坏死 、间质细胞浸润 ,也能引起肝纤维化 ,肝纤维化又是大多数慢性肝病共有的病理特征 ,是进一步向肝硬化发展的主要中间环
节〔4〕 。肝纤维化的防治是当今肝病治疗的难点之一 ,也是国际上研究的热点 。目前治疗肝病缺乏理想药物 ,国外对晚期肝硬化唯一有效的方法是肝移植 ,即使在发达国家 ,由于可利用的捐献器官少以及潜在接受者的病情复杂限制了这种技术应用 。西药如干扰素 、阿糖腺苷虽然有一定疗效 ,但价格昂贵 ,难以普及 ,因此寻找有效而实用的中草药防治肝病具有十分重要的意义 ,有着广阔的前景。五脉绿绒蒿能防止 CC14 引起的小鼠血清 ALT 和
AST 的升高;其保护肝损伤的作用可能与五脉绿绒蒿中所含的多糖 、黄酮类物质有关。对藏药五脉绿绒蒿化学成分进行了研究 ,用光谱方法分析鉴定了 7种黄酮类成分的化学结构 ,这些化合物均系首次从绿绒蒿
属植物中发现〔5〕。藏药五脉绿绒蒿中的有效成分在一定程度上能保护肝细胞膜结构 ,减少自由基的攻击而减轻肝细胞的损伤 ,对实验性肝损伤具有较好的保护和治疗作用。参考文献〔1〕纪兰菊 , 廖志新 , 孙洪发.青海龙胆科部分藏药植物化学成分研究进展〔J〕.高原生物学集刊 , 2002 , 243—249.〔2〕杨昌国 ,许叶 , 等.转氨酶测定标准化的意见〔J〕.临床检验杂志.1992 , 10(4):170.〔3〕龚峻梅 ,朴英杰 , 等.急性 CC14 肝损伤的研究进展〔M〕.国外医学.生理 , 病理学与临床分册.2001 , 4(22)∶308—309.〔4〕中华医学会传染病与寄生虫学分会 , 肝病学会联合修订.病毒性肝炎防治方案〔J〕.中华肝脏病杂志;, 2000 , 8(6)∶
324—329.〔5〕尚小雅 ,张承忠 , 李冲 ,等.藏药五脉绿绒蒿中黄酮类成
分的分离与鉴定〔J〕.中药材 , 2002 , 25(4)∶250—252.
·经验交流· 怎样养好肉用种公牛
周　倩(青海省家畜改良中心 ,西宁 ,810016)
　　　　中图分类号:S823　　　　　　文献标识码:C　　　　　　文章编号:1003-7950(2007)04-0008-01
　　改革开放以来 , 农村的经营体制发生了根本的变化 ,过去单一劳作的耕牛 , 正沿着役肉兼用的方向发
展。为加速役牛的杂交改良 ,除了选好适合当地的肉用种公牛外 ,必须进行科学的饲养管理。对种公牛饲
养管理的基本要求是:保证种公牛体格健壮 , 性欲旺盛 ,精液优良 ,膘情中上等。
1　种公牛的饲养技术根据种公牛营养需要的特点 , 饲料应营养全面 ,适
口性好 ,易消化 ,精、粗 ,青饲料要搭配合理 , 日粮体积不宜过大 ,质量差的粗饲料应少喂 ,种公牛的营养应根据它的体重 ,体况及配种负担来考虑 ,精饲料中应含有
较高的蛋白质 , 足量的矿物质和维生素。蛋白质料应选生物学价值高的动植蛋白如鱼粉、血粉和豆饼类。
种公牛的日粮可用青草或青干草 , 块根类及混合精料组成 ,精料以占营养价值的 40%左右为宜。具体喂量
为成年公牛喂精料 0.4～ 0.6kg kg.d体重 ,优质干草 1～ 1.5kg kg.d ,胡萝卜 0.8～ 1kg。在夏季可用 3kg鲜草
代替 1kg 干草 ,在冬季可用 3kg 青贮或 2～ 2.5kg 块根代替 1kg 干草。在密集采精期每头种公牛可补鸡蛋 8～ 10个 d , 加骨粉 100 ～ 150g ,食盐 20 ～ 80g , 同时要保证每天供给充足和清洁的饮水。种公牛混合精料配合
大致是:大麦 、玉米 30%, 糠麸类 35%, 豆饼、油饼
25%,鱼粉 、血粉 5%,骨粉 3%, 食盐 2%。公牛喂 3次 d ,饲喂顺序为先精后粗 , 青贮料含酸较多 , 喂量不超过5 ～ 10kg d ,否则会影响配种和精液品质。
2　种公牛的管理要管理好种公牛 ,必须了解其记忆力很强的特点 ,
公牛对接触过的人和事能记清楚 , 如兽医打针或打过
它的人 ,再接近它时常有很反感的表现。因此对养公牛要固定专人饲养 , 通过饲喂、饮水、刷试等接触来摸
清公牛的脾气 , 并使人畜亲和 ,以便于管理。管理种公牛的要领是恩威并举 ,驯教为主 ,饲养员
平时不得随意鞭打和虐待公牛 , 但要掌握令其驯服的技能 ,当公牛惊恐时 ,要用温和的声音使之安静。
拴系与牵引:小公牛 1岁左右便穿鼻带上鼻环 ,鼻环向着牛头上部拴系 ,以使公牛采食时不会感到不便。
经常进行牵引训练 , 养成温顺的性格 ,对种公牛应坚持双绳牵引 ,即由两个人分别在牛的左右两侧牵引 , 人和牛保持一定的距离。拴系要牢固 , 否则易脱缰发生事
故 ,同时对鼻环要经常检查 ,发现损坏 , 要立即更换。运动:种公牛必须坚持运动 ,要求上、下午各进行
一次 ,每次 1.5～ 2h , 运动方式可采用牵引或从事轻便的使役。适当的运动可保证种公牛举动的活泼 ,性情
温顺 ,性欲旺盛 , 精液品质优良 , 又可防止肢蹄变形和牛体变肥。
刷拭:要坚持每天定时进行刷拭 ,经常保持牛体清洁 ,刷拭的重点是两角间 , 额部和颈部等处的尘埃污
垢 ,在夏季应进行淋浴 , 边淋边刷 , 浴后擦干 , 冬季干刷。
采精(配种):种公牛的采精一般以每周 2次为宜 ,每次射精 2次 ,间隔5～ 7min , 若采精次数过多 ,不仅影
响健康 ,还会使精液品质下降。护蹄:饲养人员要随时检查肢蹄有无异常 ,要经常
冲洗蹄部 , 保持蹄壁和蹄叉清洁 , 发现蹄病要及时治疗 ,每年春秋各修蹄一次。
收稿日期:2007-03-20
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青海畜牧兽医杂志 　2007年第 37 卷第 4 期(总第 190 期)